Université de Lyon Laboratoire de Virologie et Pathologie Humaine Hospices Civils de Lyon. FluMeD. Protocole d'étude 02 février 2012

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1 Université de Lyon Laboratoire de Virologie et Pathologie Humaine Hospices Civils de Lyon FluMeD Validation de l effet antiviral du Midodrine identifié par l analyse de la signature transcriptomique cellulaire de l infection par les virus influenza A Protocole d'étude 02 février 2012 Numéro EudraCT : Numéro d enregistrement dans : NOM : ADRESSE : TEL.: FA : PROMOTEUR HOSPICES CIVILS DE LYON 3 Quai des Célestins Lyon cedex 2 valerie.plattner@chu-lyon.fr CENTRE D INVESTIGATION CLINIQUE DE LYON NOM : PROFESSEUR FRANÇOIS. GUEYFFIER ADRESSE : Coordonnateur CIC Hôpital Louis Pradel 28 Av Doyen Lépine Bron TEL. : FA : francois.gueyffier@chu-lyon.fr NOM : ADRESSE : TEL. : FA : NOM : ADRESSE : TEL. : FA : INVESTIGATEUR COORDONNATEUR PROFESSEUR BRUNO LINA Laboratoire de virologie Institut de microbiologie Centre de Biologie et de Pathologie EST 59, boulevard Pinel Bron Cedex bruno.lina@chu-lyon.fr RESPONSABLE SCIENTIFIQUE Docteur MANUEL ROSA-CALATRAVA Laboratoire de virologie et pathologie humaine, VirPath, EMR 4610 UCB-HCL, équipe VirCell, Faculté de Médecine RTH Laennec Rue Guillaume Paradin Lyon cedex 08 manuel.rosa-calatrava@laennec.univlyon1.fr 7, Rue Guillaume Paradin, Lyon Cedex 08, France. Tél: 33 (0) Fax : 33 (0) Courriel : manuel.rosa-calatrava@univ-lyon1.fr

2 Liste des équipes participantes - Biostatistiques Dr Muriel Rabilloud Sylvain Roche Service de Biostatistique des Hospices Civils de Lyon Laboratoire de Biostatistiques - Santé (UMR 5558) CNRS/Université Lyon 1 - Centre Hospitalier Lyon Sud - Bâtiment 4D Pierre-Bénite Cedex - Méthodologie et coordination de l étude Dr Catherine Cornu, Ségolène Gaillard Centre d Investigation Clinique Hôpital Cardiovasculaire Louis Pradel 28, Avenue du Doyen Lépine Bron Cedex - Laboratoires Professeur Bruno Lina (PU PH) Laboratoire de virologie - Institut de microbiologie CNR des virus influenzae, région sud Centre de Biologie et de Pathologie EST 59, boulevard Pinel Bron Cedex Docteur Manuel Rosa-Calatrava (PhD - HDR) Laboratoire de Virologie et Pathologie humaine VirPath UCBL-HCL EMR 4610, Faculté de Médecine RTH Laennec Rue Guillaulme Paradin, Lyon cedex 08

3 Synopsis Numéro EudraCT Titre complet Validation de l effet antiviral du midodrine identifié par l analyse de la signature de la transcriptomique de l infection par les virus influenza A recherche Promoteur Hospices Civils de Lyon, 3 Quai des Célestins, Lyon cedex 2 Professeur Bruno Lina Laboratoire de virologie - Institut de microbiologie Investigateur Centre de Biologie et de Pathologie EST coordonnateur 59 boulevard Pinel Bron Cedex Tél.: / 57 Fax : Responsable scientifique Justification de la pertinence de la recherche Docteur Manuel Rosa-Calatrava Laboratoire de Virologie et Pathologie humaine VirPath UCBL-HCL EMR 4610, Faculté de Médecine RTH Laennec Rue Guillaulme Paradin, Lyon cedex 08 Dans le cadre d un travail collaboratif avec l équipe du Dr. Jean-Jacques Diaz (UMR5534, CGMC, Lyon) et la plateforme TAGC (ERM206, Marseille) dirigée par le Dr. Catherine Nguyen, nous avons déterminé une signature transcriptomique «in vitro» de cellules épithéliales pulmonaires humaines, spécifique et commune à l'infection par différents virus influenza de type A humains (H1N1 A/New Caledonia/20/99 et H3N2 A/Moscow/10/99) et aviaires (H5N1 A/Vietnam/1194/2004, H5N2 A/Finch/England/2051/94 et H7N7 A/Chicken/Belgium/2003). Nous avons fait l'hypothèse que ces variations d'expression génique reflétaient un état cellulaire globalement favorable ("adapté") à une réplication optimale de ces virus. Sur cette base, nous avons postulé que l'inhibition et/ou l'inversion de cette signature transcriptomique, pouvait constituer un état cellulaire globalement défavorable au cycle réplicatif viral. Par des méthodes d analyses adaptées, nous avons ainsi sélectionné dans les bases de données publiques, des molécules ayant une autorisation de mise sur le marché, qui pouvaient induire après traitement de cellules ex vivo, une signature inverse à celle spécifique de l'infection par les virus influenza. La présence parmi ces molécules, de la ribavirine, connue pour son activité antivirale (Copegus et Rebetol, Gilbert BE, McLeay MT., MegaRibavirin aerosol for the treatment of influenza A virus infections in mice. Antiviral Res Jun;78(3):223-9), a ainsi constitué une première validation de notre stratégie de criblage. En revanche, les autres molécules sélectionnées présentaient des indications thérapeutiques autres que anti-virales. Nous les avons évaluées dans plusieurs tests cellulaires d'infection virale et certaines ont été caractérisées pour leur propriété antivirale, non seulement sur l'ensemble des virus influenza de référence (H1N1, H3N2, H5N2, H7N7 et H5N1), mais également sur le virus pandémique (A(H1N1)v) testé à posteriori. Ces résultats ont permis de valider notre stratégie de criblage et de caractérisation de molécules antivirales anti-influenza à large spectre. Ces résultats ont fait l objet d une publication (Josset L, Textoris J, Loriod B, Ferraris O, Moules V, Lina B, N'guyen C, Diaz JJ, Rosa-Calatrava M. Gene expression signature-based screening identifies new broadly effective influenza a antivirals. PLoS One Oct 4;5(10).) et du dépôt de deux

4 brevets d invention (FR n PCT/EP2010/ ; US 61/ ). Nous proposons dans cet essai clinique FluMeD de valider chez les patients, l activité antivirale du meilleur médicament candidat que nous avons identifié, le Midodrine, en termes de cinétique d élimination de la charge virale. Objectif principal : tester l efficacité du midodrine à dose usuelle recommandée versus groupe contrôle sans traitement d une infection à virus influenza A chez l adulte, en terme de cinétique virale. Objectif principal et objectifs secondaires Traitements étudiés Evaluation des bénéfices attendus pour les participants Evaluation des risques attendus pour les participants Effectifs et caractéristique s des participants Objectifs secondaires : - Evaluer les pourcentages de patients ayant une charge virale normalisée inférieure au seuil de 3 en RT-qPCR, à 48H et à 72 h dans les deux groupes, ainsi qu au 7 ème jour après le début du traitement. Ce dernier prélèvement permettra de s assurer de l absence de tout rebond de réplication virale. - Décrire l efficacité antivirale du midodrine dans le traitement d une infection à virus influenza définie par le délai d obtention d une négativation prolongée de l ARN viral (négativation de la RT-qPCR) ou en culture dans tous les prélèvements (négativation de la RT-qPCR). - Décrire la tolérance du midodrine. - Evaluer la fréquence de la réponse clinique au midodrine, la réponse clinique étant définie comme la disparition complète ou l atténuation des principaux symptômes de l infection à virus influenza. - Evaluer la dynamique de réplication virale dans les voies respiratoires avec le midodrine. - Analyser la fréquence de l émergence de virus présentant des mutations de résistances aux antiviraux dans chaque bras pendant et après traitement. Le médicament candidat à l étude est le Gutron, dont le principe actif est le chlorhydrate de midodrine, utilisé à la dose usuelle recommandée (7,5mg/J). Aucun traitement ne sera administré dans le groupe contrôle. La durée de traitement sera de 5 jours. Il n y a pas d avantage personnel attendu pour les participants. Cependant, une réduction de l incidence et de la durée des symptômes de l infection grippale peut être attendue. Les risques attendus sont ceux liés à l administration du midodrine : - une sensation de froid et un fourmillement fréquemment observés, - plus rarement, mictions impérieuses, exanthèmes, nausées, douleurs épigastriques, tachycardie, palpitations, céphalées, vertige, horripilation. A posologie élevée : Hypertension, - Une bradycardie et des troubles de la conduction ont été décrits lors de l'association du midodrine aux digitaliques. Les risques liés aux prélèvements par lavage nasal et par écouvillonnage nasal réalisés au cours de l étude sont négligeables voire nuls. Un léger inconfort peut être ressenti par le patient suite à la position particulière à adopter durant le prélèvement. 161 patients adultes (18-64 ans), sans pathologie chronique connue, présentant un syndrome grippal évoluant depuis moins de 42h, avec un diagnostic de grippe de type A confirmé et n ayant pas reçu de vaccination antigrippale durant l année de l étude pourront être inclus dans l étude. A l issue de la première saison grippale (au minimum, après inclusion de 45 à 60 sujets), un calcul de puissance sera effectué et permettra de décider de la poursuite ou non du projet

5 Justification éventuelle de l inclusion de personnes particulièreme nt protégées Modalités de recrutement des personnes Méthodologie retenue : critères de jugement, plan d étude, type d analyse, nombre de sujets nécessaires, analyses intermédiaires, règles d arrêt. jusqu à son terme. Sans objet Le recrutement sera réalisé par des médecins généralistes, qui bénéficieront de l aide du réseau des Groupes Régionaux d Observation de la Grippe (GROG). La zone géographique dans laquelle ce recrutement se déroulera est le Grand Lyon. Type d essai : Il s agit d une étude nationale multicentrique, randomisée, en ouvert selon le schéma thérapeutique suivant : - bras 1 : midodrine dose usuelle recommandée (7,5 mg/j) - bras 2 : aucun traitement Critère d évaluation principal : évolution de la cinétique virale selon les bras de traitement, soit la pente de la charge virale sur les 7 jours suivant le début du traitement. Les charges virales sont mesurées à 0, 2, 3, 5 et 7 jours après le début du traitement. Critères secondaires : - Pourcentage de patients avec charge virale normalisée inférieure au seuil de positivité de 3 en RT-qPCR, 48H, 72 H, 5 jours et 7 jours après le début du traitement. - Importance et durée des symptômes de l infection grippale. - Dynamique de la charge virale (fréquence, durée, et niveau de réplication virale) dans les prélèvements nasaux - Résistance virale et réduction de sensibilité des souches collectées - Incidence des effets indésirables : les évènements indésirables seront recherchés à chaque visite et feront l objet d un recueil tout au long de l étude. Aspects statistiques : Analyse principale : Un modèle de régression linéaire à effets mixtes sera mis en œuvre pour quantifier l effet du traitement sur l évolution individuelle de la charge virale. Ce modèle permet de prendre en compte la corrélation entre les observations successives d un même patient. Analyses secondaires : On estimera pour chaque groupe le pourcentage, avec son intervalle de confiance à 95%, de sujets : - ayant un portage viral nasal négatif en RT-qPCR à 48h et à 72h ainsi que 7 jours après le début du traitement. - ayant atteint une culture virale négative à 48h à 72h Le pourcentage de sujets dont les prélèvements seront négatifs de façon prolongée sera estimé dans chaque groupe. Le pourcentage obtenu dans le bras traité sera comparé au pourcentage du groupe placebo par un test de chi² ou un test exact de Fischer selon les effectifs attendus. Déroulement de Un modèle de régression linéaire généralisé à effets mixtes sera mis en œuvre pour quantifier l effet du traitement sur l évolution individuelle du niveau de réplication virale. Nombre de sujets nécessaires : Le calcul à partir des données disponibles et avec 10% de perdus de vue conduit à 161 patients.

6 l étude V1 H0 V1 bis H0+2H V2 H48 (+/- 6h) V3 H72 (+/- 6h) V4 H120 (+/- 6h) V5 H168 (+/- 48h) Médecin Investigateur IDE Examen clinique Eligibilité Test Diagnostique rapide de la grippe Consentement Randomisation Délivrance du traitement alloué Score composite d intensité des symptômes Prélèvement par lavage nasal pour RT-qPCR et culture Prélèvement par écouvillonage nasal pour RT-qPCR et culture Prise des traitements de l étude par le patient Observance Tolérance clinique Mise en place d un comité de surveillance Justification de la durée d interdiction de participation à une autre recherche. Modalités et montant de l'indemnisation des personnes se prêtant à la recherche Calendrier prévisionnel Il sera donc réalisé 6 prélèvements au niveau nasal pour chaque patient: - 1 test de diagnostic rapide (TDR) par le Médecin Investigateur lors de la première visite (V1 H0), - 4 prélèvements par lavage nasal effectués par l infirmière (V1bis H0+2H, V2 48H, V3 72 H et V4 120H), à domicile pour RT-qPCR et mise en culture, - 1 prélèvement par écouvillonnage nasal (Virocult), effectué par le Médecin Investigateur lors de la dernière visite (V5 H168) pour RT-qPCR et mise en culture. Un comité de surveillance, composé d un pharmacologue, d un médecin spécialiste de la grippe et d un virologue, sera mis en place au cours de cette étude. Etant donnée la durée de participation de chaque patient (7 jours) à l étude et la demi-vie courte du médicament administré, la durée d interdiction de participation à une autre recherche est fixée à 11 jours. Il est prévu une indemnisation de 150 euros / patient (25 euros par visite, au prorata des visites effectuées). Le recrutement se fera pendant les saisons grippales et Les inclusions débuteront suite à l alerte, donnée par le GROG, du franchissement du seuil d épidémie (décembre ou courant janvier) et se poursuivront pendant toute la durée de l épidémie. Durée de suivi par patient : 7 jours Analyse finale de l étude : Février 2013 Publication : Septembre 2013