Les 3 èmes journées SNV, Béjaia les 11 et 12 Novembre 2014

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Sévérine Laurent
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1 Identification des souches cliniques de Klebsiella pneumoniae et étude de leur profil de résistance aux différentes familles d antibiotiques au CHU de Batna Houfani Aicha Asma 1*, Ghodbane Imene 2 et Benmehidi Messaoud 3 1 Laboratoire de Microbiologie Appliquée, Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie, Université A. Mira-Bejaia, 2 Faculté des Sciences, Département de Sciences de la Nature et de la Vie, Université Hadj Lakhdar Batna, 3 Faculté de Médecine, Centre Hospitalo- Universitaire de Batna, laboratoire central de Microbiologie, Batna Résumé *a.a.houfani@gmail.com Les résistances aux antibiotiques sont en constante augmentation dans le monde entier. Klebsiella pneumoniae est une des bactéries les plus souvent isolée en milieu hospitalier. La résistance multiple aux antibiotiques est commune chez cette espèce. 43 souches ont été recueillies de différents prélèvements (pus, urines, sang, ) et services (brûlés, chirurgie, médecine, ) au cours d une étude s étalant du mois de Mars 2013 à Juin 2013 en vue d étudier les aspects épidémiologiques, bactériologiques et cliniques de K. pneumoniae au niveau du laboratoire de microbiologie du CHU de Batna. L identification des bactéries isolées a été faite sur la base des caractères morphologiques, culturaux, biochimiques et leur sensibilité aux antibiotiques. Sur les 43 souches de K. pneumoniae, la majorité sont issus des services d hospitalisation. Le service de chirurgie enregistre le taux le plus important de souches de K. pneumoniae avec une fréquence de 30,23%, le sexe ratio était de 2,07 et la tranche d âge la plus importante concerne les patients âgés de ans (34,88%). Ce sont les prélèvements de plaie qui occupent la place de vedette avec une fréquence de 26%. L antibiogramme effectué sur les souches cliniques de K. pneumoniae a révélé que la plupart d entre-elles étaient multi-résistantes. 39 (91 %) ont été productrices de bêtalactamases à spectre (BLSE). Il est important d assurer l'identification rapide et la notification des nouvelles souches hautement résistantes de K. pneumoniae dans le but de mettre en œuvre des mesures de contrôle renforcées. Mots-clés : Klebsiella pneumoniae, antibiogramme, résistance aux antibiotiques, bêtalactamases à spectre élargi (BLSE), milieu hospitalier. Introduction Dans leur milieu naturel, les bactéries peuvent se défendre contre les différents stress de l environnement. Le problème, c'est qu'elles ont aussi mis en place des stratégies pour se protéger contre des substances pharmaceutiques introduites par l'homme : les antibiotiques. La phase d industrialisation de la production des antibiotiques a pu faire croire, dans les années 1λ50 à 1λ60, à l éradication des maladies infectieuses bactériennes. Mais, très vite sont survenus des échecs thérapeutiques dus à des souches «devenues» résistantes ((Joffin et Leyral, 2006). L usage intensif des antibiotiques provoque la sélection des souches multirésistantes qui posent de graves problèmes thérapeutiques (Joly et Reynaud, 2002). Un des exemples le 44

2 plus frappant pour illustrer ce propos est la bactérie du genre Klebsiella dont l aptitude à acquérir des résistances aux antibiotiques est particulièrement importante. Les Klebsiella sont des bactéries pathogènes opportunistes (Joly et Reynaud, 2002). Les infections qu elles provoquent sont majoritairement nosocomiales (Podschun et Ullmann, 1998). Elles sont surtout urinaires et pulmonaires ; les infections systémiques sont moins fréquentes mais grave (Joly et Reynaud, 2002). Depuis plusieurs années, il y a l émergence de cette bactérie en Algérie et dans d autres pays, qui motive les recommandations de précautions et des mesures d isolement précoce pour pouvoir limiter sa dissémination. Cette situation nous a amené à étudier l état actuel de cette bactérie au centre hospitalier universitaire (CHU) Benflis Touhami de Batna. Matériel et méthodes Echantillons étudiés Notre travail a porté sur 43 souches cliniques recueillies à partir de 50 prélèvements qui ont été issus de malades hospitalisés ou provenant de malades de consultation externe. Ces souches sont issues de différents prélèvements et proviennent de différents services d hospitalisation. Identification des souches de Klebsiella pneumoniae isolées Après isolement sélectif sur le milieu MacConkey et examen microscopique par coloration de Gram, les souches de Klebsiella ont été identifiées par galerie biochimique classique par l utilisation des milieux TSI, mannitol-mobilité, citrate de Simmons et uréeindole. Pour avoir une assurance des souches étudiées, les souches isolées ont fait l objet d une identification biochimique avec la galerie biochimique miniaturisée API 20 E selon les instructions du système API 20 E (biomérieux, France). Détermination de la résistance aux antibiotiques Chaque souche identifiée a été soumise à un antibiogramme par la méthode des disques selon les recommandations de l OMS (Anonyme, 2011). Un antibiogramme comportant 11 antibiotiques a été réalisé. Parmi les β-lactamines, les molécules suivantes sont testées : la céfazoline, la céfoxitine, le céfotaxime et l imipénème. Les pénicillines testées sont l amoxicilline et la ticarcilline. Comme inhibiteurs de β-lactamines, nous avons utilisés l association ticarcilline-acide clavulanique. Les aminoglycosides testés sont : la gentamicine et l amikacine. Comme phénicolés, le chloramphénicol et nous avons également testé la colistine-sulfate (CS) de la famille des polypeptides. Recherche de β-lactamases à spectre élargi (BLSE) Pour la recherche de BLSE, un disque d inhibiteurs de β-lactamases (ticarcilline + acide clavulanique) est déposé à 30 mm centre à centre d un disque de céfotaxime. Résultats et discussion Distribution des souches cliniques de Klebsiella Sur 50 prélèvements, 43 souches de Klebsiella ont été recueillies. 40 hospitalisés et 3 externes seulement. Ceci s explique par le fait que la majorité des prélèvements soit issus des 45

services d hospitalisation. Ceci concorde avec les données de la littérature où K. pneumoniae est la plus fréquemment retrouvée en clinique humaine (Savita et al., 2012).

3 services d hospitalisation. Ceci concorde avec les données de la littérature où K. pneumoniae est la plus fréquemment retrouvée en clinique humaine (Savita et al., 2012). Identification des souches cliniques de Klebsiella pneumoniae L identification de nos souches a été faite sur la base de leurs caractères morphologiques, culturaux et biochimiques. Pour la présomption «à priori» du germe, nous avons pu établir une identification acceptable des souches étudiées. Cependant, pour confirmer qu'il s'agit effectivement de la souche K. pneumoniae avec une bonne fiabilité de l'identification, nous avons recours à l identification sur galerie miniaturisée API 20 E. L analyse en galerie API 20E a permis de caractériser 4 profils numériques différents (Fig. 1), le , le (urée-), le (inositol-), le (LDC-). Parmi ces profils, le est le prédominant ; il est retrouvé dans 33 cas sur les 43 ; soit une fréquence de 76,74%. Fig. 1. Fréquence des profils en API 20 E des 43 souches de K. pneumoniae Étude du profil sensibilité et de la résistance aux antibiotiques de K. pneumoniae L antibiogramme effectué sur chaque souche de K. pneumoniae isolée a permis d étudier leur comportement vis-à-vis de plusieurs antibiotiques et la plupart d entre-elles se sont révélées être multi-résistantes. 46

4 Fig. 2. Profil de sensibilité et de résistance des 43 souches isolées de K. pneumoniae Les résultats de ce travail comme le montre la figure 2 ci-dessus reflètent l épidémiologie de l antibiorésistance dans notre région. La consommation importante de certaines molécules dans notre pays est responsable en partie du taux élevé de résistance à ces molécules. Taux des souches K. pneumoniae productrices de BLSE Dans notre étude, 91% des souches de K. pneumoniae isolées sont des BLSE (Fig. 3). Les épidémies hospitalières de souches de K. pneumoniae BLSE sont observées depuis le milieu des années 1980 dans de nombreux pays. En effet, les BLSE sont codées sur des plasmides, ce qui facilite l échange entre les différentes bactéries (Zingg, 2008). Conclusion Fig. 3. Taux des souches K. pneumoniae productrices de BLSE Les résultats de cette étude permettent de fournir des données bactériologiques et cliniques sur K. pneumoniae, au niveau de l'hôpital universitaire de Batna. Il est important d assurer l'identification rapide et la notification des nouvelles souches hautement résistantes de K. pneumoniae dans le but de mettre en œuvre des mesures de contrôle renforcées. Il serait intéressant que ces souches de K. pneumoniae soient étudiées sur le plan génétique. La 47

5 caractérisation moléculaire de ces souches permettrait d étudier les différents mécanismes de résistance. Références Joffin J-N., Leyral G., Microbiologie technique, Dictionnaire des techniques. Ed. Centre régional de documentation pédagogique d Aquitaine, Joly B., Reynaud A., Entérobactéries Systématique et méthodes de diagnostic. Ed. Lavoisier (Paris), Podschun R., Ullmann U., Klebsiella spp. as nosocomial pathogens: Epidemiology, taxonomy, typing methods, and pathogenicity factors. Clin. Microbiol. Rev. 11 (4), Savita J., Rabindranath M., Nageshawari G., Mahadev U., Purbasha G., Kalpana A., Chanda V., Increasing incidence of multidrug resistance Klebsiella pneumoniae infections in hospital and community settings. Int. J. Microbiol. Res. 4 (6), Anonyme, Standardisation de l antibiogramme à l échelle nationale (médecine humaine et vétérinaire). Ed. Réseau Algérien de la Surveillance de la Résistance des Bactéries aux Antibiotiques-OMS, Zingg W., Entérobactéries productrices de bêta-lactamases à spectre élargi (BLSE) chez les enfants en Suisse. Swiss Paediatric Surveillance Unit,

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