RECOMMANDATIONS. Avril Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

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1 RECOMMANDATIONS portant diffusion des algorithmes de validation biologique des tests de dépistage des maladies transmissibles applicables à la qualification biologique des organes, tissus et cellules Avril Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

2 PRÉAMBULE En 2003 un groupe de travail, constitué par des experts en microbiologie et spécialistes des analyses biologiques dans ce domaine, a été réuni sous l égide de l AFSSaPS. Ce groupe a finalisé un rapport sur la révision des règles de sécurité sanitaire applicables à la qualification biologique des organes, tissus et cellules. Les propositions des experts se sont appuyées sur les dispositions des deux textes suivants : - le décret n du 9 octobre 1997 relatif aux règles de sécurité sanitaire applicables à tout prélèvement d éléments ou toute collecte de produits du corps humain et à leur utilisation à des fins thérapeutiques, à l exception des gamètes, du sang et de ses composants et de leurs dérivés, ainsi que des réactifs, pris en application des articles L et L du code de la santé publique et modifiant ce code. - l arrêté du 24 juillet 1996 relatif à la nature des examens à réaliser pour la détection des marqueurs biologiques de l infection par les virus VIH-1 et VIH-2 et par le virus de l hépatite C avant toute utilisation thérapeutique chez l homme d éléments et produits du corps humain à des fins de greffe, à l exception des gamètes et du sang et des produits sanguins. Les réflexions de ce groupe ont conduit à : 1. réviser pour chaque infection transmissible les marqueurs à dépister (nature du marqueur, tests de dépistage...) ; 2. élaborer pour chaque marqueur d infection transmissible des algorithmes de validation biologique des tests, reflets de l interprétation des résultats des analyses biologiques. Concernant les cellules souches hématopoïétiques (CSH), il est rappelé que la qualification biologique de ces cellules est actuellement régie par des textes réglementaires différents (décret du 16 février 1995 pour les CSH issues de sang périphérique ou placentaire et décret du 9 octobre 1997 pour les CSH d origine médullaire). Ces textes réglementaires imposent des mesures différentes de qualification. Il est à noter que cette qualification pourra ultérieurement faire l objet d une harmonisation. 2 Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

3 1. Révision des marqueurs Les recommandations des experts sont résumées dans le tableau ci-après : Situation réglementée par les deux textes pré-cités* (tests à réaliser avant tout prélèvement) HIV Anticorps anti-hiv-1 et -2 par deux techniques ou réactifs différents dont au moins un réactif pour méthode immunoenzymatique mixte Antigène p24 Recommandations du groupe d Experts «marqueurs biologiques» Pas de modification Détection de l Antigène p24 ou de l ARN HIV-1 HCV HBV Anticorps anti-hcv par deux techniques ou réactifs différents Nature des marqueurs à rechercher non précisée Détection des anticorps anti-hcv par une seule technique Précision des marqueurs à rechercher : Antigène HBs Anticorps anti-hbc (IgG ou anticorps totaux) Anticorps anti-hbs (IgG) ALAT Dosage des ALAT Suppression de la recherche des ALAT en tant que marqueur virologique HTLV Anticorps anti-htlv-i ou I/II Pas de modification SYPHILIS Diagnostic sérologique de la syphilis Possibilité de faire le dépistage dans les heures ouvrables qui suivent le prélèvement. Technique TPHA quantitative recommandée. EBV** Anticorps anti-ebv Précision des marqueurs à rechercher : Détection soit des IgG ou anticorps totaux anti-vca soit des IgG ou anticorps totaux anti-ebv pour les mélanges d antigènes CMV** Anticorps anti-cmv Précision des marqueurs à rechercher : Détection des IgG ou des anticorps totaux anti-cmv TOXOPLASMOSE** Diagnostic sérologique de la toxoplasmose Possibilité de faire le dépistage dans les heures ouvrables qui suivent le prélèvement. PALUDISME** Dépistage non exigé dans le décret du 9 octobre 1997 *Réglementée par le décret de 1997 et l arrêté de Dépistage recommandé pour les organes et les CSH médullaires en fonction du risque de transmission **Pour les organes et cellules. - Concernant l HIV, l HCV, et les ALAT, l arrêté du 14 janvier 2004, qui modifie l arrêté du 24 juillet 1996, rend opposables les recommandations pré-citées. HIV En ce qui concerne la recherche de l infection par l HIV, le choix du marqueur précoce, c est-à-dire détection de l antigène p24 ou de l ARN de l HIV-1 par technique moléculaire unitaire, est laissé aux laboratoires d analyses de biologie médicale (LABM). Dans les deux cas, les techniques utilisées doivent être agréées par les autorités sanitaires du pays où elles sont réalisées. HCV La détection des anticorps anti-hcv peut être réalisée par une seule technique (test ELISA de dernière génération). 3 Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

4 ALAT Les alanine-aminotransférases (ALAT) ne sont plus considérées aujourd hui comme un marqueur spécifique et pertinent d infections virales et les experts recommandent de ne plus les retenir dans les critères virologiques de qualification des organes, tissus et cellules. - Concernant la syphilis et la toxoplasmose, la proposition de faire le dépistage dans les heures ouvrables qui suivent le prélèvement, n est pas à ce jour applicable. En effet, dans l attente de la modification du décret du 9 octobre 1997, les dispositions actuelles de ce texte demeurent en vigueur. -Concernant les marqueurs des autres infections transmissibles, les recommandations peuvent être appliquées dès à présent. 2. Algorithmes de validation biologique des tests (figurant en annexe) Ils ont été élaborés pour chaque marqueur d infection transmissible. Ces algorithmes aboutissent à des conclusions de trois ordres : résultat négatif, résultat positif, résultat indéterminé. Ils ont été élaborés en prenant en compte le contexte de l urgence pour la qualification des organes. Aussi, sur ces algorithmes n apparaissent pas les techniques de biologie moléculaire qui, dans l état actuel des techniques, ne sont pas réalisables en urgence, et ne peuvent donc pas aider à l interprétation des résultats. Toutefois, pour la qualification réalisée en dehors du contexte de l urgence, également appelée qualification «à froid», des tissus et des cellules, l intérêt de la recherche du génome de certains virus (HIV, HCV, HBV) par technique moléculaire a été souligné, et il est rappelé que le résultat de cette recherche peut apporter une information supplémentaire utile, notamment en cas de résultat indéterminé. Abréviations Ac Ag ARN ALAT CMV CSH EBV HBV HCV HIV HTLV : anticorps : antigène : acide ribonucléique : alanine aminotransférases (transaminases) : cytomégalovirus : cellules souches hématopoïétiques : virus Epstein-Barr : virus de l hépatite B : virus de l hépatite C : virus de l immunodéficience humaine : virus lymphotropique T humain (Human T Lymphotropic Virus) 4 Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

5 Annexe Algorithmes de validation biologique des tests 5 Afssaps Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé

6 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-hiv-1 et -2 dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. Ac anti-hiv-1 et-2 R1 + R2 R1 et R2 négatifs Douteux (zone grise) Discordant R1 et R2 positifs Test répété R1 + R1 + R3 ou R2 + R2 + R3 Les 3 tests sont négatifs Résultats discordants ou 3 tests douteux Les 3 tests sont positifs Sérologie négative Sérologie «indéterminée» Sérologie positive R1 et R2 : réactifs initiaux R3 : 3 e réactif

7 Algorithme de validation biologique de la recherche de l antigène p24 dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. Ag p24 (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif (*) Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Ag p24 négatif Ag p24 indéterminé Ag p24 positif confirmé L algorithme d interprétation doit être analysé en fonction de la valeur de la DO de l Ag p24 (réactivité initiale de l Ag p24). R1 : réactif initial R2 : 2e réactif (*) Un positif signifie d après la nomenclature qu il a été neutralisé

8 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-htlv dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. Ac anti-htlv-i ou anti-htlv-i/-ii (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Sérologie négative Sérologie «indéterminée» Sérologie positive R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif

9 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-hcv dans le contexte de la qualification des organes, tissus et cellules Ac anti-hcv (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Sérologie négative Sérologie indéterminée Sérologie positive R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif

10 Algorithme de validation biologique de la recherche de l antigène HBs dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. AgHBs (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Neutralisation Oui Non AgHBs négatif AgHBs indéterminé AgHBs positif confirmé AgHBs négatif R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif

11 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-hbc dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. IgG ou Ac totaux anti-hbc (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Ac anti-hbc négatif Ac anti-hbc indéterminé Ac anti-hbc positif R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif

12 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-hbs dans le contexte de la qualification des organes, tissus ou cellules. IgG anti-hbs (R1) Négatif Valeur limite Positif Ac anti-hbs négatif Ac anti-hbs indéterminé Ac anti-hbs positif R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif

13 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-ebv dans le contexte de la qualification des organes, tissus (*) ou cellules IgG ou Ac totaux anti-vca ou IgG ou Ac totaux anti-ebv (trousses utilisant des mélanges d antigènes) (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Sérologie négative Sérologie indéterminée Sérologie positive R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif (*) : dépistage non obligatoire

14 Algorithme de validation biologique de la recherche des anticorps anti-cmv dans le contexte de la qualification des organes, tissus (*) ou cellules IgG ou Ac totaux anti-cmv (R1) Négatif Douteux (zone grise) Positif Test répété (R1 + R1 ou R1 + R2) Les 2 tests sont négatifs Résultats discordants ou 2 tests douteux Les 2 tests sont positifs Sérologie négative Sérologie indéterminée Sérologie positive R1 : réactif initial R2 : 2 e réactif (*) : dépistage non obligatoire

15 Algorithme de validation biologique de la recherche de l agent de la syphilis dans le contexte de la qualification des organes, tissus et cellules. TPHA quantitatif (ou technique équivalente) Valeur inférieure au seuil de détection Valeur supérieure ou égale au seuil de détection Sérologie négative Sérologie positive

16 TOXOPLASMOSE (I) (II) IgM négatives IgG négatives IgM négatives IgG positives Sérologie négative Infection ancienne (III) (IV) IgM positives IgG négatives IgM positives IgG positives Tout début d infection ou IgM non spécifiques (rare) (1) Infection récente évolutive ou infection ancienne avec IgM résiduelles (1) A interpréter selon les techniques utilisées, en répétant le prélèvement ou en utilisant une technique d avidité.