Du peptide P140 au Lupuzor, un futur médicament pour le lupus? Sylviane Muller, CNRS Strasbourg Immunologie & Chimie Thérapeutiques

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1 Du peptide P140 au Lupuzor, un futur médicament pour le lupus? Sylviane Muller, CNRS Strasbourg Immunologie & Chimie Thérapeutiques

2 Lupus érythémateux disséminé (LED) Manifestations multiples peau (rash) articulations reins (glomérulonéphrite) cerveau, coeur système immunitaire Epidémiologie Europe US Prévalence/ /an Incidence/ /an Total: ~1.4 M en France 90% sont des femmes Etiologie multiple Multigénique

3 Equipe Immunologie et immunomodulation du lupus Nos objectifs: Comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans l induction (rupture de tolérance au soi) et le développement du lupus. Etudier les mécanismes moléculaires liés à la physiopathologie de certaines formes de lupus (identification de cibles; diagnostic) Proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques capables de cibler spécifiquement les cellules délétères impliquées dans la pathologie lupique

4 Thérapies du lupus Thérapies actuelles Immunosuppresion Corticoïdes Cyclophosphamide Mycophenolate mofetil Effets indésirables Infections Risque de cancer Stratégies futures Molécules visant des cibles spécifiques impliquées dans la physiopathologie de la réponse autoimmune

5 Panoplie de stratégies thérapeutiques en cours d évaluation dans le lupus Cellule présentatrice d Ag anti-ifn-α anti-cd40l anti-baff LJP-394 CD40L CD40 CD20 anti-cd20 (ADCC, apoptose, complément) Peptides immunomodulateurs LTCD4 + CD28 B7 LB CD22 anti-cd22 CTLA4-Ig

6 Modèles murins spontanés de lupus Mutation lpr mutation + Fas ½ vie 4-5 mois Syndrome lymphoprolifératif Lymphocytes T CD4 - /CD8 - /B220+ Néphrite à CI, vasculite AAN, Ac anti-adn, FR MRL-lpr/lpr mice (H-2 k )

7 Peptides de la protéine nucléaire U1-70K Fanny Monneaux Doctorat 2001 peptides Index de prolifération Peptide Reconnu par les Ac et les lymphocytes T CD4+ de souris lupiques (prolifération + IL2) - Motif RNP1-2 sites potentiels de phosphorylation R I H M V Y S K R S G K P R G Y A F I E Y

8 L administration iv du peptide P140 à des souris MRL/lpr - réduit la vasculite (moins d infiltrat inflammatoire périvasculaire) 3 *** vasculitis grade 2 1 Saline P140 0 NaCl P140 - ralentit l apparition de la dermatite NaCl P140

9 - améliore la survie des souris lupiques -100 µg P140 en NaCl /injection/souris - Voie iv - 4 injections : semaines 4, 6, 8, 12 MRL/lpr NaCl (n=33) P140 (n=29) non phosphorylé (n=9) Médiane de survie (semaines) ,5 % survie p=0, semaines Protéinurie: 25% vs 75% Ac anti-adndb: 29% vs 75% (24sem)

10 -réduit l hypercellularité périphérique 12 5 jours après injection MRL/lpr CBA/J x10 6 cells/ml rate ganglion 0 MRL/lpr NaCl MRL/lpr P140 CBA/J NaCl CBA/J P140 MAIS - les lymphocytes restants se comportent normalement lors d une stimulation - les souris MRL/lpr traitées résistent normalement à une infection par le v. de la grippe le peptide P140 n est pas un immunosuppresseur! Monneaux et al. Eur. J. Immunol. 2003; Monneaux et al. ART 2007; Page et al. PloS ONE 2009; Page et al. ARD 2010

11 Chez l homme, le peptide P140 -se lie à un grand nombre de molécules HLA - dans une étude longitudinale, est reconnu par les cellules T de 50% de patients lupiques cellule présentatrice d antigènes (CPA) HLA Monneaux et al. J Immunol 2005 IL-10 lymphocyte T CD4+

12 Essais cliniques peptide P140 (Lupuzor ) - Brevet CNRS Start-up ImmuPharma Recherche de fonds ( UK) - Licence du CNRS à ImmuPharma Peptide GMP / NeoMPS Tox: rats, lapins, chiens Sept.-Déc Phase I: 24 individus sains; 2 mg s.c. Fév.-Mai Phase IIa: 20 patients LED Juin-Oct Phase IIb : 134 patients LED Janv.-Nov. 2008

13 Essai de Phase IIb - double-aveugle, randomisée, multicentrique (1) - administrations sc - 3 groupes: µg 1x/mois µg 2x/mois 3. placebo - traitement 12 semaines + observation 12 semaines (1) Argentine, Bulgarie, Roumanie, Espagne 134 patients avec un lupus modéré à sévère (SLEDAI clinique 6) A 24 semaines: 62% de patients répondeurs dans le groupe 1 contre 41% dans le groupe placebo [ baisse de 4 points du SLEDAI] aucun effet adverse significatif 2 ème phase IIb USA et Europe 2010 Phase III 2011

14 Peptide P140 Séquence de la protéine U1-70K phosphorylée sur le résidu Ser140 (conservée) P 13 R 14 G 15 Y 21 E 20 A 17 I 19 R 14 P 13 G 15 Y 21 A 17 F 18 E 20 ps 10 K G F ps10 Y R 1 K 12 R R K 9 G M H 3 V 4 I K 2 8 S 5 7 Y 6 Y6 S 7 Y I R I 1 2 V 5 M 4 H 3 MT Cung, ENSIC Nancy La séquence est phosphorylée in vivo en position Ser 140 dans les cellules apoptotiques Dieker et al. Cell Death Diff 2008

15 Biodistribution du peptide P140 P140 1h post -injection iv souris MRL/lpr high low 2 6 P140-rhodamine et DAPI Accumulation dans la rate: zone marginale et du manteau du follicule Confirmation chez le rat normal avec du peptide P140 14C

16 Mécanisme d action du P140? cellule présentatrice d antigènes sur le récepteur des cellules T CD4? sur certaines sous-populations régulatrices ou cytotoxiques? lymphocyte T CD4+ sur un autre récepteur qui influence une cascade d'activation intracellulaire?

17 Mécanisme d action du P140 P140 lie une protéine de choc thermique constitutivement exprimée, HSC70 (précipitation, ELISA, BIAcore, microscopie flurorescence et microscopie électronique) DAPI P140 MHCII HSC70 P140 + MHCII P140 + HSC70 Lymphocytes B spléniques Dans le lupus, HSC70 est surexprimée: - P140 surexpression - P140 interfère avec les propriétés de HSC70 P140 inhibe la capacité de HSC70 à renaturer la luciferase dénaturée P140 µm Modélisation HSC70-peptide P140

18 Mécanisme d action du P140 Lymphocyte T CD4+ P140 HSC70 Cellule présentatrice d antigènes HLA-DR Dimer P140 (µm) HLA-DRα actinβ Page et al ARD 2010

19 En résumé, P140 est un immunomodulateur de la réponse autoimmune dans le lupus murin - Régule l hypercellularité du sang périphérique par un effet pro-apoptotique - Se localise dans la rate et module des processus cellulaires gouvernant la présentation peptidique par les molécules du CMH (vu aussi sur des cellules Raji humaines) réactivité des LT CD4 + autoréactifs, en respectant les autres sous-populations lymphocytaires - Nombreuses questions fondamentales à approfondir et d études pharmacologiques à réaliser! 2 ème phase IIb USA et Europe en cours Phase III pour 2011

20 CNRS Unité Immunologie et Chimie Thérapeutiques Strasbourg Marion Décossas Olivier Chaloin Monique Duval Jean-Paul Frédéric Jürgen Nicolas Christophe Nicolas Briand Gros Dieker Page Macri Schall