Pratique de l immunohistochimie Applications diagnostiques Tumeurs des tissus mous. JM Coindre - Bordeaux
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- Aurélien St-Germain
- il y a 8 ans
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1 Pratique de l immunohistochimie Applications diagnostiques Tumeurs des tissus mous JM Coindre - Bordeaux 1
2 Tumeurs des tissus mous Rappels Tumeurs rares (2% des prélèvements) Tumeurs variées (150 types histo) 99% sont des tumeurs bénignes 3 problèmes principaux Sarcome vs tumeur ou lésion bénigne Sarcome vs autres tumeurs malignes Classification d un sarcome 2
3 Tumeurs des tissus mous Approche diagnostique Informations cliniques Histologie (HE) Immunohistochimie Biologie moléculaire 3
4 Tumeurs des tissus mous Approche diagnostique Informations cliniques Histologie (HE) Immunohistochimie Biologie moléculaire 4
5 Tumeurs des tissus mous Les marqueurs utiles Pankératine AE1/AE3, EMA S100, HMB45 CD20, CD3, CD30 Desmine, AML, myogénine caldesmone CD34, CD31 CD163, CD68 5
6 Tumeurs des tissus mous Les marqueurs utiles Pankératine AE1/AE3, EMA S100, HMB45 CD20, CD3, CD30 Desmine, AML, myogénine caldesmone CD34, CD31 CD163, CD68 CKIT, DOG1 MDM2, CDK4 CD99 HHV8 Chromogranine A TFE3, INI1, ALK1 6
7 Tumeurs des tissus mous Les marqueurs inutiles Vimentine BCL2 7
8 Tumeurs des tissus mous Intérêts de l'immunohistochimie Identifier certaines lésions bénignes d aspect atypique ou rares Préciser la nature d'une tumeur maligne indifférenciée Classer un sarcome 8
9 Tumeurs des tissus mous Intérêts de l'immunohistochimie Identifier certaines lésions bénignes d aspect atypique ou rares Préciser la nature d'une tumeur maligne indifférenciée Classer un sarcome 9
10 Tumeurs des tissus mous Problème bénin-malin Problème majeur et fréquent solution : - contexte clinique - HES Place de l immunohistochimie? 10
11 Tumeurs des tissus mous Tumeurs bénignes rares / atypiques Tumeurs nerveuses Lésions histiocytaires Tumeurs rares : ( paragangliome, T. glomique, T. fibreuse solitaire, angiomyolipome, myoépithéliome des tissus mous) Lésions myofibroblastiques 11
12 Tumeurs bénignes atypiques ou rares Protéine S100 Schwannome avec dystrophies nucléaires Schwannome cellulaire Neurofibrome myxoïde Neurofibrome avec dystrophies nucléaires Neurofibrome diffus Tumeur à cellules granuleuses 12
13 Tumeurs bénignes atypiques ou rares Protéine S100 Schwannome avec dystrophies nucléaires («schwannome ancien 13»)
14 Tumeurs bénignes atypiques ou rares Protéine S100 Schwannome cellulaire 14
15 Lésions histiocytaires bénignes CD163, CD68 Infiltrats histiocytaires Lésions de surcharge Xanthogranulome juvénile T. ténosynoviale à cell. géantes 15
16 Lésions histiocytaires bénignes CD163, CD 68 Femme de 23 ans, tumeur de l avant-bras de 29 cm CD68 Tumeur ténosynoviale à cell géantes, forme diffuse 16
17 Tumeurs bénignes rares Paragangliome : Chromogranine, S100 + T. glomique : Caldesmone + T. fibreuse solitaire : CD 34 + Myoépithéliome : Pankératine, PS100 + T. glomique - Périneuriome: EMA+, PS100 - caldesmone Angiomyolipome : HMB45, AML, caldesmone + 17
18 Tumeurs bénignes rares Paragangliome: PS100 et chromogranine A PS100 Chromogranine 18
19 Lésions bénignes à myofibroblastes Fasciites pseudosarcomateuses Myosites Fibromatoses Myofibromatose infantile Myofibroblastomes 19
20 Lésions bénignes à myofibroblastes Fasciites pseudosarcomateuses Myosites Fibromatoses Myofibromatose infantile Myofibroblastomes AML 20
21 Tumeurs des tissus mous Intérêts de l'immunohistochimie Identifier certaines lésions bénignes d aspect atypique ou rares Préciser la nature d'une tumeur maligne indifférenciée Classer un sarcome 21
22 Tumeurs malignes non sarcomateuses des tissus mous Carcinome Mélanome malin Lymphomes Attention si : Antécédent de cancer Localisation à risque d'erreur Architecture histologique non spécifique 22
23 Tumeurs malignes non sarcomateuses des tissus mous Localisations à risque d'erreur Peau et muqueuses Aires ganglionnaires Près de certains organes (poumon, rein, thyroïde, sein ) 23
24 Tumeurs des Tissus Mous Tumeur maligne non sarcomateuse Morphologies non spécifiques Tumeur inclassable : à cellules fusiformes à cellules pléomorphes à cellules rondes Aspects : d'histiocytofibrome malin de fibrosarcome d'hémangiopéricytome malin 24
25 25
26 Tumeurs malignes non sarcomateuses des tissus mous Solutions Si antécédent de tumeur : la revoir Echantillonnage Immunohistochimie 26
27 Tumeurs malignes non sarcomateuses des tissus mous Femme, 80 ans. Tumeur ulcérée de la jambe AE1/AE3 Carcinome sarcomatoïde 27
28 Tumeurs des tissus mous Intérêts de l'immunohistochimie Identifier certaines lésions bénignes d aspect atypique ou rares Préciser la nature d'une tumeur maligne indifférenciée Classer un sarcome 28
29 Classification des sarcomes Intérêts de l immunohistochimie Définie une ligne de différenciation Suggère une ligne de différenciation Démontre une anomalie moléculaire spécifique 29
30 L IHC peut définir une ligne de différenciation Rhabdomyosarcomes - myogénine GIST - C-KIT et DOG1 Sarcome à cell. claires - S100, HMB45 Sarcome épithélioïde - CytoK, EMA, CD34, INI1 T. desmoplastique à cell. rondes - CytoK, desmine Angiosarcomes - CD31, CD34, F8, FLI1 30
31 L IHC peut définir une ligne de différenciation Rhabdomyosarcomes - myogénine GIST - C-KIT et DOG1 Sarcome à cell. claires - S100, HMB45 Sarcome épithélioïde - CytoK, EMA, CD34, INI1 T. desmoplastique à cell. rondes - CytoK, desmine Angiosarcomes - CD31, CD34, F8, FLI1 31
32 Rhabdomyosarcomes Sarcome des tissus mous le plus fréquent chez l enfant RMS embryonnaire et alvéolaire RMS pléomorphe et fusiforme : adulte rare Myogénine : nécessaire pour le diagnostic 32
33 Rhabdomyosarcomes et myogénine Facteur de transcription Muscle strié immature Marqueur spécifique myogénine > myod1 positivité nucléaire muscle régénératif Sous-types histol. et sensibilité 33
34 Rhabdomyosarcome alvéolaire 34 Myogénine
35 Rhabdomyosarcome embryonnaire 35 myogénine
36 Rhabdomyosarcome pléomorphe 36 myogénine
37 GIST (Gastro-Intestinal Stromal Tumor) Sarcome viscéral et digestif le plus fréquent (900 cas par an en France) Surtout estomac et intestin grêle Mutations activatrices de KIT ou PDGFRA Thérapeutique ciblée (imatinib) CKIT : indispensable au diagnostic 37
38 Immunohistochimie des GIST KIT (CD117) : 95% DOG1 : 95% CD34 : 60-70% H-caldesmone : 80% Autres anticorps parfois positifs Actine musculaire lisse : 20-50% S-100 : 10% Desmine < 5% CKIT 38
39 GIST KIT négatives Environ 5% des GIST sont KIT Faux négatifs Problèmes techniques Mauvais anticorps Régénération antigénique Hétérogénéité tumorale Biais d échantillonnage Vrais négatifs Mutations de PDGFRA (72%), KIT (16%) 39
40 Tumeurs non-gist KIT positives Went et al, J Clin Oncol 2004;22; Tissue micro-array tumeurs, 134 types de tumeurs Tumeurs non-gist KIT + 52 types de tumeurs + Séminomes (84-100%) Carcinomes (glandes salivaires, endocol, thyroïde, sein, poumon 17-65%) Mélanomes (36%) PNET (17%) 40
41 GIST et DOG1 Discovered On Gist-1 (DOG1) transcripts (profil d expression) Anticorps monoclonal (clone K9) Miettinen et al (2009) : DOG1 et KIT sur 1168 GIST et 672 autres tumeurs GIST : KIT 94,7% + DOG1 94,4% + Autres tumeurs : DOG1 2,7% + (leiomyomes et synovialosarcomes) 2,6% de GIST KIT et DOG1 négatifs 41 Miettinen et al. Am J Surg Pathol 2009; 33:
42 KIT DOG1 42
43 Classification des sarcomes Intérêts de l immunohistochimie Définie une ligne de différenciation Suggère une ligne de différenciation Démontre une anomalie moléculaire spécifique 43
44 L IHC peut suggérer une ligne de différenciation Synovialosarcomes - AE1/AE3, EMA, CD34 Leiomyosarcomes - AML, desmine, caldesmone PNET/Ewing - CD99 DFSP - CD34 MPNST - S100 44
45 L IHC peut suggérer une ligne de différenciation Synovialosarcomes - AE1/AE3, EMA, CD34 Leiomyosarcomes - AML, desmine, caldesmone PNET/Ewing - CD99 DFSP - CD34 MPNST - S100 45
46 Synovialosarcomes < 5% des sarcomes des tissus mous Siège ubiquitaire Histologie évocatrice IHC : renforce le diagnostic Translocation (X;18) : gold standard 46
47 47
48 EMA AE1/AE3 48 CD34
49 AE1/AE3 + 70% EMA % CD34-95% S100 S % CD % Calrétinine + 50% CD99 49
50 Leiomyosarcomes 15% des sarcomes de l adulte Peau, rétropéritoine, membres et paroi thoracique Diagnostic difficile si peu différencié Problème pour séparer LMS et MFH 50
51 1,0 Metastasis-free survival 0,8 MyxoFS (n=71) Probability 0,6 0,4 MFH (n=135) LeiomyoS (n=211) 0,2 P = 3.5 x 10-4 USCAP ,0 0,000 24,000 48,000 72,000 96, , , , , , , Time in months
52 Leiomyosarcomes et IHC Actine musculaire lisse : en règle + mais peu spécifique Desmine : + dans 50% des cas non spécifique Caldesmone : spécifique mais peu sensible 52
53 H-caldesmone Régulateur de la contraction musculaire lisse Positive pour : - tumeurs musculaires lisses - tumeur glomique - GIST - angiomyolipomes Négative pour : - proliférations myofibroblastiques - tumeurs musculaires striées 53
54 Leiomyosarcome pléomorphe AML desmine 54 caldesmone
55 Marqueurs musculaires Desmine : muscles lisse et strié Actine musculaire lisse : muscle lisse et myofibroblastes Myogénine : muscle strié immature Caldesmone : muscle lisse 55
56 Classification des sarcomes Intérêts de l immunohistochimie Définie une ligne de différenciation Suggère une ligne de différenciation Démontre une anomalie moléculaire spécifique 56
57 L IHC peut démontrer une anomalie moléculaire spécifique Lipos dédifférencié/différencié MDM2, CDK4 Sarcome alvéolaire des parties molles TFE3 Tumeur rhabdoïde maligne INI1 Tumeur myofibroblastique inflammatoire ALK1 (Maladie de Kaposi) HHV8 (+ CD34 et CD31) 57
58 L IHC peut démontrer une anomalie moléculaire spécifique Lipos dédifférencié/différencié MDM2, CDK4 Sarcome alvéolaire des parties molles TFE3 Tumeur rhabdoïde maligne INI1 Tumeur myofibroblastique inflammatoire ALK1 (Maladie de Kaposi) HHV8 (+ CD34 et CD31) 58
59 Liposarcomes dédifférenciés / bien différenciés 2/3 des liposarcomes Récidives locales Métastases (20%) si dédifférencié Diagnostic souvent difficile Lipomes remaniés Autres sarcomes 59
60 Liposarcomes différencié / dédifférencié Profil génomique MDM2 CDK4 JUN MDM2 CDK4 Liposarcome différencié Liposarcome dédifférencié 60
61 Immunohistochimie MDM2 / CDK4 CGH-array: Gold standard? Immunohistochimie en première ligne FISH pour les cas difficiles MDM2- IF2 61
62 Immunohistochimie MDM2 / CDK4 CGH-array: Gold standard? Immunohistochimie en première ligne FISH pour les cas difficiles CDK4- DCS31 62
63 Liposarcomes différencié / dédifférencié IHC pour MDM2/CDK4 559 tumeurs des tissus mous LPSD - LPSDD : MDM2 (97%) CDK4 (92%) (n=105) T. adipeuses bénignes : MDM2 (5%) CDK4 (2%) (n=49) Autres sarcomes : MDM2 (19%) CDK4 (6%) (n=405) Am J Surg Pathol 2005; 29:
64 Sarcome alvéolaire des parties molles Très rare Adulte jeune - cuisse Enfant tête et cou Presque toujours métastatique Histologie souvent typique 64
65 Sarcome alvéolaire des parties molles Der(17)t(X;17) (TFE3/ASPL) Protéine de fusion Facteur de transcription anormal Nucléaire Anticorps anti-tfe3 (partie C-terminal) 65
66 Sarcome alvéolaire des parties molles TFE3 66
67 Sarcome alvéolaire des parties molles IHC TFE3 SAPM : en règle + Carcinome rénal du jeune : + Autres tumeurs : - (6+/1470) Sensibilité : 97,5% Spécificité: 99,6% Am J Surg Pathol 2003;27:
68 Tumeur rhabdoïde Très rare Jeunes enfants Rein, SNC, tissus mous Très mauvais pronostic Diagnostic difficile 68
69 Tumeur rhabdoïde Inactivation de INI1 (22q11.2) Membre du complexe SWI/SNF Anticorps monoclonal anti-ini1 (BAF47) spécifique et sensible J Pathol 2007;211 69
70 BAF47 70
71 Classification des sarcomes Intérêt de l immunohistochimie GIST Rhabdomyosarcomes Maladie de Kaposi Angiosarcomes Sarcome à cell claires Sarcome épithélioïde T desmoplastique à cell rondes Tumeur rhabdoïde S alvéolaire des PM Synovialosarcomes Leiomyosarcomes Liposarcomes PNET MPNST Chondrosarcome T myofibroblastique inflam 71
72 Classification des sarcomes Limitations et pièges de l IHC Sarcomes sans marqueur spécifique Certains marqueurs sont peu sensibles Il n y a pas de marqueur spécifique 72
73 Sarcomes sans marqueur spécifique Myxofibrosarcome Liposarcome myxoïde / à cell rondes Liposarcome pléomorphe Sarcome fibromyxoïde de bas grade Ostéosarcome Sarcomes peu différenciés / MFH 73
74 Sarcomes sans marqueur spécifique Myxofibrosarcome Liposarcome myxoïde / à cell rondes Liposarcome pléomorphe Sarcome fibromyxoïde de bas grade Osteosarcome Sarcomes peu différenciés / MFH 74
75 Certains marqueurs sont peu sensibles Leiomyosarcomes et marqueurs musculaires lisses - AML : 70% - Desmine : 50% - Caldesmone : 35% MPNST et protéine S100 : 50-75% 75
76 Il n y a pas de marqueur spécifique Marqueurs peu spécifiques Positivités inattendues Utiliser un panel de maqueurs IHC doit être interprétée en fonction des contextes clinique et histologique Importance de la biologie moléculaire 76
77 Marqueurs peu spécifiques CD34 CD99 EMA Protéine S100 AML Bcl2 Calponine 77
78 Tumeurs conjonctives CD34 + Tumeurs vasculaires DFSP Tumeur fibreuse solitaire GIST Lipomes à cell fusiformes/pléomorphes Tumeurs des gaines des nerfs périphériques Sarcome épithélioïde 78
79 Tumeurs CD99 + Ewing sarcoma / PNET Synovialosarcome Tumeur fibreuse solitaire Lymphome lymphoblastique Leucémies Thymomes Méningiomes Rhabdomyosarcome 79
80 Marqueurs avec positivités inattendues Kératines Desmine CD31 CD117 Fli-1. 80
81 Positivité inattendue pour la cytokératine Leiomyosarcome Rhabdomyosarcome PNET Tumeurs vasculaires épithélioïdes Mélanome 81
82 PNET et cytokératine 82
83 TTSCG et desmine 83
84 Il n y a pas de marqueur spécifique Marqueurs peu spécifiques Positivités inattendues Utiliser un panel de maqueurs IHC doit être interprétée en fonction des contextes clinique et histologique Importance de la biologie moléculaire 84
85 Il n y a pas de marqueur spécifique Marqueurs peu spécifiques Positivités inattendues Utiliser un panel de maqueurs IHC doit être interprétée en fonction des contextes clinique et histologique Importance de la biologie moléculaire 85
86 Il n y a pas de marqueur spécifique Marqueurs peu spécifiques Positivités inattendues Utiliser un panel de maqueurs IHC doit être interprétée en fonction des contextes clinique et histologique Importance de la biologie moléculaire 86
87 Immunohistochimie et tumeurs des tissus mous Conclusions Technique d intérêt majeur Qualité de la technique Panel de marqueurs en fonction de l HE Interprétation globale 87
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