VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

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1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse I-MET-LFSAL-115 Détermination de la teneur en phosphates dans les sodas par HPLC-CI. Techniek Technique HPLC-CI Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Sodas Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaptation 21 octobre 2013 Résumé des critères de performances Groupe de matrice Sodas Gamme de quantification 100 mg/l 1000 mg/l PO 4 Modèle mathématique quadratique Critère sur l'étalonnage ± 10 % Critère sur l'identification par temps de rétention Technique analytique ± 1 min HPLC -CI Critère sur le rendement entre 80% et 110 % CVr MAX (= 2/3 CVHOR) 4,8% Répétabilité CV r 0,73% 10,7 mg/l Domaine de validation Etalonnage Sélectivité, Spécificité Répétabilité CVr MAX (=CVHOR) 6,3% Reproductibilité Incertitude de mesure basée sur la fidélité intermédiaire et le biais CVR r 1,3% 19,1 mg/l Reproductibilité intralaboratoire 13,2% Incertitude de mesure LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

2 La validation répond aux exigences de la procédure LAB 00 P180 Le laboratoire qui veut appliquer cette méthode doit démontrer que les critères cidessous soient remplis : a) Répétabilité et reproductibilité intra-laboratoire : les coefficients de répétabilité et de reproductibilité devront être inférieurs ou égaux aux coefficients présentés dans le dossier de validation. b) Justesse : Dans la mesure du possible, participation à des tests inter-laboratoires (ou comparaison avec un laboratoire accrédité) et obtention de résultats corrects. A défaut, les rendements sur des échantillons supplémentés seront utilisés pour évaluer le rendement apparent (les résultats devront être compris entre 70% et 120 %). Historique de validation: Edition Révision par/date Motif de la révision Modifications 1 Etienne-Thewissen Adaptation au nouveau template Adaptation au nouveau template Fabian 08/10/2013 du dossier de validation. 2 Etienne-Thewissen Fabian 21/10/2013 Adaptation en fonction des remarques pour publication Approbation par P. Genot LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse I-MET-LFSAL-115 Détermination de la teneur en phosphates dans les sodas par HPLC-CI. Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) HPLC-CI Sodas Totale Fabian Etienne-Thewissen, responsable de section phyto-résidus Handtekeningen - Signatures: Opgesteld door Rédaction par Fabian Etienne-Thewissen Sé Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Fabian Etienne-Thewissen : Responsable de section Phyto/Résidus Isabelle Monisse : expert technique Start - Début: 2009 Einde Fin: 2010 Handtekeningen - Signatures: Patrick Genot Manager du LFSAL Sé LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

4 Résumé des données de validation Table des matières. 1. Généralités sur les phosphates 2. Critères de validation Domaine de validation Modèle de régression Sélectivité Spécificité Répétabilité et reproductibilité intra-laboratoire Rendement apparent Justesse Robustesse LOD LOQ Incertitude de mesure 3. Résultats Domaine de validation Modèle de régression Sélectivité Spécificité Répétabilité et reproductibilité intra-laboratoire Rendement apparent Robustesse LOD LOQ Incertitude de mesure Annexe 1 : Flowchart de la méthode LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

5 1. Généralités Les phosphates exprimés en acide phosphorique sont des additifs alimentaires représentés par le symbole E338 sur l étiquette. Il peut être présent dans les sodas mais avec une teneur maximale autorisée de 700 mg/l exprimée en pentoxyde de phosphore (P 2 O 5 ). Même si il ne présente pas un risque majeur pour la santé, certaines études suspectent qu une consommation quotidienne de sodas contenant de l acide phosphorique à concentration élevée, pourrait attaquer l émail des dents, voire entrainer une décalcification des os. Calendrier des essais : Date Analyste blanc méthode matrice dopé New Cal. Nbre level Contrôles 28/05/2009 I.MONISSE OUI Soda* Non OUI 6 1ère ligne 29/05/2009 I.MONISSE OUI Soda* Non OUI 6 1ère ligne 17/06/2009 I.MONISSE OUI Soda* Non OUI 6 1ère ligne 05/01/2010 I.MONISSE OUI Soda* Oui OUI 6 1ère ligne *Matrice contenant naturellement des phosphates. 2. Critères de validation Domaine de validation Le domaine de validation de la méthode sera caractérisé par la gamme de concentration où la méthode aura été validée et les matrices analysées. Modèle de régression La courbe d étalonnage sera construite sur un minimum de 5 points et le modèle de régression appliqué entre la concentration extrapolée et la concentration théorique devra conduire à une déviation inférieure à 10%. Sélectivité LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

6 Une méthode d analyse est sélective si elle est capable de discerner le composant à déterminer des autres composants interférents ou de la matrice. L analyse HPLC devra permettre de séparer les phosphates des autres constituants de la matrice. Spécificité Une méthode d analyse est spécifique si elle ne mesure que la caractéristique (par ex. composant) que l on souhaite mesurer. La spécificité de l analyse sera assurée par l absence d un pic supérieur à 0,5 x le level 1 au temps de rétention des phosphates ( +/- 1minute par rapport au contrôle) lors de l injection d un blanc matrice. Répétabilité et Fidélité intermédiaire La répétabilité et la fidélité intermédiaire seront calculées à partir de minimum 3 séries de 3 essais. Pour être dans les conditions de reproductibilité intra-laboratoire, il faut faire varier au moins un paramètre (analyste, jour, appareil,...) d'une série à l'autre. Les %RSDr et %RSD RW calculés devront être inférieurs ou égaux aux valeurs maximales admissibles découlant de l'équation d'horwitz : %RSD r < CV Hor x 2/3 %RSD Rw < CV Hor En présence de normes, la répétabilité et la reproductibilité devront être inférieures ou égales aux valeurs mentionnées. Rendement apparent Le rendement apparent sera estimé au départ d échantillons supplémentés en phosphate et devra être compris entre 70% et 110% Justesse Dans la mesure du possible, le laboratoire participera à des études inter-laboratoires et la justesse sera estimée sur base du Z-score : -2 < Z-score <2 Robustesse LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

7 Les facteurs principaux risquant d influencer le résultat doivent être envisagés au cours de la validation de la méthode (Ex : opérateur, jours, colonne, insert, entretien du système, etc ). La robustesse est évaluée par le respect des critères de qualité de la méthode. LOD La plus faible quantité mesurée d un composant qui peut être détectée dans l échantillon d analyse, avec une certaine probabilité statistique, à l aide de la méthode d analyse. Il s agit d un critère qualitatif qui résulte en un rapport signal/bruit de 3. Si il existe une norme et que le rapport S/N à la norme est supérieur à 20, la LOD ne sera pas calculée. LOQ La plus faible concentration mesurée d un composant qui peut être quantifiée dans l échantillon d analyse, avec une certaine fidélité et justesse, à l aide de la méthode d analyse. Il s agit d un critère quantitatif qui résulte en un rapport signal/bruit de 6. Si il existe une norme et que le rapport S/N à la norme est supérieur à 20, la LOQ ne sera pas calculée. Incertitude de mesure L incertitude de mesure sera calculée conformément à la procédure centralisée LAB00 P Résultats des données de validation : L ensemble des résultats présentés dans le dossier sont exprimés en PO 4 MM PO 4 : 94,97 MM P 2 O 5 : 141,94 Domaine de validation : La méthode est validée pour déterminer la teneur en phosphates (exprimée en P 2 O 5 ) aux environs de la norme de 700 mg/l. Modèle de régression La droite d étalonnage construite sur un minimum de 5 points couvre une gamme de concentration comprise entre 100 mg/l et 1000 mg/l. Le modèle de régression quadratique entre le signal mesuré et la concentration théorique conduit à une déviation inférieure à 10% entre la concentration théorique et la concentration mesurée. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

8 Surface 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 PO4 : modèle quadratique y = 0, x 2 + 0, x - 0, R² = 0, ,00 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 120,00 mg/l PHOSPHATES - Droite de calibration du 28/05/2013 Valeur théorique (mg/l) Valeur mesurée (mg/l) % de déviation Level ,10-1,04 Level ,87 0,52 Level ,91 0,17 Level ,19-0,26 Level ,92 0,08 Sélectivité La sélectivité de la méthode est assurée par la séparation chromatographique sur une colonne Metro A Supp 150 mm x 4 mm. Spécificité Aucun pic supérieur à 0,5 x le Level 1 n est observé au temps de rétention du phosphate (+/- 1 minute) lors de l injection de la solution d extraction. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

9 Level 1 Blanc Chromatogrammes d une solution à 10 mg/l et d un Blanc Répétabilité et fidélité intermédiaire Les essais ont été réalisés sur un cola, matrice qui contient naturellement des phosphates. 6 essais à 500 mg/l par série, 3 séries. JOUR 1 (mg/l PO 4 ) JOUR 2 (mg/l PO 4 ) JOUR 3 (mg/l PO 4 ) E E E E E E LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

10 Répétabilité : Concentration Reproductibilité : n x p 2,8 x Sj CV r (%) (mg/l) 2,8 x Sj (mg/l) (mg/l) CV r Max (%) CV R (%) 2/3 CV Hor CV R Max (%) CV Hor 521,6 3 x 6 10,7 19,1 0,73 4,2 1,3 6,3 Rendement apparent Le rendement apparent est évalué sur les échantillons de limonade supplémentés en phosphate à 3 niveaux. Série du 04/01/2010 Niveau dopage 333 mg/l (%) Niveau dopage 500 mg/l (%) Niveau dopage 750 mg/l (%) Essai Le rendement apparent de chaque série respecte le critère 70%-110%. Robustesse Les paramètres suivants ont varié lors des essais de validation : jour, opérateurs, colonne HPLC, lots de solvants. La robustesse de la méthode est également évaluée au cours du temps au départ de la carte de contrôle. L ensemble des critères qualité de la méthode ont été systématiquement respectés. Limites de détection et de quantification : Le rapport S/N d un échantillon dont la teneur en phosphates est proche de la norme est > à 50. Par conséquent, les limites de détection et de quantification n ont pas été calculées. Incertitude de mesure L incertitude de mesure de 13,2% est calculée selon la procédure P508 au départ de la carte de contrôle sur 35 résultats. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11

11 ANNEXE 1 Flow chart : «Détermination de la teneur en phosphates dans les sodas par HPLC-CI Prélever environ 100 ml. Dégazer environ 10 au bain à US. Prélever précisément 10 ml. Amener à 100 ml avec de l eau déminéralisée SI ECHANTILLON DOPE : Ajouter précisément 5 ml de NaNH4HPO4.4H2O au 10 ml d échantillon. Amener à 200 ml avec de l eau déminéralisée si c est un cola. Amener à 100 ml avec de l eau déminéralisée si c est une limonade. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11