Hémochromatose Nora Chelloug

Transcription

1 Hémochromatose Nora Chelloug Cytogénétique - 10/02/2000

2 INTRODUCTION Hémochromatose génétique ou héréditaire Maladie autosomique récessive Surcharge progressive en fer 10 Accumulation dans parenchyme de certains organes (foie, surrénales, cœur ) 10 Apparition d insuffisances fonctionnelles

3 INTRODUCTION Mécanisme physiopathologique? = augmentation de l absorption intestinale du fer Maladie rare = la plus commune dans les populations d Europe du Nord Prévalence = 1/300 (1/200) : homozygotes atteints 10 % d hétérozygotes (1/8 : populations caucasiennes)

4 INTRODUCTION Identification récente du gène HFE et de la mutation C282Y 10 Confirmer la prévalence, l ethnie, le mode de transmission 10 Diagnostic simple, spécifique 10 Stratégie par un dépistage systématique de masse

5 CLASSIFICATION Surcharge ferrique primitive Hémochromatose héréditaire - HFE lié = C282Y, HLA, H63D? Hémochromatose héréditaire - HFE non lié = C282Y, HFE 2? Hémochromatose juvénile (nouveau-né, enfant) = C282Y, HLA

6 CLASSIFICATION Surcharge ferrique primitive Surcharge ferrique de l Africain et de l Américain noir = C282Y Hyperferritinémie - Saturation normale = C282Y, H63D (2/3) Hyperferritinémie - Cataracte

7 CLASSIFICATION Surcharge ferrique secondaire Thalassémie majeure Sphérocytose héréditaire = érythropoïèse inefficace Alcool Porphyrie cutanée tardive = C282Y (homozygote, hétérozygote)

8 CLINIQUE Précoce 10 Diabète, hypogonadisme 10 Sécheresse ichtyosiforme, déformation des ongles, cheveux fins 10 Myocardite, arthralgie (2ème, 3ème MCP) 10 Asthénie, hépatomégalie, 10 Transaminases, hypersidérinémie

9 CLINIQUE Tardif 10 Mélanodermie 10 Insuffisance cardiaque, rhumatisme chronique 10 Cirrhose, hépatocarcinome 10 Fer périportal Fer intrahépatocytaire Fibrose = constante (réserve en fer = 10 x VN Fer serrique > 1000 µg/l)

10 CLINIQUE Intérêt du diagnostic précoce Prévention = Saignée Rq : 90 % H : homozygotes C282Y 70 % F : homozygotes C282Y développent la maladie en absence de traitement

11 DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE Indications 10 Hépatomégalie, pigmentation cutanée, asthénie 10 Cardiomyopathie Diagnostic d orientation 10 Bilan martial : 10 Fer serrique : > 35 µmol/l 10 Coefficient de saturation de la transferrine (CST) >0,60 H, >0,50 F 10 Ferritinémie : > 300 µg/l H, > 400 µg/l F

12 DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE 10 Transaminases : SGOT, SGPT 10 Groupage HLA = 10 HLA A % population générale 10 75% hémochromatose 10 HLA B14 Rq = CST normal - Ferritine 10 Traitement = oestroprogestatif 10 Hyperthyroïdie 10 Syndrome inflammatoire 10 Alcool

13 DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE Diagnostic de certitude 10 Ponction biopsie hépatique 10 Concentration hépatique en fer (= CHF) : > 100 µmol/g de tissu sec 10 Ratio : CHF / AGE (> 2)

14 GENETIQUE MOLECULAIRE LE GENE Historique 10 Localisation chromosomique = 6p21 10 Liaison avec gènes du complexe majeur d histocompatibilité : HLA - A 10 Découverte du gène 10 Hypothèse 10 Effet fondateur d une mutation 10 Déséquilibre de liaison

15 GENETIQUE MOLECULAIRE LE GENE 10 Gène / marqueurs polymorphes (45) 10 Région de 6 mégabases 10 Haplotype ancestral (sujets malades) 10 Haplotype Commun = région restreinte = 250 Kb 10 Séquençage gènes inconnus 10 1 mutation préférentielle (malades / témoin)

16 GENETIQUE MOLECULAIRE LE GENE Gène candidat HLA - H = HFE (nomenclature internationale) Séquence d ADN = 12 Kb CDNA (partie codante) = 2,4 Kb 7 exons Expression ubiquitaire (sauf cerveau)

17 GENETIQUE MOLECULAIRE LES MUTATIONS C282Y (cystéine / tyrosine) 10 Absente : Asie, Afrique, Finlande 10 USA (juifs séfarades) 10 Europe 10 Gradient décroissant (Nord/Ouest, Sud/Est) % hétérozygotes - Irlande 3% hétérozygotes - Italie 10 Mutation Nord-européenne 10 Fréquence dans population générale = 6%

18 GENETIQUE MOLECULAIRE LES MUTATIONS H63D (histidine / acide aspartique) 10 Polymorphisme? Mutation mineure? 10 Fréquence élevée dans population générale = 17% 10 Mais : > 50% sujets atteints Rq = fréquence des hétérozygotes = 1/17

19 GENETIQUE MOLECULAIRE LA PROTEINE Protéine AA 10 Protéine transmembranaire 10 Structure primaire connue 10 Homologie avec HLA-A 2 10 Rôle? 10 Récepteur d un ligand fixant le fer 10 Signal de transduction 10 Système immunitaire (expression HLAI sur membranes)

20 GENETIQUE MOLECULAIRE LA PROTEINE 10 Cystéine : rôle dans maintien de structure tertiaire du domaine α3 10 Conformation essentielle à l interaction de chaîne α avec B 2 microglobuline 10 Mutation C282Y = destruction du pont disulfure indispensable à cette liaison

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22 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE Diagnostic simple = techniques classiques de biologie moléculaire Altération de sites de restrictions enzymatique par les deux mutations = C282Y - H63D Méthode : 10 Sang total (EDTA : 5 ml) 10 Extraction d ADN Rq : Consentement écrit indispensable (loi = article L loi du 29 juillet 1994)

23 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE 10 PCR = Amplification simultanée des deux fragments d ADN 10 Digestion enzymatique = 2 enzymes de restriction = RSAI, BCLI 10 Migration : électrophorèse = Gel d agarose

24 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE PCR = principe de base 5 3 A T C G C T T T A G C G A A ADN = Double brin 3 5

25 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE PCR = principe de base 5 3 Dénaturation = 94 C ADN : simple brin A T C G C T T C G A A 3 * 5 Séquence d acide nucléique = amorce (15 à 17 nucléotides) 5 A T C T A G C G A A Fixation des amorces = 57 C * (température d annealing) * Elongation = 72 C Ezyne TAQ polymerase

26 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE PCR = principe de base 5 3 A T C G C T T T A G C G A A A T C G C T T T A G C G A A 3 5

27 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE Digestion enzymatique RSA I 5 G T C C C A G G 3 ADN normal 3 5 G T C C C A G G 1 fragment

28 DIAGNOSTIC MOLECULAIRE Digestion enzymatique 5 * G T A C C A T G 3 * ADN muté Création d un site de restriction 3 5 G T A C C A T G 2 fragments

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31 DIAGNOSTIC : CONDUITE A TENIR Bilan biologique perturbé 10 CST (++) 10 Ferritine 10 Tests hépatiques fonctionnels normaux 10 Eliminer une cause secondaire surcharge fer

32 DIAGNOSTIC : CONDUITE A TENIR Diagnostic génotypique Homozygote hétérozygote composite hétérozygote hyperferritinémie C282Y / C282Y C282Y /H63D C282Y/normal un peu élevé homozygote hétérozygote non en faveur du H63D / H63D H63D / normal diagnostic Confirme le compatible avec une Enquête familiale diagnostic hémochromatose d hémochromatose héréditaire ( degré de ferritinémie) Examens complémentaires = IRM) Ponction biopsie hépatique (CHF / AGE) IRM --> diagnostic de certitude

33 DIAGNOSTIC : CONDUITE A TENIR Diagnostic génotypique Enquête familiale - 2 individus hétérozygotes - 1 individu homozygote individu hétérozygote 1/4 enfant atteint 1/20 enfant atteint

34 CONCLUSION Questions? 10 Pénétrance 10 Expressivité variable de la maladie 10 Sujets homozygotes C282Y = absence du tableau classique 10 Fréquence élevée en Bretagne et Irlande des hétérozygotes = 17 à 20 % Fréquence théorique de la maladie = 1/100 à 1/ Rôle de facteurs génétiques associés

35 CONCLUSION 10 Dépistage de masse 10 Caractéristiques : 10 Sévérité clinique 10 Caractère invalidant 10 Mortalité 10 Fréquence élevée 10 Méthode simple de diagnostic 10 Etude de la protéine 10 Meilleure compréhension de la physiopathologie

36 CONCLUSION 10 Hémochromatose héréditaire non HFE lié 10 Autres mutations? 10 Introns 10 Séquences régulatrices 10 Autres gènes?