Dénombrement des coliformes, des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985)
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- Tristan Maxence Mongrain
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1 Dénombrement des coliformes, des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) Présentation des milieux Milieu BCP Contient : Lactose BCP (indicateur de ph virant au jaune à ph acide) La cloche de Durham permet de recueillir les gaz produits Utilisé pour l étape PRESOMPTIVE Tube négatif Tube positif Trouble + gaz Il est possible de remplacer le bouillon BCP par un bouillon au laurylsulfate de sodium (milieu sélectif) avec cloche.
2 Dénombrement des coliformes, des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) Présentation des milieux Milieu BLBVB Contient : Lactose Bile et vert brillant : inhibiteurs très sélectifs des entérobactéries. La cloche de Durham permet de recueillir les gaz produits Utilisé pour l étape CONFIRMATIVE Tube positif Trouble + gaz
3 Dénombrement des coliformes, des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) Présentation des milieux Bouillon de Schubert Anneau rouge après ajout du réactif de Kovacs Contient : Des sources de CHONPS (peptones, mannitol et minéraux) Tryptophane transformé en indole par E. coli à 44 C. La cloche de Durham permet de recueillir les gaz produits Utilisé pour l étape CONFIRMATIVE avec une orientation vers l identification d E. coli Tube positif : trouble + gaz + anneau rouge
4 ETAPE PRÉSOMPTIVE du dénombrement des coliformes ou des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) 1 ère étape : suite de n dilutions décimales de l eau à analyser. 2 e étape : ensemencement et incubation des milieux présomptifs Ensemencement d 1 ml à la pipette graduée stérile En général : 3 dilutions successives, 3 tubes par dilution Incubation 30 C pendant 24 à 48 h
5 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des coliformes ou des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) 1 ère étape : repiquage des tubes présomptifs positifs à l oese Dénombrement des coliformes : ensemencement BLBVB à 37 C 48h Dénombrement des coliformes thermotolérants: ensemencement BLBVB à 44 C 48h OU ensemencement Schubert à 44 C pendant 24h 2 e étape : lecture et interprétation Pas de repiquage
6 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des coliformes ou des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) Sur milieu BLBVB : tous les tubes positifs sont confirmés : Nombre caractéristique : 320 NPP : 9,3 N ou Cs = 9,3/10 -(n+2) = 9,3.10 n+2 coliformes/100 ml si incubation à 37 C N ou Cs = 9,3/10 -(n+2) = 9,3.10 n+2 coliformes thermotolérants/100 ml si incubation à 44 C Pas de repiquage 3 2 0
7 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des coliformes ou des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) 1 ère étape : repiquage des tubes présomptifs positifs à l oese Dénombrement des coliformes thermotolérants avec orientation vers E. coli ensemencement Schubert à 44 C pendant 24h puis ajout de réactif de Kovacs à la lecture 2 e étape : repiquage des tubes présomptifs positifs à l oese Pas de repiquage
8 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des coliformes ou des coliformes thermotolérants (AFNOR NF T d octobre 1985) Sur milieu de Schubert : tous les tubes positifs sont confirmés : Nombre caractéristique : 320 NPP : 9,3 N ou Cs = 9,3/10 -(n+2) = 9,3.10 n+2 coliformes thermotolérants/100 ml plus précisément : N ou Cs = 9,3/10 -(n+2) = 9,3.10 n+2 Escherichia coli présumées/100ml Pas de repiquage
9 Dénombrement des streptocoques du groupe D (AFNOR NF T d octobre 1989) Présentation des milieux Tube positif Trouble Tube négatif Limpide (à droite) Bouillon de Rothe = bouillon glucosé à l azoture Contient : Source de CHONPS Azoture de sodium : puissant inhibiteur sélectif des entérocoques Tube positif Trouble avec culot violet Tube négatif Limpide (à droite) Bouillon de Listky Contient : Source de CHONPS Azoture de osdium : puissant inhibiteur sélectif des entérocoques Solution de violet d éthyle qui colore le culot bactérien en violet
10 ETAPE PRÉSOMPTIVE du dénombrement des streptocoques du groupe D (AFNOR NF T d octobre 1989) 1 ère étape : suite de n dilutions décimales de l eau à analyser. 2 e étape : ensemencement et incubation des milieux présomptifs Ensemencement d 1 ml à la pipette graduée stérile En général : 3 dilutions successives, 3 tubes par dilution Incubation 37 C pendant 24 à 48 h
11 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des streptocoques du groupe D (AFNOR NF T d octobre 1989) 1 ère étape : repiquage des tubes présomptifs positifs à l oese ensemencement des bouillons de Litisky OU des géloses BEA 37 C, 24h 2 e étape : lecture et interprétation LITSKY ou BEA Pas de repiquage
12 ETAPE CONFIRMATIVE du dénombrement des streptocoques du groupe D (AFNOR NF T d octobre 1989) Tous les tubes positifs sont confirmés : Nombre caractéristique : 320 NPP : 9,3 N ou Cs = 9,3/10 -(n+2) = 9,3.10 n+2 streptocoques D/100 ml
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