Guide du système. Logiciel Navios tetra. Réf AA (Septembre 2009) Beckman Coulter, Inc N. Harbor Blvd. Fullerton, CA 92835

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1 CLEAR WATER Logiciel Navios teta Guide du système CAROUSEL CLEANING: PREPARE A SOLUTION OF 11 PART HOUSHOLD BLEACH (5% SOLUTIONOF SODIUM HYPOCHLORITE) AND 99 PARTS WATER, RINSE CAROUSEL WITH SOLUTION, LIGHTLY RUB IF IF NECESSARY. IMMEDIATELY RINSE WITH (Septembe 2009) Beckman Coulte, Inc N. Habo Blvd. Fulleton, CA 92835

2 AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS VEUILLEZ LIRE TOUS LES MANUELS DU PRODUIT ET CONSULTER LE PERSONNEL FORMÉ DE BECKMAN COULTER AVANT D'UTILISER L'INSTRUMENT. NE TENTEZ PAS D EFFECTUER UNE PROCÉDURE AVANT D AVOIR ATTENTIVEMENT LU TOUTES LES INSTRUCTIONS. RESPECTEZ TOUJOURS LES ÉTIQUETTES APPOSÉES AU PRODUIT ET SUIVEZ LES RECOMMANDATIONS DU FABRICANT. EN CAS DE DOUTE SUR LA PROCÉDURE À SUIVRE DANS UNE SITUATION DONNÉE, CONTACTEZ VOTRE REPRÉSENTANT BECKMAN COULTER. RISQUES, PRÉCAUTIONS D UTILISATION ET LIMITES Les notices AVERTISSEMENT, PRÉCAUTION et IMPORTANT vous aletent su les sujets suivants : AVERTISSEMENT - Risque de blessues. PRÉCAUTION - Risque de dommages pou l instument. IMPORTANT - Risque de ésultats eonés. BECKMAN COULTER, INC. INCITE FORTEMENT SES CLIENTS À SUIVRE LES CONSIGNES NATIONALES DE SANTÉ ET DE SÉCURITÉ TELLES QUE L'UTILISATION D'ÉQUIPEMENTS DE PROTECTION PERSONNELLE. CELA PEUT INCLURE, SANS Y ÊTRE LIMITÉ, LE PORT DE LUNETTES DE PROTECTION, DE GANTS ET D UN VÊTEMENT DE LABORATOIRE APPROPRIÉ LORS DE L UTILISATION OU DE L ENTRETIEN DE CET INSTRUMENT OU DE TOUT AUTRE ANALYSEUR AUTOMATISÉ DE LABORATOIRE. AVERTISSEMENT Risque de blessues copoelles si : Toutes les potes, tous les capots et panneaux ne sont pas femés et fixés solidement avant et pendant l utilisation de l instument. L intégité des veouillages et des capteus de sécuité n est pas assuée. Les alames et les messages d eeu de l instument ne sont pas pis en considéation et suivis. Vous entez en contact avec des pièces mobiles. Vous ne manipulez pas avec pécaution des pièces ompues. Les potes, les capots et les panneaux ne sont pas soigneusement ouvets, femés, etiés et/ou eplacés. Des outils inadaptés sont utilisés los du dépannage. Pou évite toute blessue : Gadez toutes les potes, tous les capots et panneaux femés et fixés solidement pendant l utilisation de l instument. Sevez-vous de toutes les fonctions de sécuité de l instument. Ne désactivez aucun veouillage ou capteu de sécuité. Penez connaissance des alames et messages d eeu et agissez en fonction de ceux-ci. Restez à distance des pièces mobiles. Signalez toute pièce endommagée à vote epésentant Beckman Coulte. Ouvez/etiez et femez/eplacez soigneusement les potes, les capots et les panneaux. Utilisez des outils adaptés los du dépannage. PRÉCAUTION L intégité du système peut ête compomise et des dysfonctionnements peuvent suveni si : Cet équipement est utilisé d une manièe aute que celle spécifiée Utilisez l instument confomément aux instuctions figuant dans les manuels d utilisation. Vous chagez dans vote odinateu des logiciels non agéés pa Beckman Coulte. N utilisez l odinateu de vote système qu avec des logiciels agéés pa Beckman Coulte. Vous installez un logiciel qui n est pas une vesion d oigine potégée pa des doits d auteus. N utilisez que des logiciels qui sont des vesions d oigine potégées pa des doits d auteus afin d évite toute contamination pa vius infomatique. IMPORTANT Si vous avez acheté cet instument aupès d un oganisme qui n est ni Beckman Coulte, ni un evendeu agéé de Beckman Coulte, et s il n est pas actuellement sous contat de sevice apès-vente et d entetien avec Beckman Coulte, Beckman Coulte ne peut pas gaanti qu il est équipé des modifications techniques obligatoies les plus écentes ni que vous ecevez les bulletins d infomations les plus écents concenant cet instument. Si vous avez acheté cet instument aupès d une tiece pesonne et souhaitez de plus amples infomations su ce sujet, veuillez contacte vote epésentant Beckman Coulte.

3 STATUT DE LA RÉVISION Vesion AA, édition initiale 9/2009 Logiciel Navios teta vesion 1.0. Aide en ligne du système Navios teta vesion 1A Ce document s applique au denie logiciel épetoié et aux vesions supéieues. Losqu'une nouvelle vesion logicielle modifie les infomations de ce document, une nouvelle édition paaîta su le site Web Beckman Coulte. Pou les mises à jou du maquage, voyez le site et téléchagez la denièe vesion du manuel ou de l'aide en ligne de vote instument. iii

4 STATUT DE LA RÉVISION iv

5 TABLE DES MATIÈRES AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS STATUT DE LA RÉVISION, iii INTRODUCTION, xi VUE D ENSEMBLE, xi AVANT DE COMMENCER, xi À popos de ce guide du système, xi À popos du logiciel de vote instument, xi CONVENTIONS, xi GRAPHIQUES, xii SYMBOLES DE SÉCURITÉ, xii 1 UTILISATION ET FONCTION, VUE D ENSEMBLE, USAGE PRÉVU, RÉSUMÉ ET EXPLICATION, 1-1 Réactifs/logiciel de l instument, 1-1 Système de cytométie en flux Navios, 1-1 Logiciel du système Navios teta, PRINCIPES DE TEST, 1-2 Panel immunophénotypage de lymphocytes, 1-2 Vue d ensemble du logiciel automatisé, 1-2 Potocole de standadisation, 1-3 Potocoles de compensation, 1-3 Potocoles de véification, 1-3 Potocoles de paamètes, 1-3 Pésentation de l algoithme d analyse, 1-3 Régions d amoçage, 1-4 Contou d intéêt des lymphocytes à 3 dimensions, 1-4 Détemination des valeus absolues, LES MATÉRIAUX NAVIOS teta, 1-5 Les éactifs, 1-6 Réactifs anticops monoclonaux, 1-6 Réactifs de contôle de qualité, 1-6 Réactif facultatif, INSTALLATION DU LOGICIEL, VUE D ENSEMBLE, AVANT L'INSTALLATION DU LOGICIEL, 2-1 v

6 TABLE DES MATIÈRES 2.3 INSTALLATION DU LOGICIEL, 2-2 Installation du logiciel Navios teta, PROTOCOLES, PANELS ET APPLICATIONS, 2-6 AutoSetup II : Potocoles et applications Navios teta, COMPOSANTS DU SYSTÈME, VUE D ENSEMBLE, MATÉRIEL REQUIS POUR LE SYSTÈME Navios teta, MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE NÉCESSAIRE, MATÉRIEL FACULTATIF, POUR COMMANDER DES COMPOSANTS DE RECHANGE, CONDITIONS DE STOCKAGE ET STABILITÉ, 3-3 Échantillon de sang total, 3-3 Échantillon et échantillon pépaé, 3-4 Réactifs, IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES, VUE D ENSEMBLE, PARAMÉTRAGE DE L'INSTRUMENT, PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS, PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ), 4-1 Paamétage du contôle de qualité, 4-1 Pépaation de l'échantillon de contôle de qualité, 4-3 Acquisition des données de CQ, 4-4 Résultats, 4-12 Potocoles de standadisation AS teta TBNK FC (Flow-Set Po), 4-12 Potocoles de compensation, 4-13 IT FC, 4-15 IT FC, PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS, 4-17 Vue d'ensemble, 4-17 Pocédue, 4-17 Acquisition de données, 4-17 Résultats des données, 4-19 Résultats d'échantillon avec le panel teta TBNK Flow-Count, 4-19 Détemination des valeus absolues : méthode Flow-Count (plate-fome unique), BOÎTE DE DIALOGUE ANALYSIS RESULTS (RÉSULTATS DE L'ANALYSE), 4-21 vi

7 TABLE DES MATIÈRES 4.7 IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS, 4-22 Impession des appots de panel, 4-22 Impession automatique, 4-22 Impession manuelle de appots de panel, 4-22 Conseils pou sélectionne les appots, 4-25 Modification des commentaies d'un appot, 4-26 Saisie et modification d'infomations dans la base de données, CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES, VUE D ENSEMBLE, PLAGES DE RÉFÉRENCE, LINÉARITÉ, 5-2 CD45/CD4/CD8/CD3, 5-3 CD45/CD56/CD19/CD3, EXACTITUDE DE LA MÉTHODE, 5-5 CD45/CD4/CD8/CD3, 5-7 CD45/CD56/CD19/CD3, PRÉCISION, SPÉCIFICITÉ, 5-12 Spécificité des éactifs, 5-12 Contôle de qualité, LIMITATIONS/AVERTISSEMENTS, VUE D ENSEMBLE, LIMITATIONS DES RÉACTIFS, LIMITATIONS DU SYSTÈME, DÉCLARATION DES AVERTISSEMENTS, RÉFÉRENCES, 7-1 A DÉPANNAGE, A-1 A.1 VUE D ENSEMBLE, A-1 A.2 MESSAGES D'ERREUR NAVIOS teta, A-1 A.3 MESSAGES D'ERREUR DU LOGICIEL NAVIOS, A-4 B DISPONIBILITÉ DU PRODUIT, B-1 C SORTIES IMPRIMÉES, C-1 C.1 VUE D ENSEMBLE, C-1 vii

8 TABLE DES MATIÈRES C.2 RAPPORT DE PANEL, C-1 C.3 SORTIES IMPRIMÉES FlowPAGE, C-4 D CONFIGURATION DU RAPPORT DE PANEL, D-1 D.1 VUE D ENSEMBLE, D-1 INDEX, INDEX-1 ACCORD DE LICENCE DU CLIENT UTILISATEUR FINAL DE BECKMAN COULTER, INC. MARQUES COMMERCIALES Documentation du système de cytométie en flux Navios viii

9 ILLUSTRATIONS 1.1 Contou d intéêt des lymphocytes à 3 dimensions, Configuation du block filte deux lases 6 couleus, Configuation du block filte deux lases 8 couleus, Configuation du block filte tois lases 10 couleus, Fluoosphèes Flow-Set Po analysées avec le potocole AS teta_stand (Flow-Set Po), Tube de compensation CD45-FITC analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL01, Tube de compensation CD45-PE analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL02, Tube de compensation CD45-ECD analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL03, Tube de compensation CD45-PC5 analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL4, Cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT FC, Cellules IMMUNO-TROL Low coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT Low FC, Cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT FC, Cellules IMMUNO-TROL Low coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT Low FC, Sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysé avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole teta Flow-Count, Sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysé avec le potocole teta Flow-Count, Boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l'analyse) : teta FC, Boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l'analyse) : teta FC, Linéaité : cellules CD3+, Linéaité : cellules CD3+CD4+, Linéaité : cellules CD3+CD8+, Linéaité : cellules CD3+, Linéaité : cellules CD19+, Linéaité : cellules CD3-CD56+, Analyse de égession : cellules CD3+, Analyse de égession : cellules CD3+CD4+, Analyse de égession : cellules CD3+CD8+, Analyse de égession : cellules CD3+, Analyse de égession : cellules CD19+, Analyse de égession : cellules CD3-CD56+, 5-8 A.1 Où appaaissent les messages d'eeu, A-1 C.1 Rappot de panel - exemple 1, C-2 C.2 Rappot de panel - exemple 2, C-3 C.3 Exemple de sotie impimée FlowPAGE : page 1, C-4 C.4 Exemple de sotie impimée FlowPAGE : page 2, C-5 ix

10 TABLEAUX 2.1 Potocoles et applications : AutoSetup II, Potocoles/panels teta pou le dosage d'application teta, Matéiel nécessaie, Stabilité de l'échantillon et de l'échantillon pépaé, Récapitulatif de la pépaation des échantillons de CQ, Sang total nomal : CD45/CD4/CD8/CD3, Sang total nomal : CD45/CD56/CD19/CD3, Plage de mesue de la linéaité, Spécifications de l'exactitude - sang total, Exactitude de la méthode : poucentage positif (% lymphocytes +), Exactitude de la méthode : valeu absolue (cellules/µl), Spécification de épétabilité - sang entie, cellules IMMUNO-TROL et cellules IMMUNO-TROL Low, Répétabilité : IMMUNO-TROL, Répétabilité : IMMUNO-TROL Low, 5-11 A.1 Messages d'eeu Navios teta affichés dans la boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l analyse), A-2 A.2 Messages d'eeu Navios teta affichés pa le logiciel Navios, A-4 x

11 INTRODUCTION VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : AVANT DE COMMENCER CONVENTIONS GRAPHIQUES SYMBOLES DE SÉCURITÉ AVANT DE COMMENCER À popos de ce guide du système Le guide du système Navios teta donne des infomations de éféence et des instuctions su la manièe d'utilise le système Navios teta. Utilisez ce guide conjointement avec les Instuctions d utilisation du cytomète en flux Navios, éf Utilisez ce guide et les notices des éactifs epis à la section Les éactifs. Les notices contiennent des infomations spécifiques à chaque éactif que ce guide ne founit pas. Pou des infomations complémentaies, voyez la Rubique 3.6, CONDITIONS DE STOCKAGE ET STABILITÉ. À popos du logiciel de vote instument Le logiciel Navios doit ête installé su vote station de tavail Navios. CONVENTIONS Ce guide utilise les conventions suivantes : Dans tout ce manuel, vote Navios est également appelé «système» ou «instument». Un caactèe gas indique une option à l'écan, comme Cytomete (Cytomète). Un caactèe italique indique du texte affiché su l'instument comme Pepaing Samples (Pépaation des échantillons en cous). La police Couie indique du texte que vous devez tape à l'aide du clavie. ë indique une touche (comme pa exemple Û). ë+ë indique que les deux touches indiquées (comme Þ+Ê) sont liées pou une fonction spécifiques et doivent ête enfoncées dans l'ode suivant : a. Appuyez su la pemièe touche indiquée et, tout en la maintenant enfoncée, appuyez su la deuxième touche indiquée. b. Relâchez les deux touches en même temps. ë ë signifie qu'il faut enfonce et elâche la pemièe touche indiquée puis enfonce et elâche la seconde touche indiquée. Pa exemple, Y Û. Sélectionnez signifie qu'il faut utilise la souis pou sélectionne à l'écan le bouton maqué. Sélectionnez File (Fichie) tt Save (Enegiste) indique qu'il faut utilise la souis pou sélectionne l'élément Save (Enegiste) dans le menu File (Fichie). xi

12 INTRODUCTION GRAPHIQUES Les touches É à Ô sont des touches de fonctions spéciales. Une Remaque contient des infomations dont il faut se souveni ou qui sont utiles los de l'exécution d une pocédue. Les temes «écan» et «fenête» sont utilisés de manièe intechangeable. Le éactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 est pafois appelé CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 ou Le éactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 est pafois appelé CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 ou TBNK fait éféence à des cellules T, B et NK. IVD signifie Diagnostic in vito. IT fait éféence à IMMUNO-TROL. IT Low fait éféence à IMMUNO-TROL Low. SPT fait éféence à Single Platfom Technology (Technologie à plate-fome unique). PDF est un type de fichie de données potable pouvant ête lu pa Adobe Acobat Reade. XLS est un fichie Micosoft Excel. GRAPHIQUES Tous les gaphiques, y compis les écans et les soties impimées ne sont donnés qu à tite indicatif et ne doivent pas ête utilisés autement. SYMBOLES DE SÉCURITÉ Les symboles de sécuité vous avetissent de conditions isquant de pésente un dange. Ces symboles, accompagnés de leu texte, s appliquent à des pocédues spécifiques et appaaissent quand ils sont nécessaies au fil de ce manuel. Symbole Condition d avetissement Action Risque biologique. Considéez tous les poduits utilisés (pélèvements, éactifs, contôles, calibants, etc.) et toutes les zones avec lesquelles ces poduits entent en contact comme étant potentiellement infectieux. Risque dans cetaines conditions. Dange possible dans cetaines conditions spécifiques. Potez les potections standad de laboatoie et espectez les nomes de sécuité en vigueu los de la manipulation de tout équipement ou matéiau de laboatoie. Lisez attentivement les infomations founies losque vous voyez ce symbole. xii

13 1UTILISATION ET FONCTION VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : USAGE PRÉVU RÉSUMÉ ET EXPLICATION PRINCIPES DE TEST LES MATÉRIAUX NAVIOS teta 1.2 USAGE PRÉVU Le logiciel Navios teta pou les système de cytométie en flux Navios, les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 combinent quate éactifs anticops monoclonaux fluoescents à quate couleus, des éactifs de contôle de qualité, un éactif de détemination de valeus absolues en option et un logiciel pou l'analyse automatisée de populations de lymphocytes dans le sang total à l'aide du système de cytométie en flux Navios. Le système avec CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 est destiné à un usage diagnostique in vito et pemet l'identification et l'énuméation simultanées du total des poucentages et des valeus absolues de population de lymphocytes CD3+, CD3+CD4+ et CD3+CD8+. 1,2,3 Le système donne aussi le appot CD4/CD8. Le système avec CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 est destiné à un usage de diagnostic in vito et pemet l'identification et l'énuméation simultanées du total des poucentages et de valeus absolues de population de lymphocytes de CD3+, CD19+ et CD3-CD56+. Ce éactif eflète la distibution des tois pincipaux sous-ensembles que constitue la population de lymphocytes su laquelle sont basées d autes études d énuméation de lymphocytes et qui founit le poucentage total de lymphocytes. 1.3 RÉSUMÉ ET EXPLICATION Réactifs/logiciel de l instument Système de cytométie en flux Navios Le système de cytométie en flux Navios applique les pincipes de la cytométie en flux pou analyse un échantillon de sang total coloé et lysé afin d identifie les difféentes populations cellulaies déteminées pa les anticops monoclonaux et fluoochomes spécifiques utilisés. Logiciel du système Navios teta La logiciel du système Navios teta est utilisé de la manièe suivante : avec des éactifs de contôle de qualité su un système de cytométie en flux Navios pou le paamétage automatisé de l instument, et avec des éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome à quate couleus (et des fluoosphèes Flow-Count en option) pou une analyse automatisée. 1-1

14 UTILISATION ET FONCTION PRINCIPES DE TEST 1.4 PRINCIPES DE TEST Ce test dépend de la capacité d'un anticops monoclonal à se fixe à la suface des cellules expimant des déteminants antigéniques discets. Une coloation de cellule spécifique est obtenue pa l incubation du sang total avec le éactif anticops monoclonaux. Les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 sont chacun une combinaison de quate anticops monoclonaux de souis, chacun conjugué à un fluoochome spécifique et spécifique pou un antigène de suface de cellule difféent. Les globules ouges sont lysés avec le système de éactifs COULTER ImmunoPep et les stations de tavail Q-Pep, Multi-Q-Pep, TQ-Pep, PepPlus 2 ou FP Les globules blancs estants sont analysés su un système de cytométie en flux Navios avec le logiciel Navios teta. Le logiciel de cytomète en flux Navios et le logiciel Navios teta, conjointement avec les éactifs de contôle de qualité assuent une standadisation automatique de la diffaction de la lumièe et des intensités de fluoescence et un églage automatisé des paamètes de compensation de couleu. Le logiciel Navios teta, conjointement avec le logiciel du cytomète en flux Navios et les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5, founissent une analyse automatisée des sous-populations de lymphocytes. Panel immunophénotypage de lymphocytes CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 offe la possibilité d énumée les sous-ensembles pincipaux de lymphocytes d un individu : T, B et NK. Le éactif peut fonctionne comme agent de contôle de qualité pou un échantillon en temes de poucentage total de lymphocytes déteminé avec la fomule suivante : 51 Poucentage total de lymphocytes (%) = % lymphocytes CD3+ (T) + % lymphocytes CD19+ (B) + % lymphocytes CD3-CD56+ (NK) CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 set aussi de contôle analytique de la fiabilité pou un échantillon en contôlant la valeu absolue de CD3+ total. 51 Vue d ensemble du logiciel automatisé L application Navios teta AutoSetup II est constituée de quate types de potocoles qui standadisent automatiquement le cytomète, èglent les paamètes de compensation, passent les paamètes du cytomète aux potocoles de test et véifient la configuation du cytomète et la pefomance des anticops. Pou obteni des infomations su des fonctions spécifiques au sujet des quate types de potocoles, voyez les ubiques : Potocole de standadisation Potocoles de compensation Potocoles de véification Potocoles de paamètes 1-2

15 UTILISATION ET FONCTION PRINCIPES DE TEST 1 Potocole de standadisation Le potocole de standadisation AS teta utilisant les fluoosphèes Flow-Set Po (AS teta TBNK FC_STAND.po) ègle automatiquement la diffusion axiale et othogonale et les hautes tensions et gains de fluoescence pou place le pic de population des fluoosphèes Flow-Set Po à des intensités spécifiques. Ces intensités spécifiques sont founies dans le Tableau des fluoosphèes Flow-Set Po des paamètes cibles de l'application afin de standadise les intensités de diffusion et de fluoescence pou l analyse d échantillons coloés avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3. Les paamètes sont chagés à pati du fichie de paamètes. Potocoles de compensation Ces potocoles sont analysés avec les paamètes des fluoosphèes Flow-Set Po et sont utilisés pou calcule les coefficients de compensation pou FITC, RD1, ECD et PC5. Les ajustements de compensation de couleu sont effectués avec le kit de cellules CYTO-COMP coloées avec le kit QuickCOMP 4. Les paamètes sont enegistés dans AS teta settings.po et peuvent ête chagés pou l analyse avec Navios teta. Pou plus d'infomations su les fichies settings.po, voyez le manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou le fichie d'aide en ligne du système Navios. Potocoles de véification Les potocoles de véification (IT FC.po, IT FC.po, IT Low FC.po et IT Low FC.po) sont analysés avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome. Ces potocoles sont utilisés pou véifie la configuation du cytomète, la pépaation des échantillons et la pefomance des anticops. Potocoles de paamètes Ce potocole (AS teta settings.po) stocke les paamètes du cytomète déteminés à pati des fluoosphèes Flow-Set Po (potocole AS teta_stand) et des tubes de compensation (potocoles AS teta FLxx). Voyez la ubique Application Definition Wizad (Assistant de définition des applications) dans le manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou le fichie d'aide en ligne du système Navios pou obteni des instuctions su la manièe de saisi des canaux cibles. Pésentation de l algoithme d analyse L'algoithme Navios teta est le composant d'analyse logicielle qui fonctionne conjointement avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome pou identifie automatiquement et énumée les populations de l'échantillon. L algoithme combine des infomations povenant de quate paamètes (FS, SS, CD45 et CD3) pou génée une gate à tois dimensions en vue d identifie les lymphocytes. Losqu'ils sont identifiés, les algoithmes de segmentation sépaent les lymphocytes en leus composants. Les ésultats sont placés dans la boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l analyse) (voi Figues 4.12 et 4.13). 1-3

16 UTILISATION ET FONCTION PRINCIPES DE TEST L'algoithme Navios teta effectue automatiquement l'analyse pou les deux potocoles (pou et ) avec et sans les fluoosphèes Flow-Count. Les potocoles Flow-Count contiennent une égion qui captue et énumèe automatiquement les fluoosphèes Flow-Count. La valeu absolue pou chaque égion est automatiquement calculée et est basée su la concentation testée des fluoosphèes Flow-Count saisie dans la boîte de dialogue Absolute Count Calibation (Calibage de valeus absolues) et sélectionnée dans le gestionnaie d acquisition. Régions d amoçage Les égions d amoçage sont utilisées comme mesue de contôle de qualité pou s assue que le pic de la population est cumulé dans la égion d'amoçage. Si la population pévue n est pas cumulée coectement et n appaaît pas dans la égion, un amoçage automatique est alos lancé. Une égion d amoçage CD3+ définie est founie pou facilite l analyse automatisée d échantillons contenant des populations de cellules lymphocytes faibles et des cellules IMMUNO-TROL Low. Contou d intéêt des lymphocytes à 3 dimensions L'algoithme Navios teta utilise quate paamètes pou identifie et optimise le contou d'intéêt des lymphocytes décit ci-dessous. La Figue 1.1 illuste les histogammes 1 et 2 de l'algoithme Navios teta : La égion GADJ de l'histogamme 1 est d'abod tacée sous la fome d'un contou d'intéêt polygonal afin d'inclue tous les lymphocytes T. La égion est ensuite optimisée pou la pueté des lymphocytes et la écupéation des cellules B et NK à l'aide de CD45 et SS. Ces événements sont analysés plus en détails dans l histogamme 2. L histogamme 2 pésente les caactéistiques de diffusion de la lumièe des lymphocytes identifiés dans l histogamme 1 (Région GADJ). La égion LADJ contient les lymphocytes qui seont analysés plus en détails pa l algoithme. Ce pocessus d identification et d optimisation du contou d intéêt des lymphocytes élimine le ecous à un éactif de gating de lymphocytes distinct. Figue 1.1 Contou d intéêt des lymphocytes à 3 dimensions 1-4

17 UTILISATION ET FONCTION LES MATÉRIAUX NAVIOS teta 1 Détemination des valeus absolues Les valeus absolues peuvent ête déteminées avec deux méthodes : la méthode Flow-Count (SPT) et la méthode à deux plates-fomes. Méthode Flow-Count (SPT) La méthode Flow-Count (SPT) utilise les fluoosphèes Flow-Count et un cytomète en flux pou détemine les valeus absolues avec la fomule suivante : Valeu absolue (cellules/µl) = (Nombe de cellules d intéêt coloées positivement Nombe de fluoosphèes Flow-Count) x Concentation testée des fluoosphèes Flow-Count Cette méthode de technologie à plate-fome unique (Single Platfom Technology, SPT) est automatisée en utilisant le système Navios teta et nécessite tous les éléments suivants : Des fluoosphèes Flow-Count doivent ête utilisées. La concentation testée des fluoosphèes Flow-Count doit ête saisie dans la boîte de dialogue Absolute Count Calibation (Calibage de valeus absolues) et sélectionnée dans le gestionnaie d acquisition los de l exécution des potocoles Flow-Count de Navios teta. Le nombe de fluoosphèes énuméées doit ête Remaque : il n est pas nécessaie d énumée le total des globules blancs pou détemine une valeu absolue pou les cellules d intéêt en cas d utilisation des fluoosphèes Flow-Count. Les poucentages et valeus absolues sont impimés automatiquement dans le Rappot de panel Navios (Figue C.1). Méthode à deux plates-fomes La méthode à deux plates-fomes calcule les valeus absolues en combinant les ésultats d hématologie et de cytométie en flux et en utilisant la fomule suivante : Valeu absolue (cellules/µl) = Nombe total de globules blancs (cellules/µl) x %lymphocytes x %Cellules d'intéêt à coloation positive 10 4 Les valeus absolues sont obtenues en utilisant la fonction Repot (Compte endu) dans le logiciel Navios. Pou de plus amples infomations su la manièe de génée un compte endu, voyez la Rubique 4.7, IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS ou l'aide en ligne Navios. Le poucentage et la valeu absolue sont impimés automatiquement dans le Patient Panel Repot (Rappot de panel de patient) (voi la Figue C.1). 1.5 LES MATÉRIAUX NAVIOS teta Le système Navios teta compend les composants suivants : Réactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 Réactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 1-5

18 UTILISATION ET FONCTION LES MATÉRIAUX NAVIOS teta Réactifs de contôle de qualité Fluoosphèes Flow-Set Po Kit QuickCOMP 4 t CD45-FITC t CD45-PE t CD45-ECD t CD45-PC5 Kit de cellules CYTO-COMP Cellules IMMUNO-TROL et/ou cellules IMMUNO-TROL Low Réactif facultatif : fluoosphèes Flow-Count Logiciel Navios teta (vesion 1.0 ou plus) pou le système de cytométie en flux Navios. Les éactifs Réactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 sont chacun une combinaison de liquide de quate anticops monoclonaux de souis. Chaque anticops est étiqueté pa un fluoochome de couleu difféente. Réactifs de contôle de qualité Les fluoosphèes Flow-Set Po sont une suspension de micosphèes fluoescentes utilisées pou standadise la diffusion de lumièe et l intensité de la fluoescence du cytomète en flux. Le kit QuickCOMP 4 est constitué de quate éactifs fluoescents d'une seule couleu utilisés conjointement avec le kit de cellules CYTO-COMP pou établi les paamètes de compensation de couleu avec une compensation de matice complète pou une analyse multicoloe. Le kit de cellules CYTO-COMP est une pépaation de lymphocytes humains lyophilisés et un tampon utilisés conjointement avec le kit QuickCOMP 4 pou égle les paamètes de compensation de couleu pou une analyse multicoloe. Les cellules IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low sont des poduits de contôle de qualité du sang total testés et lysables utilisés pou véifie l activité des éactifs CYTO-STAT tetachrome et pou véifie les méthodes utilisées pou la coloation des cellules ciblées, le lysage des éythocytes et l analyse d échantillons avec la cytométie en flux. Réactif facultatif Les fluoosphèes Flow-Count sont une suspension testée de micosphèes fluoescentes utilisées pou détemine les valeus absolues diectement su un cytomète en flux. Remaque : le Guide du système Navios teta se touve su le CD-ROM du logiciel. Le CD-ROM du logiciel n'est pas inclus avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome ou les poduits de contôle de qualité. Consevez soigneusement le CD-ROM du logiciel pou éféence ultéieue. Le Guide du système Navios teta est aussi disponible su le site 1-6

19 2INSTALLATION DU LOGICIEL VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : AVANT L'INSTALLATION DU LOGICIEL INSTALLATION DU LOGICIEL 2.2 AVANT L'INSTALLATION DU LOGICIEL Avant d'installe le logiciel Navios teta, véifiez les points suivants : B Le logiciel Navios (vesion 1.0 ou plus) a été installé su vote système de cytométie en flux Navios. B Vous avez le CD-ROM du logiciel Navios teta. B Le filte 695 BP 30 est installé à la position FL4 comme monté aux Figues 2.1, 2.2 et 2.3. Remaque : vous pouvez utilise les configuations deux lases 6 couleus, deux lases 8 couleus ou tois lases 10 couleus pou faie toune l'application Navios teta. Figue 2.1 Configuation du block filte deux lases 6 couleus 525 BP LP 660 BP DC SP 620 BP DC SP 550 DC SP 525 BP BP LP 660 BP DC SP 655 DC SP 710 DC SP 595 DC SP 730 DC SP 575 BP BP DC SP 575 BP DC SP 695 BP 30 Figue 2.2 Configuation du block filte deux lases 8 couleus 755 LP 660 BP BP DC SP 620 BP DC SP 755 LP 550 DC SP 525 BP BP LP 660 BP LP 550 DC SP 655 DC SP 710 DC SP 595 DC SP 595 DC SP 730 DC SP 750 DC SP 575 BP BP BP BP DC SP 695 BP BP DC SP 2-1

20 INSTALLATION DU LOGICIEL INSTALLATION DU LOGICIEL Figue 2.3 Configuation du block filte tois lases 10 couleus 755 LP 660 BP BP DC SP 620 BP DC SP 755 LP 480 DC SP 525 BP DC SP 525 BP BP LP 660 BP LP 450 BP DC SP 655 DC SP 710 DC SP 480 DC SP 595 DC SP 595 DC SP 730 DC SP 750 DC SP 575 BP BP BP BP BP DC SP 695 BP BP DC SP 550 BP INSTALLATION DU LOGICIEL Losque vous installez le logiciel Navios teta, les sous-épetoies Navios teta sont céés pou les potocoles et les panels. Pa exemple, si vote épetoie utilisateu Navios est C:\Beckman Coulte Use Data, les sous-épetoies suivants sont céés : C:\Beckman Coulte Use Data\Uses\admin\AcquisitionPotocol\teta C:\Beckman Coulte Use Data\Uses\admin\Panel\teta Installation du logiciel Navios teta 1 Quittez le logiciel Navios. 2 Inséez le CD-ROM du logiciel Navios teta dans le lecteu de CD-ROM. L installation démae automatiquement. 2-2

21 INSTALLATION DU LOGICIEL INSTALLATION DU LOGICIEL 2 ATTENTION : vous pouvez annule l'installation du logiciel en sélectionnant Cancel (Annule) (su cetains écans). Le message suivant s affiche : Pou annule, sélectionnez Yes (Oui). Pou continue, sélectionnez Non (Non). 3 L assistant d installation InstallShield Wizad véifie vote système et détemine s il est pêt pou l installation du logiciel Navios teta. 2-3

22 INSTALLATION DU LOGICIEL INSTALLATION DU LOGICIEL 4 Si Windows Vista ou le logiciel Navios ne sont pas installés su vote système ou que vous n avez pas les doits d accès de l administateu, un message de ce type s affiche. Dans ce cas : a. Sélectionnez OK. b. Voyez la Rubique 2.2, AVANT L'INSTALLATION DU LOGICIEL pou connaîte la liste des exigences. Losque l assistant d installation détemine que vote système est pêt, un écan de bienvenue s affiche. 5 Sélectionnez Next (Suivant) pou continue. (Pou abandonne, sélectionnez Cancel (Annule)). 6 Lisez l accod de licence. Pou accepte les temes de l'accod de licence et continue l'installation, sélectionnez Yes (Oui). Pou ejete les temes de l'accod de licence et annule l'installation, sélectionnez No (Non). 2-4

23 INSTALLATION DU LOGICIEL INSTALLATION DU LOGICIEL 2 7 Sélectionnez Next (Suivant) pou continue. 8 Les fichies du logiciel Navios teta sont installés. 9 L installation s achève. Sélectionnez Finish (Temine) pou feme la fenête. 10 Losque l'installation est teminée, consevez soigneusement vote CD-ROM. 2-5

24 INSTALLATION DU LOGICIEL PROTOCOLES, PANELS ET APPLICATIONS 2.4 PROTOCOLES, PANELS ET APPLICATIONS Tous les potocoles et panels Navios teta sont entièement céés et placés dans les dossies des panels et potocoles common\teta. Tous les potocoles Navios teta AutoSetup utilisés dans les applications AutoSetup II sont placés dans le dossie des potocoles communs. AutoSetup II : Potocoles et applications Navios teta Voi le Tableau 2.1. Tableau 2.1 Potocoles et applications : AutoSetup II Définition des applications Nom du potocole Commentaie/usage AS teta TBNK FC [AS teta TBNK FC.adf] AS teta Settings.po AS teta FC [AS teta FC.adf] AS teta Settings.po AS teta TBNK [AS teta TBNK.adf] AS teta Setttings.po AS teta TBNK FC_STAND.po AS teta TBNK FC_FL01.po AS teta TBNK FC_FL02.po AS teta TBNK FC_FL03.po AS teta TBNK FC_FL04.po IT FC Veify.po IT FC Veify.po IT Low FC Veify.po IT Low FC Veify.po AS teta FC_STAND.po AS teta FC_FL01.po AS teta FC_FL02.po AS teta FC_FL03.po AS teta FC_FL04.po IT FC Veify.po IT Low FC Veify.po AS teta TBNK_STAND.po AS teta TBNK_FL01.po AS teta TBNK_FL02.po AS teta TBNK_FL03.po AS teta TBNK_FL04.po IT Veify.po IT Veify.po IT Low Veify.po IT Low Veify.po Utilisé pou configue automatiquement l instument pou le panel TBNK FC à 2 tubes qui utilise : CD et CD avec des fluoosphèes Flow-Count pou SPT Des cellules de contôle IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low Utilisé pou configue automatiquement l instument pou le panel teta à 1 tube qui utilise : CD avec des fluoosphèes Flow-Count pou SPT Des cellules de contôle IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low Utilisé pou configue automatiquement l instument pou le panel TBNK à 2 tubes qui utilise : CD pou la technologie à deux plates-fomes CD pou la technologie à deux plates-fomes Des cellules de contôle IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low 2-6

25 INSTALLATION DU LOGICIEL PROTOCOLES, PANELS ET APPLICATIONS 2 Tableau 2.1 Potocoles et applications : AutoSetup II (suite) Définition des applications Nom du potocole Commentaie/usage AS teta [AS teta adf] AS teta Settings.po AS teta _STAND.po AS teta _FL01.po AS teta _FL02.po AS teta _FL03.po AS teta _FL04.po IT Veify.po IT Low Veify.po Utilisé pou configue automatiquement l instument pou le panel teta à 1 tube qui utilise : CD pou la technologie à deux plates-fomes Des cellules de contôle IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low AS = AutoSetup II FC = Fluoosphèes Flow-Count IT = IMMUNO-TROL SPT = Single Platfom Technology (Technologie à plate-fome unique) Tableau 2.2 Potocoles/panels teta pou le dosage d'application teta Panel Potocole Commentaie teta TBNK FC Assay.pnl teta Flow-Count(TM).po Analyse à 2 tubes CD teta Flow-Count(TM).po et CD utilisant Flow-Count pou SPT teta FC Assay.pnl teta Flow-Count(TM).po Analyse à tube unique CD utilisant Flow-Count pou SPT teta TBNK Assay.pnl teta po Analyse à 2 tubes CD teta po et CD sans Flow-Count teta Assay.pnl teta po CD à tube unique sans Flow-Count FC = Fluoosphèes Flow-Count SPT = Single Platfom Technology (Technologie à plate-fome unique) 2-7

26 INSTALLATION DU LOGICIEL PROTOCOLES, PANELS ET APPLICATIONS 2-8

27 3COMPOSANTS DU SYSTÈME VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : MATÉRIEL REQUIS POUR LE SYSTÈME Navios teta MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE NÉCESSAIRE MATÉRIEL FACULTATIF POUR COMMANDER DES COMPOSANTS DE RECHANGE CONDITIONS DE STOCKAGE ET STABILITÉ 3.2 MATÉRIEL REQUIS POUR LE SYSTÈME Navios teta Le Tableau 3.1 monte le matéiel nécessaie au système Navios teta. Tableau 3.1 Matéiel nécessaie Desciption Matéiel Système Navios teta Logiciel Navios teta Guide du système Navios teta CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et/ou CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 Fluoosphèes Flow-Set Po 3-1

28 COMPOSANTS DU SYSTÈME MATÉRIEL REQUIS POUR LE SYSTÈME Navios teta Tableau 3.1 Matéiel nécessaie (suite) Desciption Matéiel Kit QuickCOMP 4 CD45-FITC CD45-PE CD45-ECD CD45-PC5 Kit de cellules CYTO-COMP Cellules IMMUNO-TROL et Cellules IMMUNO-TROL Low Immuno-Tol Low Cells/Immuno-Tol 3-2

29 COMPOSANTS DU SYSTÈME MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE NÉCESSAIRE MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE NÉCESSAIRE Solution saline tamponnée au phosphate (PBS), ph 7,2 Épouvettes en polypopylène de 12 x 75 mm Mico-pipettes pouvant distibue 10 μl, 20 μl, 100 μl et 1000 μl de éactif Pipette Pasteu Minuteu Agitateu Votex ou équivalent Tubes de pélèvement avec anticoagulant (acide éthylène-diamino tétacétique [EDTA] ecommandé) Système de éactifs COULTER ImmunoPep Station de tavail COULTER Q-Pep, Multi-Q-Pep ou TQ-Pep Compteu de cellules (analyseu COULTER DxH 800, LH 780 ou équivalent) ou hémacytomète Cytomète en flux Navios 3.4 MATÉRIEL FACULTATIF Fluoosphèes Flow-Count. 3.5 POUR COMMANDER DES COMPOSANTS DE RECHANGE Apès l installation initiale du logiciel, il n est pas nécessaie de commande à nouveau le guide ou le CD-ROM du logiciel. Consevez soigneusement ce guide et le CD-ROM pou éféence ultéieue. Ne les jetez pas. Commandez les éactif de emplacement en utilisant les numéos de éféence donnés à l'annexe B, DISPONIBILITÉ DU PRODUIT. 3.6 CONDITIONS DE STOCKAGE ET STABILITÉ Échantillon de sang total L'échantillon de sang total est stable pendant 72 heues à tempéatue ambiante, ente 18 C et 25 C (64 F et 77 F) losque vous utilisez CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5. Losque vous effectuez le dosage complet T, B et NK avec CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5, l'échantillon de sang total est stable pendant 48 heues à tempéatue ambiante, ente 18 C et 25 C (64 F et 77 F). 3-3

30 COMPOSANTS DU SYSTÈME CONDITIONS DE STOCKAGE ET STABILITÉ Échantillon et échantillon pépaé Voi le Tableau 3.2. Tableau 3.2 Stabilité de l'échantillon et de l'échantillon pépaé Analyse Échantillon Échantillon pépaé tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 72 heues 48 heues 48 heues 48 heues Un échantillon pépaé peut ête stocké à tempéatue ambiante, ente 18 C et 25 C (64 F et 77 F), à l'abi de la lumièe si l'analyse pa cytométie en flux a lieu dans les 2 heues. Sinon, couvez l échantillon et stockez-le dans l obscuité à 2 à 8 C. Analysez l échantillon stocké dans les 48 heues. Remaque : les échantillons avec des fluoosphèes Flow-Count doivent ête analysés dans les 2 heues apès l ajout des fluoosphèes Flow-Count. Réactifs Voyez les notices des emballages pou les infomations su la stabilité des éactifs. 3-4

31 4IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : PARAMÉTRAGE DE L'INSTRUMENT PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS BOÎTE DE DIALOGUE ANALYSIS RESULTS (RÉSULTATS DE L'ANALYSE) IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4.2 PARAMÉTRAGE DE L'INSTRUMENT Avant de commence l'analyse, véifiez que le cytomète en flux est coectement aligné. Pou des instuctions à ce sujet, epotez-vous au manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou à l'aide en ligne du système Navios. 4.3 PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS Repotez-vous aux notices appopiées pou obteni des instuctions détaillées su le pélèvement d échantillons. 4.4 PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) Il existe quate applications difféentes pou la standadisation automatique, en fonction de la natue des éactifs anticops monoclonaux utilisés conjointement avec les fluoosphèes Flow-Count, les cellules IMMUNO-TROL et les cellules IMMUNO-TROL Low. Voi les Tableaux 2.1 et 2.2. Los de la configuation et du passage en evue de vos fichies de contôle de qualité, epotez-vous à la section elative au contôle de qualité du manuel Instuctions d'utilisation du logiciel Navios ou de l aide en ligne du système Navios. La pocédue CQ compend les ubiques suivantes : Paamétage du contôle de qualité Pépaation de l'échantillon de contôle de qualité Acquisition des données de CQ Paamétage du contôle de qualité Exécutez cette pocédue dans les cas suivants : avant la pemièe utilisation de Navios teta OU apès modification de numéo(s) de lot 4-1

32 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 1 Véifiez que les plages de valeus cibles supéieues et inféieues affectées aux lot de fluoosphèes Flow-Set Po utilisées ont été saisies dans le potocole Flow-Set Po appopié. Voyez la ubique Menu Analysis (Analyse) tt Linea Regions (Régions linéaies) tt Lowe Limit and Uppe Limit (Limite inféieue et limite supéieue) dans le manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou dans l'aide en ligne du système Navios pou obteni des instuctions su la manièe de saisi les limites inféieue et supéieue de la égion du canal cible. 2 Véifiez que les infomations du poduit de contôle de qualité sont coectement saisies dans la boîte de dialogue Edit Poducts (Modifie les poduits) avant la configuation automatique. Pou plus de détails su la manièe de véifie les infomations su le poduit de CQ, voyez le manuel Instuctions d'utilisation Navios ou l'aide en ligne du système Navios. 3 Véifiez que les poduits de contôle de qualité/numéos de lot coects sont affectés aux popiétés de égion pou les égions de contôle de qualité adéquates de la manièe suivante : a. Cliquez avec le bouton gauche de la souis su la égion désiée pou l active. b. Cliquez avec le bouton doit de la souis pou accéde aux popiétés de la égion. c. Véifiez que la case Region statistics expoted fo Quality Contol (Statistiques de la égion expotées pou le contôle de qualité) est cochée. d. Véifiez que le poduit de CQ est sélectionné. e. Sélectionnez OK. 4-2

33 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 4 Enegistez le potocole (File (Fichie) tt Save Potocol (Enegiste le potocole) ou Ý+S). Pépaation de l'échantillon de contôle de qualité Pépaez les échantillons de CQ confomément aux infomations données dans le Tableau 4.1 qui ésume les étapes de pépaation pou la pocédue de CQ. Repotez-vous aux notices appopiées pou des instuctions détaillées. Tableau 4.1 Récapitulatif de la pépaation des échantillons de CQ Étiquettes des tubes Réactifs Flow-Set Po FITC Comp PE Comp ECD Comp PC5 Comp Véifie IT Véifie IT Véifie IT Low Véifie IT Low Fluoosphèes Flow-Set Po 0,5 ml CD45-FITC 20 µl CD45-PE 20 µl CD45-ECD 20 µl CD45-PC5 20 µl CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 10 µl 10 µl CYTO-STAT tetachrome 10 µl 10 µl CD45/CD56/CD19/CD3 Cellules CYTO-COMP 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Cellules IMMUNO-TROL 100 µl 100 µl Cellules IMMUNO-TROL Low 100 µl 100 µl Fluoosphèes Flow-Count 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl PBS 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 4-3

34 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) Acquisition des données de CQ Suivez cette pocédue pou analyse les échantillons de contôle de qualité. (La pocédue ci-dessous a été écite pou l application AS teta TBNK FC AutoSetup.) 1 Si vous n'avez pas véifié l'alignement de l'instument comme demandé à la Rubique 4.2, PARAMÉTRAGE DE L'INSTRUMENT, faites-le maintenant. Pou des instuctions à ce sujet, epotez-vous au manuel Instuctions d'utilisation Navios ou à l'aide en ligne du système Navios. 2 Véifiez que les options de sotie sont coectes dans Wokspace Pefeences - Acquisition Options (Péféences de l espace de tavail - Options d acquisition). a. Sélectionnez File (Fichie) tt Wokspace Pefeences (Péféences de l'espace de tavail) (ou Ý+w). b. Sélectionnez. c. Véifiez les options et modifiez-les si nécessaie. d. Sélectionnez OK. Pou de plus amples infomations, epotez-vous au manuel Instuctions d'utilisation Navios ou à l'aide en ligne du système Navios. 3 Sélectionnez Tools (Outils) tt AutoSetup Schedule (Pogammeu). 4-4

35 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 4 Sélectionnez l'application AS teta TBNK FC-C. 5 Saisissez le numéo de caousel. 4-5

36 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 6 Sélectionnez Schedule (Pogamme). L écan Caousel Load Repot (Rappot de chagement du caousel) s affiche. Acquisition Manage (Gestionnaie d acquisition) est automatiquement empli avec les potocoles AS teta TBNK FC. Remaque : si des valeus absolues sont equises, sélectionnez Close (Feme) et saisissez manuellement le CAL Facto (Facteu CAL) via l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition) comme expliqué à l'étape 9. 7 Si vous voulez impime le appot de chagement du caousel : a. Sélectionnez Pint (Impime). b. Véifiez les infomations impimées. c. Sélectionnez OK. 4-6

37 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 8 Si les valeus absolues ne sont pas equises, sélectionnez Run (Analyse) dans l'écan Caousel load epot (Rappot de chagement du caousel). Si les valeus absolues sont equises, sélectionnez Close (Feme) et effectuez l'étape 9. Remaque : le potocole teta_stand pésente des égions cibles qui consevent les signaux de chacun des paamètes mesués avec les fluoosphèes Flow-Set Po. Ces égions cibles sont affectées pou chaque lot de Flow-Set Po afin d'optimise les paamètes de diffaction de la lumièe et de fluoescence de l'instument nécessaies à l'analyse des échantillons pépaés à l'aide des éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3. Il est essentiel que ces égions soient saisies coectement dans le potocole teta_stand appopié pou le lot de Flow-Set Po qui sea utilisé. Il n'est pas nécessaie de especte les instuctions de la notice du paquet de Flow-Set Po qui indiquent de eleve 20 points de données. 4-7

38 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 9 Sélectionnez le calibant appopié et saisissez la valeu de calibage : a. Sélectionnez dans l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition). La fenête Absolute Count Calibation (Calibage de valeus absolues) s ouve. b. Sélectionnez le calibant désié ou saisissez manuellement le facteu de calibage des valeus absolues. Remaque : avant de saisi le Manual Absolute Count Calibation Value (Valeu de calibage de valeus absolues manuelle), il faut coche Enable (Active) ( ). c. Sélectionnez OK. Le facteu CAL que vous avez saisi (pa ex. 981) appaaît dans l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition). Pou de plus amples infomations su l'ajout, la modification et la suppession de calibants, voyez le Manuel Instuctions d'utilisation Navios ou l'aide en ligne du système Navios. 10 À l'aide de l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition), véifiez que les positions des tubes sont coectes. 4-8

39 CLEAR CLEAR WATER WATER CLEAR CLEAR WATER WATER IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 11 Chagez les tubes dans le caousel dans l'ode suivant : ! + 2. " + 2 " # " &! " # # $ '! M " # " &! M " # # $ '! 12 Placez le caousel chagé su l instument. CAROUSEL CAROUSEL CLEANING: CLEANING: PREPARE PREPARE A SOLUTION SOLUTION OF OF 1 PART PART HOUSHOLD HOUSHOLD BLEACH BLEACH (5% (5% SOLUTIONOF SOLUTIONOF SODIUM SODIUM HYPOCHLORITE) HYPOCHLORITE) AND AND 9 PARTS PARTS WATER, WATER, RINSE RINSE CAROUSEL CAROUSELWITH SOLUTION, SOLUTION, LIGHTLY LIGHTLY RUB RUB IF IF NECESSARY. NECESSARY. IMMEDIATELY IMMEDIATELY RINSE RINSE WITH WITH 13 Femez le capot. CAROUSEL CAROUSEL CLEANING: CLEANING: PREPARE PREPARE A SOLUTION SOLUTION OF OF 1 PART PART HOUSHOLD HOUSHOLD BLEACH BLEACH (5% (5% SOLUTIONOF SOLUTIONOF SODIUM SODIUM HYPOCHLORITE) HYPOCHLORITE) AND AND 9 PARTS PARTS WATER, WATER, RINSE RINSE CAROUSELWITH CAROUSELWITH SOLUTION, SOLUTION, LIGHTLY LIGHTLY RUB RUB IF IF NECESSARY. NECESSARY. IMMEDIATELY IMMEDIATELY RINSE RINSE WITH WITH 4-9

40 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 14 Sélectionnez pou lance l'analyse. 15 Losque l'analyse est teminée, sélectionnez Finish (Temine). 16 Passez les ésultats de CQ en evue confomément aux conseils donnés à la ubique Résultats. 17 Si tous les ésultats de CQ sont acceptables, sélectionnez Appove (Appouve) pou enegiste tous les paamètes du cytomète dans le fichie teta Settings.po qui sea utilisé pou les potocoles de patient ou de dosage. Si l'un des ésultats de CQ n'est pas acceptable, sélectionnez Reject All (Tout ejete) pou ejete (ne pas enegiste) les paamètes du cytomète. Voi le chapite DÉPANNAGE. 4-10

41 CLEAR CLEAR WATER WATER CLEAR CLEAR WATER WATER IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 18 Ouvez le capot. 19 Retiez le caousel. CAROUSEL CAROUSEL CLEANING: CLEANING: PREPARE PREPARE A SOLUTION SOLUTION OF OF 1 PART PART HOUSHOLD HOUSHOLD BLEACH BLEACH (5% (5% SOLUTIONOF SOLUTIONOF SODIUM SODIUM HYPOCHLORITE) HYPOCHLORITE) AND AND 9 PARTS PARTS WATER, WATER, RINSE RINSE CAROUSEL CAROUSELWITH SOLUTION, SOLUTION, LIGHTLY LIGHTLY RUB RUB IF IF NECESSARY. NECESSARY. IMMEDIATELY IMMEDIATELY RINSE RINSE WITH WITH 20 Femez le capot du MCL losqu il n est pas en cous d utilisation. CAROUSEL CAROUSEL CLEANING: CLEANING: PREPARE PREPARE A SOLUTION SOLUTION OF OF 1 PART PART HOUSHOLD HOUSHOLD BLEACH BLEACH (5% (5% SOLUTIONOF SOLUTIONOF SODIUM SODIUM HYPOCHLORITE) HYPOCHLORITE) AND AND 9 PARTS PARTS WATER, WATER, RINSE RINSE CAROUSELWITH CAROUSELWITH SOLUTION, SOLUTION, LIGHTLY LIGHTLY RUB RUB IF IF NECESSARY. NECESSARY. IMMEDIATELY IMMEDIATELY RINSE RINSE WITH WITH 4-11

42 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) Résultats Potocoles de standadisation AS teta TBNK FC (Flow-Set Po) La Figue 4.1 monte des histogammes epésentatifs de fluoosphèes Flow-Set Po analysées avec le potocole AS teta TBNK FC_STAND. Les paamètes de haute tension et de gain sont tansféés automatiquement aux tubes de compensation puis finalement au potocole AS teta Settings.po. Passez les histogammes en evue pou véifie que les pics de fluoosphèes ont été coectement ajustés dans les égions cibles. Si les pics n'ont pas été coectement ajustés, analysez à nouveau le panel. Si les pics ne sont toujous pas dans les égions cibles, contactez vote epésentant Beckman Coulte local. Figue 4.1 Fluoosphèes Flow-Set Po analysées avec le potocole AS teta_stand (Flow-Set Po) 4-12

43 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 Potocoles de compensation Les figues 4.2 à 4.5 montent des histogammes epésentatifs de cellules CYTO-COMP coloées avec des éactifs du kit QuickCOMP 4 et analysées avec les potocoles. Les paamètes de compensation de couleu sont automatiquement tansféés ves le même fichie settings.po. Figue 4.2 Tube de compensation CD45-FITC analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL01 Figue 4.3 Tube de compensation CD45-PE analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL

44 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) Figue 4.4 Tube de compensation CD45-ECD analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL03 Figue 4.5 Tube de compensation CD45-PC5 analysé avec le potocole AS teta TBNK FC_FL4 4-14

45 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) 4 IT FC La Figue 4.6 monte des histogammes epésentatifs de cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count avec le potocole IT FC. (Voi la Figue 4.7 pou des cellules IMMUNO-TROL Low coloées de la même manièe.) Le potocole utilise l'algoithme Navios teta pou calcule les ésultats Navios teta. Confimez la pefomance des anticops en compaant les ésultats appopiés aux ésultats attendus des cellules IMMUNO-TROL donnés dans la notice. Si les ésultats ne sont pas confomes aux plages de la notice, analysez à nouveau les échantillons. Si les ésultats sont toujous en dehos des plages, pépaez de nouveaux échantillons et analysez-les. Si les ésultats sont toujous en-dehos des plages, appelez vote epésentant Beckman Coulte local. Figue 4.6 Cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT FC Figue 4.7 Cellules IMMUNO-TROL Low coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT Low FC 4-15

46 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE DE CONTRÔLE DE QUALITÉ (CQ) IT FC La Figue 4.8 monte des histogammes epésentatifs de cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count avec le potocole IT FC. Voi la Figue 4.9 pou des cellules IMMUNO-TROL Low coloées de la même manièe. Le potocole utilise l'algoithme Navios teta pou calcule les ésultats. Confimez la pefomance des anticops en compaant les ésultats appopiés aux ésultats attendus des cellules IMMUNO-TROL ou IMMUNO-TROL Low donnés dans la notice. Si les ésultats ne sont pas confomes aux plages de la notice, analysez à nouveau les échantillons. Si les ésultats sont toujous en dehos des plages, pépaez de nouveaux échantillons et analysez-les. Si les ésultats sont toujous en-dehos des plages, appelez vote epésentant Beckman Coulte local. Figue 4.8 Cellules IMMUNO-TROL coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT FC Figue 4.9 Cellules IMMUNO-TROL Low coloées avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysées avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole de véification IT Low FC 4-16

47 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS Vue d'ensemble Il existe 4 panels difféents pou l analyse des échantillons selon la natue des éactifs anticops monoclonaux utilisés conjointement avec les fluoosphèes Flow-Count. Voi le Tableau 2.2 pou plus d infomations su les difféents ensembles de éactifs anticops monoclonaux pouvant ête analysés avec les fluoosphèes Flow-Count et les panels d analyses coespondants, ainsi que les potocoles espectifs. Pocédue Le dosage TBNK Flow-Count utilise à la fois les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome et les fluoosphèes Flow-Count. Pou connaîte la pocédue de pépaation des échantillons, voyez la section Pocédue dans le mode d'emploi CYTO-STAT tetachrome, éf Veuillez note les limites de stabilité suivantes du système Navios teta : Si vous utilisez tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5, les échantillons peuvent ête pépaés dans les 72 heues apès le pélèvement. S'ils sont pépaés dans les 72 heues apès le pélèvement, les échantillons sont stables pendant 48 heues de plus s'ils sont pépaés avec le système de éactifs COULTER IMMUNO-PREP et éfigéés ente 2 C et 8 C (36 F et 46 F). Si vous utilisez tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5, les échantillons peuvent ête pépaés dans les 48 heues apès le pélèvement. S'ils sont pépaés dans les 48 heues apès le pélèvement, les échantillons sont stables pendant 48 heues de plus s'ils sont pépaés avec le système de éactifs COULTER IMMUNO-PREP et éfigéés ente 2 C et 8 C (36 F et 46 F). Acquisition de données 1 Sélectionnez pou efface l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition). 4-17

48 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS 2 Dans Resouce Exploe (Exploateu de essouces) : a. Sélectionnez. b. À pati de, faites glisse teta TBNK FC Assay.PNL dans l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition). c. Effectuez l'étape b pou chaque échantillon de patient à analyse. (Pa exemple, si 3 échantillons doivent ête analysés, effectuez l'étape b tois fois.) 3 Sélectionnez le calibant appopié : a. Sélectionnez dans l'acquisition Manage (Gestionnaie d'acquisition). La fenête Absolute Count Calibation (Calibage de valeus absolues) s ouve. b. Sélectionnez le calibant désié. c. Sélectionnez OK. La colonne CAL Facto (facteu CAL) dans le gestionnaie d acquisition est emplie avec le facteu CAL appopié. d. Pou empli automatiquement tous les panels dans la liste de tavail avec le facteu Cal sélectionné : 1) Appuyez su la touche Ü et maintenez-la enfoncée. 2) Sélectionnez. Pou de plus amples infomations su l'ajout, la modification et la suppession de calibants, voyez le Manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou l'aide en ligne du système Navios. 4-18

49 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS 4 4 Chagez et analysez les échantillons confomément aux instuctions données dans le chapite Analyse des échantillons des Instuctions d utilisation du cytomète en flux Navios ou l'aide en ligne du système Navios. Résultats des données Ces ésultats d'échantillon ont été obtenus avec des unités améicaines (cellules/µl). Des ésultats d'échantillon en unités SI (Système intenational) peuvent ête obtenus comme décit à la ubique Modèle du appot de panel des Instuctions d utilisation du cytomète en flux Navios ou dans l'aide en ligne du système Navios. Résultats d'échantillon avec le panel teta TBNK Flow-Count Le panel teta TBNK Flow-Count est composé des potocoles suivants : teta Flow-Count.po teta Flow-Count.po Ces deux potocoles sont des potocoles veouillés. Mise à pat la saisie de la concentation du dosage des fluoosphèes Flow-Count, des égions CQ et des poduits CQ, vous ne pouvez pas appote d autes ajustements ou modifications aux potocoles affichant LOCK (veouillé). La Figue 4.10 monte des gaphiques epésentatifs de fluoosphèes Flow-Count ajoutées à un échantillon de sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysé avec le potocole Navios teta Flow-Count. Les ésultats affichés/impimés dans la boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l analyse) (Figues 4.12 et 4.13) sont généés pa l'algoithme Navios teta. Figue 4.10 Sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et analysé avec des fluoosphèes Flow-Count en utilisant le potocole teta Flow-Count La Figue 4.11 monte des gaphiques epésentatifs de fluoosphèes Flow-Count ajoutées à un échantillon de sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysé avec le potocole teta Flow-Count. 4-19

50 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES PROCÉDURE D ANALYSE DES ÉCHANTILLONS Les ésultats affichés/impimés dans la boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l analyse) (Figues 4.12 et 4.13) sont généés pa l'algoithme Navios teta. Figue 4.11 Sang total coloé avec CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et analysé avec le potocole teta Flow-Count Détemination des valeus absolues : méthode Flow-Count (plate-fome unique) Les valeus absolues sont obtenues avec la concentation dosée des fluoosphèes Flow-Count saisie dans la boîte de dialogue Absolute Count Calibation (Calibage de valeu absolue) et sélectionnée dans le gestionnaie d acquisition pou l analyse. Le logiciel utilise la fomule suivante pou calcule diectement les valeus absolues avec des fluoosphèes Flow-Count : Valeu absolue (cellules/µl) = (Nombe de cellules d intéêt coloées positivement Nombe de fluoosphèes Flow-Count) x Concentation dosée de fluoosphèes Flow-Count Remaque : il n est pas nécessaie d énumée le total des globules blancs pou détemine une valeu absolue pou les cellules d intéêt en cas d utilisation des fluoosphèes Flow-Count. Le poucentage et la valeu absolue sont impimés automatiquement dans le Patient Panel Repot (Rappot de panel de patient) (Figue C.1). 4-20

51 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES BOÎTE DE DIALOGUE ANALYSIS RESULTS (RÉSULTATS DE L'ANALYSE) BOÎTE DE DIALOGUE ANALYSIS RESULTS (RÉSULTATS DE L'ANALYSE) Les ésultats du test affichés/impimés pou les applications Navios teta appaaissent dans la zone Analysis Results (Résultats de l analyse). Voi figues 4.12 et Figue 4.12 Boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l'analyse) : teta FC Figue 4.13 Boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l'analyse) : teta FC Pou affiche les ésultats de l'analyse, sélectionnez Analysis (Analyse) tt Show Analysis Algoithm Results (Affiche les ésultats de l'algoithme d'analyse). 4-21

52 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4.7 IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS Impession des appots de panel Impession automatique Si l impession automatique a été sélectionnée dans le modèle, le appot de panel est automatiquement impimé à la fin de l acquisition. Impession manuelle de appots de panel Pocédez comme suit pou impime manuellement un appot de panel (si l impession automatique est désactivée). 1 Sélectionnez su la bae d'outils du généateu de appot pou ouvi l'écan Repots Selection (Sélection des appots). 2 Rechechez le ou les appots désiés en utilisant les citèes de echeche suivants : ID du patient, nom, ID1 d échantillon ou date d analyse. a. Saisissez les citèes de echeche. b. Sélectionnez Seach (Recheche). Le denie échantillon analysé appaaît en haut de la liste pa défaut. Vous pouvez tie la liste pa ID d échantillon, ID de patient, Nom, etc. en cliquant simplement su le tite de colonne désié. Remaque : pou effectue une echeche globale et localise tous les appots d échantillon dans la base de données, laissez tous les champs de citèes vides et sélectionnez Seach (Recheche). 4-22

53 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4 3 Sélectionnez le ou les appots désiés. Pou plus de détails su la manièe de sélectionne, voyez la section Conseils pou sélectionne les appots. 4 Apès avoi sélectionné les appots désiés, l écan Repots View & Pint (Affichage et impession des appots) s affiche. 5 Sélectionnez l'onglet Patient. 4-23

54 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 6 Au besoin, utilisez pou passe les appots en evue. affiche le pemie appot affiche le appot pécédent affiche le appot suivant affiche le denie appot 7 Impimez les appots désiés : Pou impime tous les appots d'un coup, sélectionnez. Pou impime le appot actuellement affiché, sélectionnez. 8 Pou impime (ou enegiste) les appots désiés sous la fome d'un fichie PDF ou XLS : 1 enegiste le appot sélectionné sous la fome d'un fichie XLS. 2 enegiste le appot sélectionné sous la fome d'un fichie PDF. 3 enegiste tous les appots de ce goupe sous la fome de fichies XLS. 4 enegiste tous les appots de ce goupe sous la fome de fichies PDF. Pou une meilleue compéhension du compte endu impimé, voyez le manuel Instuctions d'utilisation du cytomète en flux Navios ou l'aide en ligne du système Navios. 9 Sélectionnez Exit (Quitte) losque vous avez teminé. 4-24

55 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4 Conseils pou sélectionne les appots Pou sélectionne un appot, mettez la ligne désiée en subillance et sélectionnez Select (Sélectionne). Pou sélectionne tous les appots, sélectionnez Select All (Sélectionne tout). Pou sélectionne plusieus appots qui se suivent : a. Mettez en subillance le pemie appot que vous désiez sélectionne. b. Appuyez su la touche Ü pendant que vous sélectionnez la denièe colonne à gauche du denie fichie à sélectionne. c. Relâchez Ü et le bouton de la souis. d. Les lignes sélectionnées sont mises en subillance. e. Sélectionnez Select (Sélectionne). Pou sélectionne plusieus appots qui ne se suivent pas : a. Appuyez su la touche Ý et maintenez-la enfoncée pendant que vous sélectionnez la colonne de l'extême gauche de chaque fichie. b. Les lignes sélectionnées sont mises en subillance. c. Relâchez la touche Ý losque tous les fichies désiés sont mis en subillance. Sélectionnez Select (Sélectionne). 4-25

56 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS Pou désélectionne un appot, appuyez su la touche Ý et maintenez-la enfoncée pendant que vous sélectionnez la colonne à l'extême gauche du fichie mis en subillance. Le fichie désélectionné n est plus en subillance. Modification des commentaies d'un appot Si un commentaie a été ajouté à un modèle, tous les appots généés à pati de ce modèle impimeont ce commentaie. Vous pouvez cependant ajoute ou suppime des commentaies de appots d'échantillon spécifiques via la fonction Edit Comments (Modifie les commentaies). Pou modifie les commentaies d'un appot spécifique, pocédez comme suit. 1 Sélectionnez su la bae d'outils du généateu de appot pou ouvi l'écan Repots Selection (Sélection des appots). 2 Rechechez le appot désié à l'aide des citèes de echeche suivants : patient ID (ID de patient), last name (nom), sample ID1 (ID d'échantillon 1), ou analysis date (date de l'analyse). a. Saisissez les infomations pou les citèes de echeche. b. Sélectionnez Seach (Recheche). Remaque : pou effectue une echeche globale et localise tous les appots d échantillon dans la base de données, laissez tous les champs de citèes vides et sélectionnez Seach (Recheche). Le denie échantillon analysé appaaît en haut de la liste. 4-26

57 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4 3 Pou sélectionne un appot, mettez la ligne désiée en subillance. 4 Saisissez ou modifiez le commentaie (750 caactèes maximum). a. Sélectionnez Edit Comments (Modifie les commentaies) et saisissez ou modifiez le texte. b. Sélectionnez OK losque vous avez teminé. 5 Les commentaies appaaissent dans l écan Repots Selection (Sélection des appots). 4-27

58 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS Saisie et modification d'infomations dans la base de données L écan Database Infomation (Infomations dans la base de données) vous pemet de saisi ou de modifie les infomations suivantes : données démogaphiques du patient infomations su les échantillons infomations hématologiques Les infomations de la base de données s'impiment su le appot de panel. Pou modifie les infomations su un patient existant ou ajoute des infomations su l'échantillon, pocédez comme expliqué ci-dessous. N'oubliez pas que vous devez saisi/modifie ces infomations avant l'acquisition ou le epassage mode liste. La base de données elie l'infomation à Navios via Sample ID1 (ID d'échantillon 1). 1 Sélectionnez su la bae d'outils du généateu de appot pou ouvi l'écan Database Infomation (Infomation de la base de données). 2 Saisissez les infomations pou les citèes de echeche [Patient ID (ID du patient) ou Sample ID (ID de l'échantillon) pa exemple] et sélectionnez Seach (Recheche). ATTENTION : en ce qui concene Hematology Infomation (Infomations hématologiques), si Flow-Count n'a pas été utilisé pou une valeu absolue à plate-fome unique, les paamètes Lkc et Diff peuvent ête saisis avant d'enegiste ou de epasse le fichie des données mode liste via un panel non Flow-Count. Les valeus absolues seont alos déteminées comme une plate-fome double avec les infomations hématologiques saisies manuellement et impimées su le appot de panel en epassant les fichies mode liste dans un panel d'expot non Flow-Count. 4-28

59 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4 L'écan Patient & Specimen Seach (Recheche de patients et d'échantillons) s'affiche. 3 Mettez en subillance l'infomation que vous désiez modifie. a. Véifiez que l'infomation coecte appaaît. b. Sélectionnez ou. Remaque : vous pemet de modifie toutes les infomations à pat Sample ID (ID d'échantillon). vous pemet de saisi de nouvelles infomations su l'échantillon pou le patient et de modifie les infomations existantes, y compis Sample ID (ID d'échantillon) ; toutes les données démogaphiques sont consevées. 4 Modifiez les infomations en fonction des besoins. 5 Sélectionnez Save (Enegiste) pou enegiste les modifications. 6 Sélectionnez New (Nouveau) pou saisi les infomations pou un nouveau patient. 4-29

60 IDENTIFICATION ET ANALYSE DES LYMPHOCYTES IMPRESSION DES RAPPORTS DE PANEL À PARTIR DU GÉNÉRATEUR DE RAPPORTS NAVIOS 4-30

61 5CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : PLAGES DE RÉFÉRENCE LINÉARITÉ EXACTITUDE DE LA MÉTHODE PRÉCISION SPÉCIFICITÉ 5.2 PLAGES DE RÉFÉRENCE Une étude de détemination des valeus nomales a été éalisée afin de détemine les Plages de éféence pou le système Navios teta. Des échantillons de sang total ont été pélevés aupès de 89 donneus (hommes et femmes) dans tois sites géogaphiquement difféents. La sélection des donneus était compatible avec les diectives de la nome CLSI, C28-A3 Defining, Establishing, and Veifying Refeence Intevals in the Clinical Laboatoy (Défini, établi et véifie les intevalles de éféence dans le laboatoie clinique). Les échantillons ont été coloés avec des éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5. Les valeus déteminées su le cytomète Navios avec le logiciel Navios teta epésentent le total des cellules CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+ et CD3-CD56+ et sont données aux Tableaux 5.1 et 5.2. Les valeus absolues ont été déteminées avec la méthode Flow-Count (SPT). Les valeus sont expimées sous fome de poucentage (%) du nombe total de lymphocytes et sous fome de valeus absolues (cellules/µl). Ces valeus sont uniquement epésentatives. Chaque laboatoie doit établi ses popes intevalles de éféence à pati de la population locale de donneus nomaux. Tableau 5.1 Sang total nomal : CD45/CD4/CD8/CD3 Paamète Unités Moyenne Limite inféieue de l'intevalle de confiance à 95 % Limite supéieue de l'intevalle de confiance à 95 % %CD3+ % Lymphocytes + 75,24 60,01 91,24 CD3+ Valeu absolue (cellules/µl) %CD3+CD4+ % Lymphocytes + 48,82 28,04 70,63 CD3+CD4+ Valeu absolue (cellules/µl) %CD3+CD8+ % Lymphocytes + 25,77 4,83 44,07 CD3+CD8+ Valeu absolue (cellules/µl)

62 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES LINÉARITÉ Tableau 5.2 Sang total nomal : CD45/CD56/CD19/CD3 Paamète Unités Moyenne Limite inféieue de l'intevalle de confiance à 95 % Limite supéieue de l'intevalle de confiance à 95 % %CD3+ % Lymphocytes + 75,41 60,23 91,37 CD3+ Valeu absolue (cellules/µl) %CD19+ % Lymphocytes + 12,95 2,12 22,60 CD19+ Valeu absolue (cellules/µl) %CD3-CD56+ % Lymphocytes + 9,36 1,89 20,10 CD3-CD56+ Valeu absolue (cellules/µl) LINÉARITÉ Ces mesues dupliquées ont été effectuées pou chacune des 19 dilutions indépendantes (CD3+, CD3+CD4+ et CD3+CD8+) et des 20 dilutions indépendantes (CD3+, CD19+ and CD3-CD56+), epésentant une plage haute et une plage basse, d'un échantillon concenté de cellules CYTO-TROL. Les plages de concentation de lymphocytes CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+ et CD3-CD56+ ont été établies en coloant avec le éactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 ou CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5, en ajoutant des fluoosphèes Flow-Count et en analysant pa cytométie en flux avec le logiciel Navios teta. La détemination statistique de la linéaité a été obtenue confomément aux diectives de la nome CLSI EP06-A, Evaluation of the Lineaity of Quantitative Measuement Pocedues : A Statistical Appoach (Évaluation de la linéaité des pocédues de mesue quantitative : appoche statistique). Voi les Figues 5.1 à 5.6. Les valeus sont expimées en temes de valeus absolues (cellules/µl). Tableau 5.3 Plage de mesue de la linéaité Réactif Paamète Unités Plage de mesue CD45/CD4/CD8/CD3 CD45/CD56/CD19/CD3 Faible Haut CD3+ cellules/µl CD3+CD4+ cellules/µl CD3+CD8+ cellules/µl CD3+ cellules/µl CD19+ cellules/µl CD3-CD56+ cellules/µl

63 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES LINÉARITÉ 5 CD45/CD4/CD8/CD3 Figue 5.1 Linéaité : cellules CD3+ Figue 5.2 Linéaité : cellules CD3+CD4+ Figue 5.3 Linéaité : cellules CD3+CD8+ 5-3

64 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES LINÉARITÉ CD45/CD56/CD19/CD3 Figue 5.4 Linéaité : cellules CD3+ Figue 5.5 Linéaité : cellules CD19+ Figue 5.6 Linéaité : cellules CD3-CD

65 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES EXACTITUDE DE LA MÉTHODE EXACTITUDE DE LA MÉTHODE L'exactitude du logiciel Navios teta a été établie en compaant les ésultats avec la méthode du compaateu en utilisant l'estimation de la difféence comme décit dans CLSI EP09-A2 Method Compaison and Bias Estimation Using Patient Samples (Compaaison de la méthode et estimation de l'écat systématique à l'aide d'échantillons de patient). Dans la méthode du compaateu, les échantillons coloés avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CD45-FITC/CD56-RD1/ CD19-ECD/CD3-PC5 sont analysés su un cytomète en flux Cytomics FC 500. Les données des Tableaux 5.4 à 5.6 et dans les figues 5.7 à 5.12 confiment la pémisse que les systèmes pésentent des pefomances équivalentes pou l'énuméation des lymphocytes T, B et NK matues dans le sang péiphéique. Les valeus sont expimées en poucentage (%) de l'énuméation totale des lymphocytes et en valeu absolue (cellules/µl) pou la total des cellules CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+ et CD3-CD56+. Tableau 5.4 Spécifications de l'exactitude - sang total Paamète Unités Plage de mesue Difféence %CD3+ %CD3+CD4+ %CD3+CD8+ %CD19+ %CD3-CD56+ % Lymphocytes % ± 1,5 points du poucentage >40 % ± 2,5 points du poucentage CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD19+ CD3-CD56+ Valeu absolue (cellules/µl) ± 30 cellules/µl >300 ± 10 % 5-5

66 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES EXACTITUDE DE LA MÉTHODE Tableau 5.5 Exactitude de la méthode : poucentage positif (% lymphocytes +) Réactif Paamète Système n Globalement Moyenne Min. Max. CD45/CD4/CD8/CD3 CD45/CD56/CD19/CD3 %CD3+ %CD3+CD4+ %CD3+CD8+ %CD3+ %CD19+ %CD3-CD56+ FC ,51 45,66 96,42 Navios ,91 45,56 96,56 FC ,56 1,07 74,80 Navios ,30 2,19 76,78 FC ,34 9,11 89,11 Navios ,44 8,07 90,08 FC ,27 43,60 96,33 Navios ,09 44,16 96,70 FC ,05 0,00 39,70 Navios ,17 0,00 39,72 FC ,04 0,71 30,16 Navios 301 8,09 0,60 30,19 Tableau 5.6 Exactitude de la méthode : valeu absolue (cellules/µl) Réactif Paamète Système n Globalement Moyenne Min. Max. CD45/CD4/CD8/CD3 CD45/CD56/CD19/CD3 CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+ CD19+ CD3-CD56+ FC Navios FC Navios FC Navios FC Navios FC Navios FC Navios

67 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES EXACTITUDE DE LA MÉTHODE 5 CD45/CD4/CD8/CD3 Figue 5.7 Analyse de égession : cellules CD3+ Figue 5.8 Analyse de égession : cellules CD3+CD4+ Figue 5.9 Analyse de égession : cellules CD3+CD8+ 5-7

68 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES EXACTITUDE DE LA MÉTHODE CD45/CD56/CD19/CD3 Figue 5.10 Analyse de égession : cellules CD3+ Figue 5.11 Analyse de égession : cellules CD19+ Figue 5.12 Analyse de égession : cellules CD3-CD

69 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES PRÉCISION PRÉCISION Les valeus de poucentage positif et de valeus absolues ont été déteminées en utilisant des cellules IMMUNO-TROL et IMMUNO-TROL Low, analysées en double, deux pa jou pendant un minimum de 20 jous su 3 sites géogaphiques difféents en utilisant des éactifs anticops monoclonaux tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5. Les mesues (% positif et valeus absolues) pou les populations CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+ et CD3-CD56+ se situaient à l intéieu des plages de dosage telles qu elles sont annoncées dans les notices du contôle. L'analyse a été effectuée avec la méthode CLSI EP5-A2 : Evaluation of Pecision Pefomance of Quantitative Measuement Methods (Évaluation des pefomances de pécision des méthodes de mesue quantitative). Voi le Tableaux 5.7 à 5.9. Tableau 5.7 Spécification de épétabilité - sang entie, cellules IMMUNO-TROL et cellules IMMUNO-TROL Low Paamète Unités Plage de mesue Limite (% CV) %CD3+ %CD3+CD4+ %CD3+CD8+ %CD19+ %CD3-CD56+ % Lymphocytes % > 20 5 % CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD19+ CD3-CD56+ Valeu absolue (cellules/µl) < % % 5-9

70 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES PRÉCISION Tableau 5.8 Répétabilité : IMMUNO-TROL Réactif Paamète unités Moyenne CV (%) CD45/CD4/CD8/CD3 CD45/CD56/CD19/CD3 CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+ CD19+ CD3-CD56+ % Lymphocytes + 72,32 0,86 Valeu absolue 746 3,70 (cellules/µl) % Lymphocytes + 46,80 1,52 Valeu absolue 483 3,89 (cellules/µl) % Lymphocytes + 23,97 2,92 Valeu absolue 247 4,57 (cellules/µl) % Lymphocytes + 72,53 0,71 Valeu absolue 726 3,28 (cellules/µl) % Lymphocytes + 14,77 2,89 Valeu absolue 148 4,64 (cellules/µl) % Lymphocytes + 9,99 3,73 Valeu absolue 100 4,72 (cellules/µl) 5-10

71 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES PRÉCISION 5 Tableau 5.9 Répétabilité : IMMUNO-TROL Low Réactif Paamète unités Moyenne CV (%) CD45/CD4/CD8/CD3 CD45/CD56/CD19/CD3 CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+ CD19+ CD3-CD56+ % Lymphocytes + 57,82 1,63 Valeu absolue 344 3,36 (cellules/µl) % Lymphocytes + 22,35 3,05 Valeu absolue 133 4,43 (cellules/µl) % Lymphocytes + 32,66 2,55 Valeu absolue 194 3,79 (cellules/µl) % Lymphocytes + 58,06 1,23 Valeu absolue 342 3,03 (cellules/µl) % Lymphocytes + 19,91 2,75 Valeu absolue 117 3,80 (cellules/µl) % Lymphocytes + 17,08 4,80 Valeu absolue 100 5,25 (cellules/µl) 5-11

72 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES SPÉCIFICITÉ 5.6 SPÉCIFICITÉ Spécificité des éactifs L'antigène CD45 est expimé su tous les types de cellules hématopoïétiques à l'exception des éythocytes matues et de leus pogéniteus immédiats. 14,15 Il n'a pas été détecté dans les tissus non hématopoïétiques difféenciés. 14,15,16,17 L'antigène CD3 est nomalement pésent su la suface cellulaie des thymocytes matues et les lymphocytes T matues de sang péiphéique activé et eposé (populations d'inducteus et de suppesseus/cytotoxiques). 19,20,21 L'antigène CD4 est pésent su les thymocytes et la population de lymphocytes T inducteus dans le sang péiphéique. 20,21 Il est aussi expimé à faible densité su cetains monocytes. 24 L'antigène CD8 est nomalement pésent su envion 80 % des thymocytes et envion 30 à 35 % des lymphocytes T du sang péiphéique et cetaines cellules NK. 22,30 L'antigène CD19 est expimé su toutes les cellules B, y compis les cellules B pogénitices pécoces. 3 Il se touve aussi su les cellules denditiques folliculaies et les cellules pogénitices de lignage myélomonocytique mais n'est pas expimé su les cellules T, les monocytes et les ganulocytes. 1,18,32 L'antigène CD56 est expimé exclusivement su une sous-population de lymphocytes faisant peuve d'activité NK. 1,18,35 Vituellement, toutes ces cellules capables d'induie une cytotoxicité pa TCR dans le sang péiphéique expiment CD56. 35,36 Cette sous-population est composée de cellules NK (CD3-CD56+) et d'une petite sous-population de cellules T (CD3+CD56+). 1,18,37 CD56 n'est pas expimé su les autes populations de lymphocytes T ou B, monocytes, ganulocytes ou éythocytes. 37,38,39 La spécificité antigénique des anticops monoclonaux CD45, CD3, CD4 et CD8 compenant le éactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/ CD8-ECD/CD3-PC5 a été pécédemment établie pa le pemie (CD4, CD8 et CD3) et le cinquième (CD45) Colloque intenational su le typage leucocytaie. 1,2 La spécificité antigénique des anticops monoclonaux CD45, CD3, CD19 et CD56 compenant le éactif anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/ CD19-ECD/CD3-PC5 a été pécédemment établie pa le pemie (CD3), le quatième (CD19 et CD56) et le cinquième (CD45) Colloque intenational su le typage leucocytaie. 1,2,

73 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES SPÉCIFICITÉ 5 Contôle de qualité Assuez-vous que le cytomète en flux est coectement aligné selon les ecommandations du fabicant décites dans les manuels de l instument. Les plages de valeus cibles sont données pou chaque lot de Flow-Set Po afin d'optimise les paamètes de diffaction de la lumièe et de fluoescence de l'instument los de l'analyse d'échantillons coloés avec les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45/CD4/CD8/CD3 et CYTO-STAT tetachrome CD45/CD56/CD19/CD3 et pépaés avec les éactifs ImmunoPep su la station de tavail Beckman Coulte adéquate. Ces plages de valeus cibles sont données dans le Tableau des fluoosphèes des paamètes de l'application et doivent ête utilisées los de l'analyse des fluoosphèes Flow-Set Po. Dans cette analyse, les paamètes de diffusion de la lumièe et de fluoescence de l instument sont automatiquement ajustés pou place la population pic de fluoosphèes Flow-Set Po dans les plages de valeus cibles établies. Les fluoochomes isothiocyanate de fluoescéine (FITC), phycoéythine (RD1), phycoéythine-texas Red-X (ECD) et phycoéythine-cy5 (PC5) émettent à difféentes longueus d'onde mais pésentent un cetain chevauchement spectal qui doit ête coigé pa compensation électonique. Les niveaux de compensation optimale sont établis en analysant le signal d'un fluoochome spécifique dans chaque détecteu de fluoescence en utilisant, su un histogamme monopaamétique, des cellules CYTO-COMP coloées avec l'anticops monoclonal-fluoochome appopié du kit QuickCOMP 4. Dans cette analyse, des ajustements sont faits pou gaanti que le chevauchement spectal est véitablement compensé pa invesion de la matice. La pocédue AutoSetup II calcule automatiquement les coefficients de compensation equis pou élimine le chevauchement spectal ente ces quate fluoochomes. Les monocytes et ganulocytes d un échantillon peuvent ête exclus pa un gating appopié su les lymphocytes su le cytomète en flux. 52 Pou gaanti la spécificité de la méthode, le logiciel du système Navios teta est conçu pou identifie et optimise automatiquement le contou d intéêt des lymphocytes en fonction des caactéistiques de diffusion othogonale CD45 positive claie (pa appot à la diffusion othogonale) et axiale. Pou gaanti encoe plus la spécificité de la méthode, le logiciel Navios teta contôle la liaison d anticops non spécifiques à des lymphocytes en plaçant automatiquement les cuseus en fonction de la sépaation des pics positifs et négatifs. Ceci évite d avoi ecous à un contôle isotypique. Avant l'analyse des échantillons, un contôle dosé (cellules IMMUNO-TROL et/ou cellules IMMUNO-TROL Low) doit ête coloé afin de véifie la éactivité des anticops. 5-13

74 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES SPÉCIFICITÉ 5-14

75 6LIMITATIONS/AVERTISSEMENTS VUE D ENSEMBLE Ce chapite contient les sections suivantes : LIMITATIONS DES RÉACTIFS LIMITATIONS DU SYSTÈME DÉCLARATION DES AVERTISSEMENTS 6.2 LIMITATIONS DES RÉACTIFS Consevez les échantillons dans les tubes de pélèvement à tempéatue ambiante ente 18 C et 25 C (64 F et 77 F) avant coloation et analyse. Ne pas éfigée les échantillons. Réfigée les échantillons peut conduie à des ésultats abeants. En analysant les cellules coloées apidement, vous éduisez les isques d obteni des ésultats impafaits. La viabilité cellulaie ecommandée pou les échantillons de sang veineux est 90 %, mais ce chiffe peut ête difficile à atteinde avec cetains échantillons anomaux. Les éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome sont conçus pou une utilisation avec des pépaations de sang total. Ils peuvent également ête utilisés avec les cellules IMMUNO-TROL ou IMMUNO-TROL Low. L utilisation des éactifs n est pas ecommandée avec des pépaations de cellules mononucléaies faîches ou congelées. Ne pas dilue, aliquote ou congele les éactifs. Utilise uniquement tels quels. Les éactifs sont destinés à ête utilisés uniquement pou la cytométie en flux. L'utilisation de ces éactifs anticops monoclonaux pou l'évaluation de cetains patients taités pa OKT3 peut ête inadéquate. 34,53,54 Si vous utilisez tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5, les échantillons peuvent ête pépaés dans les 72 heues apès le pélèvement. S'ils sont pépaés dans les 72 heues apès le pélèvement, les échantillons sont stables pendant 48 heues de plus s'ils sont pépaés avec le système de éactifs COULTER IMMUNO-PREP et éfigéés ente 2 C et 8 C (36 F et 46 F). Si vous utilisez tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5, les échantillons peuvent ête pépaés dans les 48 heues apès le pélèvement. S'ils sont pépaés dans les 48 heues apès le pélèvement, les échantillons sont stables pendant 48 heues de plus s'ils sont pépaés avec le système de éactifs IMMUNO-PREP et éfigéés ente 2 C et 8 C (36 F et 46 F). 6-1

76 LIMITATIONS/AVERTISSEMENTS LIMITATIONS DU SYSTÈME 6.3 LIMITATIONS DU SYSTÈME L algoithme isque de ne pas fonctionne su des échantillons ayant des caactéistiques inattendues. Tous les gaphiques doivent ête passés en evue avant la poduction d un appot su les ésultats pou s assue que l analyse a été éalisée coectement. Les ésultats obtenus peuvent ête eonés si les données mode liste ne poviennent pas d'un cytomète en flux Navios. Une exposition polongée des cellules à des éactifs lytiques peut povoque la destuction des globules blancs et une pete de cellules dans la population d'intéêt. Tous les globules ouges peuvent ne pas ête lysés dans les conditions suivantes : pésence de globules ouges nucléés, concentation potéinique anomale ou hémoglobinopathies. Ceci isque d entaîne des ésultats eonément diminués en aison des globules ouges non lysés comptés comme leucocytes. Des états de santé anomaux ne sont pas toujous epésentés pa des poucentages anomaux de cetaines populations de leucocytes. Un individu dans un état de santé anomal peut pésente les mêmes poucentages de leucocytes qu une pesonne en bonne santé. Utilisez les ésultats du test conjointement avec des données de diagnostic clinique et aute. Cetains patients peuvent pésente des poblèmes spéciaux en aison d un nombe tès faible ou altéé de cetaines populations cellulaies. Les ésultats obtenus pa la cytométie en flux peuvent s avée eonés si le lase est mal aligné ou les gates mal configuées. À cause d'une vaiance inacceptable ente les méthodes des difféents laboatoies de détemination de la valeu absolue des lymphocytes, il est nécessaie d'évalue la pécision de la méthode utilisée DÉCLARATION DES AVERTISSEMENTS Repotez-vous aux notices des éactifs anticops monoclonaux CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 et CYTO-STAT tetachrome CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 et des éactifs de contôle de qualité. En cas d utilisation de fluoosphèes Flow-Count, epotez-vous à la notice du éactif pou obteni des infomations complètes, dont la desciption du éactif et des instuctions su la façon de taite les échantillons de sang total pou la détemination de la valeu absolue. Manipulez tous les échantillons et les matéiaux qui entent en contact avec ces denies comme s ils étaient susceptibles de tansmette des maladies infectieuses, et mettez-les au ebut en penant les pécautions appopiées. Ne pipetez jamais avec la bouche et évitez toujous le contact avec la peau ou les muqueuses. Mettez les échantillons à l abi de la lumièe au cous de l incubation et du stockage. N utilisez pas les éactifs apès la date d expiation impimée su le flacon et l étiquette du kit. Respectez les bonnes patiques de laboatoie los de la manipulation de ces éactifs. Passez tous les histogammes en evue avant de pésente les ésultats. 6-2

77 7RÉFÉRENCES 7 1. Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Halan JM, Kishmoto T, Moimoto C, Ritz J, Shaw S, Silvestein R, Spinge R, Tedde TF, and Todd RF, eds Leukocyte Typing V. Oxfod Univesity Pess, Oxfod, UK. Volume 1 pp. 262, 263, 268, 270, , Volume 2 pp Benad A, Boumsell L, Dausset J, Milstein C, Schlossman SF, eds: Leukocyte Typing. Spinge-Velag, New Yok, NY, pp. 28, 41-42, 44, McMichael AJ, Beveley PCL, Cobbold S, Cumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, Hogg N, Hoton M, Ling N, MacLennan ICM, Mason DY, Milstein C, Speigelhalte D and Waldman H, eds Leukocyte Typing III. Oxfod Univesity Pess, Oxfod, UK. pp. 38, 40, 42, 43, 116, 167, , 176, 199, 202, 206, , 315, 475, Robetson MJ, Cochan KJ, Cameon C, Le J-M, Tantavahi R, and Ritz J Chaacteization of a cell line, NKL, deived fom an aggessive human natual kille cell leukemia. Expeimental Hematology 24: Aiuta F, Ceottini J-C, Coombs RRA, Coope M, Dickle HB, Foland S, Fudenbeg HH, Geaves MF, Gey HM, Kunkel HG, Natvig J, Peud homme J-L, Rabellino E, Ritts RE, Rowe DS, Seligmann M, Siegal FP, Stjenswad J, Tey WD and Wyban J. Identification, enumeation and isolation of B and T lymphocytes fom human peipheal blood. Intenational Union of Immunological Societies (IUIS), Repot - July Clin Immunol and Immunopathol, 1975; 3: Foon KA and Todd RF. Immunologic classification of leukemia and lymphoma. Blood, 1986; 68: Hecend T, Meue SC, Reinhez EL, Schlossman SF and Ritz J Geneation of a cloned NK cell line deived fom the null cell faction of human peipheal blood. J Immunol 129: Mishell B, Shiigi S eds Selected Methods in Cellula Immunology. New Yok: WH Feeman and Co., pp Dexle HG, Gignac SM and Minowada J. Routine Immunophenotyping of acute leukemias. Blut, 1988; 57: Robetson MJ, and Ritz J Biology and clinical elevance of human natual kille cells. Blood 76: Reinhez EL, Haynes BF, Nadle LM and Benstein ID Leukocyte Typing II. New Yok: Spinge-Velag, Volume 2:8, 15-25, Newman W, Tagan SR, and Fast LD. Immunobiological and immunochemical aspects of the T-200 family of glycopoteins. Mol Imm, 1984; 21: Fabe JW and Williams AF. Quantitative seological analysis of a abbit anti-at lymphocyte seum and peliminay biochemical chaacteisation of the majo antigen ecognised. Tansplantation, 1977; 23: Coffman RL and Weissman IL. A B cell-specific membe of the T200 glycopotein family. Natue, 1981, B220; 289: Dalchau R and Fabe JW. Identification with a monoclonal antibody of a pedominantly B lymphocyte-specific deteminant of the human leukocyte common antigen. J Exp Med, 1980; 153:

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79 RÉFÉRENCES Nadle LM, Andeson KC, Mati G, Bates M, Pak E, Daley JF, Schlossman SF B4, a human B lymphocyte associated antigen expessed on nomal, mitogen activated and malignant B lymphocytes. J Immunol 131: Tedde TF and Isaacs CM Isolation of a cdnas encoding the CD19 antigen of human and mouse B lymphocytes: a new membe of the immunoglobulin supefamily. J Immunol 143: Tedde TF, Inaoki M and Sato S The CD10-CD21 complex egulates signal tansduction thesholds govening humoal immunity and autoimmunity. Immunity 6: Knapp W, Doken B, Gilks WR, Riebe EP, Schmidt RE, Stein H, and K. von dem Bone AEG, eds Leukocyte Typing IV, White Cell Diffeentiation Antigens. Oxfod Univesity Pess, Oxfod, UK. pp. 22, 36-38, 295, 296, 536, 541, Giffin JD, Hecend T, Beveidge R and Schlossman SF Chaacteization of an antigen expessed by human natual kille cells. J Immunol 130: Hecend T, Giffin JD, Bensussan A, Schmidt RE, Edson MA, Bennan A, Muay C, Daley JF, Schlossman SF and Ritz J Geneation of monoclonal antibodies to a human natual kille clone. Chaacteization of two natual kille-associated antigens, NKH1A and NKH2, expessed on subsets of lage ganula lymphocytes. J Clin Invest 75: Schmidt RE, Muay C, Daley JF, Schlossman SF and Ritz J A subset of natual kille cells in peipheal blood displays a matue T cell phenotype. J Exp Med 164: Schmidt RE, Michon JM, Woonicz J, Schlossman SF, Reinhetz EL, and Ritz J Enhancement of natual kille function though activation of the T11 E-osette ecepto. J Clin Invest 79: Caligiui M, Muay C, Buchwald D, Levine H, Cheney P, Peteson D, Komaoff AL and Ritz J Phenotypic and functional deficiency of natual kille cells in patients with chonic fatigue syndome. J Immunol 139: Benjamini E and Leskowitz S. Immunology: A Shot Couse. Second edition. New Yok: Wiley-Liss, 1991; Reinhez EL, O Bien C, Rosenthal P and Schlossman SF. The cellula basis fo vial-induced immunodeficiency: Analysis by monoclonal antibodies. J Immunol, 1980; 125: Felsenstein D, Caney WP, Iacoviello VR and Hisch MS. Phenotypic popeties of atypical lymphocytes in cytomegalovius-induced mononucleosis. J Infect Dis, 1985; 152: Rinaldo CR, Ho M, Hamoudi WH, Gui X and DeBiasio RL. Lymphocyte subsets and natual kille cell esponses duing cytomegalovius mononucleosis. Infect Immun, 1983; 40: Goldstein G, Lifte J and Mittle R. Immunoegulatoy changes in human disease detected by monoclonal antibodies to T lymphocytes. In: Monoclonal Antibodies in Clinical Medicine. McMichael AJ and Fabe JW, eds. New Yok, NY: Academic Pess, 1982;

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81 ADÉPANNAGE A A.1 VUE D ENSEMBLE Cette annexe contient les sections suivantes : MESSAGES D'ERREUR NAVIOS teta MESSAGES D'ERREUR DU LOGICIEL NAVIOS A.2 MESSAGES D'ERREUR NAVIOS teta Si l'analyse ne peut pas poduie un ésultat communicable, un message d'eeu appaaît dans la boîte de dialogue Analysis Results (Résultats de l analyse) (Figue A.1). Les eeus sont également impimées su la FlowPAGE dans le champ d état Potocol (Potocole) dans l en-tête. Le Tableau A.1 donne la liste des messages d'eeu Navios teta, leu cause, les éponses logicielles et les solutions possibles qui doivent ête utilisées pou les échantillons de patient. Si des messages d'eeu appaaissent su des échantillons de contôle, analysez à nouveau le contôle. Si un message d'eeu appaaît à nouveau, pépaez de nouveaux échantillons de contôle et analysez-les. Si un message d'eeu appaaît à nouveau, appelez vote epésentant Beckman Coulte local. Figue A.1 Où appaaissent les messages d'eeu A-1