Petrifilm pour la numérisation des Enterobacteriaceae
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- Aurélie Gaumond
- il y a 9 ans
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1 Interprétation Guide Petrifilm pour la numérisation des Enterobacteriaceae Nombre d'enterobacteriaceae = 1 Le dénombrement sur le Petrifilm Enterobacteriaceae se fait très aisément. Un indicateur colore en rouge toutes les colonies présentes sur le Petrifilm, et le film supérieur piège le gaz produit par les colonies. Les bactéries produisant de l'acide sont entourées d'un halo jaune provoqué par le virage de l'indicateur ph inclus dans le milieu. Les Enterobacteriaceae produisent du gaz et de l'acide. Sur le Petrifilm, les Enterobacteriaceae peuvent avoir les caractéristiques suivantes : la colonie peut être seulement associée à des bulles de gaz (cercle 1), la colonie peut être seulement associée à un halo jaune (cercle 2), la colonie peut aussi être à la fois associée à des bulles de gaz et un halo jaune (cercle ). Les cercles 1 et montrent les formes variées que les bulles de gaz peuvent avoir. Parfois le gaz rompt la colonie de sorte que celle-ci finisse par entourer la bulle de gaz comme dans le cercle. Nombre d'enterobacteriaceae = 9 La photo montre quelques Enterobacteriaceae au milieu de nombreuses colonies de bactéries Gram négatif non- Enterobacteriaceae.
2 M Petrifilm pour la rémunération des Enterobacteriaceae 4 Nombre d'enterobacteriaceae = 0 Noter le changement de couleur du gel des photos à 8. Quand le nombre d'enterobacteriaceae augmente le gel passe du violet au jaune ou au blanc crème. Nombre d'enterobacteriaceae = 5 Nombre d'enterobacteriaceae = 77 La plage de dénombrement recommandée se situe entre 15 et 100 colonies. Lorsque le nombre de colonies par Petrifilm est supérieur à 100, le nombre d'enterobacteriaceae dans l'échantillon peut être estimé comme étant supérieur à 100 fois la dilution. 5 Nombre d'enterobacteriaceae = incomptable Les Petrifilm Enterobacteriaceae contenant plus de 100 colonies sont incomptables, leur gel est de couleur pâle avec une ou deux des caractéristiques suivantes : 1) beaucoup de petites colonies - 2) beaucoup de bulles de gaz. 6
3 7 8 Petrifilm incomptable Sur la photo 7 le nombre de colonies est si élevé que la production d'acide et de gaz est difficilement discernable. La couleur pâle du gel indique un résultat incomptable. Petrifilm incomptable Le Petrifilm Enterobacteriaceae de la photo 8 présente 2 caractéristiques d'un Petrifilm incomptable, un éclaircissement du gel et de nombreuses petites colonies indiquant un Petrifilm incomptable. Nombre d'enterobacteriaceae = 44 Certaines bulles formées lors de l'inoculation du Petrifilm ne sont que des artéfacts. Elles ont une forme irrégulière et ne sont pas associées à une colonie rouge. Voir photo Nombre d'enterobacteriaceae = 2 Les particules alimentaires ont souvent une forme irrégulière ou filamenteuse et ne sont pas associées à un halo jaune ou à des bulles de gaz. Voir photo 10.
4 Nombre d'enterobacteriaceae = 29 Les particules alimentaires peuvent également prendre l'aspect de points noirs mais ne sont associées ni à des bulles de gaz ni à des zones d'acidification, comme sur la photo
5 Petrifilm pour la numérisation des Enterobacteriaceae Fiche d utilisation Stockage Petrifilm Petrifilm Petrifilm 1 Mettre au réfrigérateur ( 8 C) les poches fermées. Utiliser les Petrifilm avant la date d'expiration indiquée sur la poche. 2 Pour refermer les poches, replier l'extrêmité et fermer à l'aide d'un ruban adhésif ou d'une pince. Garder les poches entamées à une température 25 C, 50 % RH. Ne pas les placer au réfrigérateur. Utiliser les Petrifilm dans le mois qui suit l'ouverture de la poche. Préparation 4 Préparer la suspension de l'échantillon. Peser ou pipetter le produit dans un container stérile (sac stomacher, bouteille stérile...). Ensemencement 5 Ajouter la quantité nécessaire de l'un des diluants suivants : peptone-sel, tampon phosphate, eau peptonée 0,1 %, tampon phosphate/sel, tampon Butterfield's. Pour les produits acides ajuster le ph de l'échantillon dilué à 6,6-7,2 avec une solution de Na OH-1 N. 6 Broyer ou homogénéiser l'échantillon en utilisant la procédure habituelle. 7 Placer le Petrifilm sur une surface plane. Soulever le film supérieur. 8 Avec une pipette tenue perpendiculairement au Petrifilm, déposer 1 ml de l'échantillon, ou de l'échantillon dilué au centre du film inférieur. 9 Faire délicatement rouler le film supérieur afin d'éviter l'introduction de bulles d'air. Ne pas laisser tomber brusquement le film supérieur.
6 Placer le diffuseur, face lisse vers le bas, au centre du film supérieur, 10 au niveau de l'inoculum. Etaler l'échantillon en exerçant une 11 légère pression sur le diffuseur. Ne pas tourner ou faire glisser le diffuseur! Retirer le diffuseur. Attendre 1 minute pour permettre au gel 12 de se solidifier. Incubation Interpretation <70 F 1 Incuber le Petrifilm à l'horizontale le film supérieur vers le haut, sans empiler plus de 20 unités. L'incubation s'effectue à 5 C ±1 C ou 7 C ± 1 C pendant 24 ± 2 heures. Lire le Petrifilm à l'œil nu ou grâce 14 à un système permettant une amplification visuelle. Se référer au guide d'interprétation pour la lecture des résultats. Pour isoler les colonies soulever le film supérieur et prélever la 15 colonie du gel. Informations complémentaires Remarque : Ne pas oublier d'inoculer et d'étaler l'échantillon sur le Petrifilm avant de passer au Petrifilm suivant. Département Microbiologie Laboratoires M Santé Boulevard de l Oise F Cergy Pontoise Cedex Tél For Europe, please contact : Laboratoires M Santé Tél. : () Fax : ()
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