A- Formation de la liaison peptidique

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1 A- Formation de la liaison peptidique Un peptide : combinaison de 2 ou plusieurs AA par des liaisons amides particulières = liaisons peptidiques Liaison peptidique Nt O Ct Chaîne peptidique :( réaction positive au Biuret)

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3 Chaîne polypeptidique. H H H H H H H H 2 N C C N C C N C C N C COOH R 1 O R 2 O R 3 O R 4 La chaîne polypeptidique apparaît comme une succession de motifs «liaison peptidique» appelée squelette polypeptidique, sur laquelle sont greffées les chaînes latérales des acides aminés. H Motif de la liaison peptidique: C N O

4 B- Structure de la chaîne peptidique Configuration Trans de 2 résidus successifs Le placement des Radicaux d AA sur les Cα n est possible que dans la configuration trans.

5 Rotation de 2 liaisons peptidiques successives autour d un même atome de Cα

6 Si les angles sont égaux, la chaîne peptidique prend une forme organisée (Structure ordonnée), sinon la structure est désordonnée (pelote statistique)

7 Les peptides sont des polymères chargés

8 Méthodes d analyse de la séquence peptidique A- Composition globale en AA: Elle peut être déterminée après HAT: -coupe les l. peptidiques -détruit le Trp ( HCl 5.6N à 100 pd 24 à 72h) -transforme Asn en Asp -et Glnen Glu B- Détermination du résidu N-terminal *Les réactifs chimiques: -Le 2,4-dinitrofluorobenzène (DNFB) (DNP AA). -Le chlorure de dansyl (DNS-Cl) DNS AA -Le phénylisothiocyanate (PITC) PTH AA. Cette réaction est cyclique.

9 ( Réaction d Edman ) Phénylisotiocyanate (PITC) AA Nterminal l'acide trifluoroacétique Phénylthiocarbamyl (PTC) de peptide

10 anilinothiazolinone Solution acide Chaine polypeptidique racourcie de (n-1) AA Le reste de la chaîne polypeptidique subit de nouveau l'ensemble du traitement et les acides aminés sont ainsi séquencés tour à tour à partir de l'extrémité N-terminale phénylthiohydantoïne acide aminé (PTH - acide aminé). Le PTH - acide aminé est séparé, quantifié et identifié par chromatographie en phase reverse

11 * Méthode enzymatique utilisant les aminopeptidases A et N qui sont spécifiques des AA N-terminaux. C- Détermination du résidu C-terminal -Méthode chimique: - par l hydrazine anhydre à chaud : R 1 R 2 NH2-NH2 R 1 NH 2 -CH-C-NH-CH-COOH NH 2 -CH-C-NH-NH 2 + O O NH2-CH-COOH R 2 AA Ct - Réduction par le Borohydrure de Lithium : ----Rn-CH-NH 2 COOH LiBH4 -- Rn-CH-CH 2 -OH + H2O NH2

12 -Méthode enzymatique: Les Carboxypeptidase A ou B sont des exopeptidases qui libèrent l AA en Ct. D-Hydrolyse partielle des chaînes - Digestion enzymatique: Endopeptidases spécifiques: - Trypsine Arg et Lys - Chymoptrypsine les AA aromatiques: Phe, Tyr, Trp. - Clostripaïne Arg - Protéase de staphylocoque Glu - Thermolysine Leu, Ile, Tyr - Méthode chimique: - Le BrCN qui coupe après la Met et la transforme en homosérine.

13 Synthèse chimique des peptides (Merrifield) 1 ère condensation Copolymère styrène divinyl-benzène Lavage + déprotection Lavage et couplage avec le 2 e AA Déprotection Fixation du 3 e AA Déprotection Tripeptide libéré par hydrolyse

14 A- les Hormones Peptidiques 1- Hormones Hypophysaires: La vasopressine : action antidiurétique. COOH Cys Tyr Phe Glu Asp Cys Pro Arg Gly NH2 Vasopressine: 9AA 2- Hormones Hypothalamiques: La somatostatine: 2 chaîne, une de 14 AA l'autre de 28 AA. Elle a une action inhibitrice sur plusieurs hormones dont l insuline et le glucagon.

15 La TRH ou protiréline : hormone hypothalamique TSH (Thyrotropine). La TRH est un tripeptide: L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide. Protiréline

16 3-Hormones Pancréatiques: L insuline: hormone hypoglycémiante, 2 chaînes : A (21AA) et B ( 30AA) liées par des ponts disulfures.

17 Le Glucagon: hormone hyperglycémiante formée de 29 AA.

18 B- Peptides Neurotransmetteurs: Ils sont libérés au niveau des terminaison nerveuses. Enképhaline : pentapeptide à activité analgésique (Morphine) C- Peptides de microorganismes: La pénicilline est un tripeptide produit par un champignon (antibiotique naturel).