Agrégométrie plaquettaire
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- Jean-Marie Savard
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1 Agrégométrie plaquettaire Gold standard (LTA) variabilité matérielle (30 années d évolution) automatisation et informatisation Mesure de la baisse de turbidimétrie du milieu observé contenant le PRP (prélèvement sur citrate de Na) après adjonction d un agent agrégant les plaquettes Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
2 Agrégométrie plaquettaire Conditions pré analytique impératives et rigoureuses Opérateur dépendant et personnel qualifié lecteur optique (PRP) spectrophotométrie laser impédancemétrie sang total (WBA) mesure de la sécrétion plaquettaire luminescence canaux multiples : analyses en série Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
3 Agrégométrie plaquettaire Applications aux pathologies vasculaires études des filières mises en jeu par les traitements utilisés ADP, acide arachidonique, collagène, épinéphrine, héparine, thrombine, ristocétine Thrombopénie induite par héparine (HNF, HBPM, pentasaccharide, danaparoïde) outil de référence pour les études biologiques et thérapeutiques Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
4 Multiplate Agrégométre à impédance sang total (héparinate de lithium) étude de l adhésion et de l agrégation 1 cellule test avec 4 électrodes 5 canaux (tests en parallèle) adjonction de l agoniste nécessaire après incubation signal impédancemétrique à partir des électrodes tests prêts à l emploi : Ac arachidonique (aspirine) ADP (thienopyridines) TRAP 6 (antagonistes des GPIIb/IIIa) Fonction plaquettaire Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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7 Verify now system Détection optique turbidimétrique Agrégation plaquettaire induite Test compétitif (microbilles coatées avec du fibrinogène) Monitorage de 3 catégories d agents anti plaquettaires acide arachidonique (aspirine) ADP et PGE1 (clopidogrel et ticlopidine récepteurs P2Y12 antagonistes de la GPIIb/IIIa (iso TRAP : abciximab, eptifibatide et tirofiban) Risques médicamenteux Philosophie Point of Care Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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9 Impact R et Impact Flux artériel simulé sur sang total (citrate de Na) Etude de l adhésion et de l agrégation plaquettaire Flux laminaire créé par dépression mécanique Adhésion des protéines plasmatiques sur une membrane de polystyrène Adhésion et agrégation des plaquettes sur la membrane Lavage, fixation et quantification de la réaction par analyse d image dépistage des anomalies de l hémostase plaquettes dépendantes (glycoprotéines) monitorage des anti GPIIb/IIIa et de l aspirine Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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11 Cytométrie de Flux Gold standard bis? Analyses quantitatives et qualitatives Quantification des glycoproteines de surface Activation plaquettaire en réponse à un agoniste Modification de taille et structure (dégranulation) Etudes du contenu granulaire (perméabilisation) Thrombopénies AI, TIH et plaquettes immatures (IPF) Monitorage des médicaments antiplaquettaires aspirine thienopyridines (résistance) anti GPIIb/IIIa (suivi post angioplastie) Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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16 Etude la protéine VASP en CMF Liée au récepteur P2Y12 Etude du récepteur P2Y12 non aisée en CMF (sites < 500) Analyse sur sang total citraté Niveau de phosphorylation de VASP entre un état d inhibition plaquettaire et un état d activation induit par l ADP Résultat en index de réactivité plaquettaire (PRI) Sujets sains ou coronariens non traités par thienopyridines : 80 % Patients traités par thienopyridines : 50 % Test non influencé par l aspirine, le reopro, l integrélin Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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18 Elisa VASP Adaptation de la technique CMF au format Elisa Corrélations correcte vis-à-vis du référentiel CMF (PRI) Utilisation rendue possible dans tous les laboratoires Test spécifique de l inhibition de la voie P2Y12 Monitorage des thienopyridines et analogues Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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21 Plateletworks Etude de l agrégation plaquettaire en milieu liquide avec un analyseur hématologique standard de type impédancemétrie (effet Coulter) Analyse sur sang total basée sur la comparaison entre un décompte sur tube de base EDTA et sur tube spécifique avec inducteur Ac arachidonique, ADP, collagène Monitorage des traitements par aspirine et thienopyridines Dépistage du risque hémorragique Philosophie Point of Care Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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23 Thrombo elastographie (thrombo élastométrie) Un retour surprenant après 30 ans de traversée du désert Amélioration technologique Etude de l adhésion et de l agrégation plaquettaire Hellige et Rotem électronisation traitement des données analyse mathématique objective Utilisation en sang total citraté Recalcification et ajout d inducteurs selon la nécessité diagnostique Philosophie Point of Care Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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25 TEG 5000 Indication rapide sur la présence d une coagulopathie : hémorragie, thrombose, fibrinolyse vitesse de formation des caillots solidité et stabilité de la coagulation effet des plaquettes, des facteurs de coagulation et des interactions plaquettaires fonction maximale des plaquettes risques d hémorragie et de thrombose identification de la fibrinolyse hyperanticoagulation ou hypoanticoagulation Philosophie Point of Care (sang total hépariné) Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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28 Innovance PFA 200 Cartouche collagène / Epi Cartouche collagène / ADP Cartouche Innovance PFA P2Y Madsen EH, Schmidt EB, Maurer-Spurej E, Kristensen SR - Effects of aspirin and clopidogrel in healthy men measured by platelet aggregation and PFA-100. Platelets, 19,5 : , 2008 Mc Glasson DL, Shah AD, Fritsma GA Ability of the INNOVANCE PFA P2Y system to detect clopidogrel-induced ADP receptor blockade in preangiocath individuals Bloods Coagul Fibrinolysis, 2011, Jul 27, Epub Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
29 Medicaments anti plaquettes Anti GPIIb/IIIa (voie injectable) Abciximab (reopro) Eptifibatide (integrelin) Tirofiban (agrastat) Aspirine : duoplavix et génériques (per os) Dipyridamole : persantine et génériques (per os) Thienopyridines (per os) Ticlopidine (ticlid et génériques) Clopidogrel (plavix et génériques) Prasugrel (efient) Iloprost (ilomedine) : voie veineuse analogue de la prostacycline Iloprost (ventavis): voie nasale analogue de la prostacycline Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
30 Produits en attente d AMM ou en développement Anti P2Y12 (non thienopyridines) Ticagrelor : AMM pour brilique (per os) * en attente de prix Cangrelor (voie injectable) * étude en cours (BRIDe) Inhibiteurs du TXA2 Ozagrel et Picotamide * développement en cours Pr Gérard DINE Mars 2012 Club PFA Siemens
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