Liens d Intérêts modérateurs : Chevaliez S. Abbvie Gilead Abbott Diagnostics BMS Janssen
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- Adeline Marcil
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1 Liens d Intérêts modérateurs : Chevaliez S. Abbvie Gilead Abbott Diagnostics BMS Janssen
2 Liens d Intérêts modérateurs : Izopet J. Conflits d intérêts potentiels Conférences industrie pharmaceutique et sociétés de diagnostics in vitro : BMS, Gilead, MSD, Pfizer, Tibotec, Abbott, ViiV Healthcare, Roche, Griffols, Beckman Coulter Invitations congrès internationaux : Abbott, Roche, Gilead, Tibotec, ViiV Healthcare, MSD, BMS, GL-Events, Griffols, EMA, Saatchi Health, Agence Polynome, Beckman Coulter
3 Liens d Intérêts modérateurs : SOUSSAN P. Absence de conflit d intérêt.
4 Le récepteur des acides biliaires TGR5 régule la perméabilité de l épithélium biliaire. Ursic-Bedoya J. ; Simerabet H. ; Cassio D. ; Doignon I. ; Péan N. ; Tanfin Z. ; Humbert L. ; Rainteau D. ; Tordjmann T. Laboratoire INSERM UMR-S 1174 «Interactions Cellulaires et Physiopathologie Hépatique». Université Paris Sud, Orsay.
5 Conflits d intérêts Pas de conflit d intérêt à déclarer
6 Les acides biliaires (AB): molécules de signalisation Acides biliaires (AB): molécules amphipathiques, synthétisées par les hépatocytes, sécrétées dans la bile CDCA>LCA>DCA>CA Récepteur nucléaire: FXR (Farnesoid X Receptor) TLCA>LCA>DCA>CDCA>CA Récepteur membranaire: TGR5 Régulation du métabolisme glucidique Dépense énergétique Diminution de la réponse inflammatoire
7 TGR5 protège le foie après hépatectomie Hépatectomie partielle (des 2/3) partielle TGR5 sauvages TGR5 KO Péan et al., Hepatology, 2013 Surcharge en AB chez les souris TGR5 KO Nécrose hépatique péri-biliaire
8 L altération de l épithélium biliaire provoque des lésions du parenchyme Atteinte de la jonction serrée (ex: mutation de la claudine 1) Déficit fonctionnel du rôle de barrière de la perméabilité des jonctions serrées de l épithélium biliaire Passage paracellulaire de substances toxiques (ex: AB hydrophobes) Nécrose hépatique, cholangite Grosse et al., Hepatology, 2012 Hadj-Rabia et al., Gastroenterology, 2004
9 Hypothèse TGR5 régule-t-il la perméabilité de l épithélium biliaire afin de protéger le parenchyme hépatique des lésions induites par la bile?
10 Stratégie d étude In vitro Lignée cellulaire «Normal Rat Cholangiocyte» (NRC) In vivo Souris (C57Bl6): sauvages (WT), invalidées pour le gène codant TGR5 (TGR5-KO) et transgéniques surexprimant TGR5 (TGR5-Tg) Injection intra-vésiculaire d agonistes de TGR5 Gavage des souris avec l agoniste de TGR5 Ligands de TGR5: Acide taurolithocholique (TLCA): AB naturel ayant une forte affinité pour TGR5 Agoniste spécifique de TGR5 (Roche): «RO »
11 In vitro: diminution de la perméabilité de l épithélium biliaire après stimulation de TGR5 In vitro: cellules NRC Contrôle TLCA Agoniste TGR5 Contrôle TLCA Agoniste TGR5
12 In vivo: perméabilité de l épithélium biliaire accrue chez les souris TGR5-KO
13 L expression de la protéine JAM-A (Junctional Adhesion Molecule A) est altérée chez les souris TGR5-KO Barre d échelle: 10µm *: lumière vésiculaire
14 Effet de l agoniste par voie orale sur l expression de JAM-A et claudine 2 Agoniste TGR5 OU véhicule n=5-7 souris par groupe J13 Cholécystectomie 6 12j Rapport entre agoniste et véhicule WT KO JAM-A Claudine 2 Actine WT Véhicule Agoniste KO Véhicule Agoniste 0 JAM-A/actine Claudine 2/actine
15 Expression de p-jam-a dans la vésicule biliaire de souris (résidu Ser-285) 1,2 1 * 0,8 0,6 0,4 *: lumière vésiculaire Barre d échelle: 10µm 0,2 0 WT KO p-jam-a/zo-1 colocalisation *Mann- Whitney: 0,015
16 L activation de TGR5 phosphoryle la protéine JAM-A In vivo VB 20 min Agoniste TGR5 OU véhicule Cholécystectomie 2 p-jam-a 37kDa Actine WT + véhicule WT + RO p-jam-a / actine (rapporté au véhicule) 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 WT véhicule WT RO Résultats poolés de n=2 expériences avec 3 souris par groupe
17 Conclusion Evidence in vitro et in vivo en faveur d une régulation de la perméabilité de l épithélium biliaire par TGR5: Via des modifications transcriptionnelles et post-transcriptionnelles de la protéine des jonctions serrées JAM-A AB TGR5 JAM-A Phosphorylation Synthèse Cholangiocytes + Barrière épithéliale biliaire Protection du parenchyme hépatique Hépatocytes
18 Remerciements Inserm U-1174, Université Paris Sud, Orsay Hayat Simerabet Isabelle Doignon Isabelle Garcin Noémie Péan Zahra Tanfin Doris Cassio Thierry Tordjmann Inserm U-1057 Université Pierre et Marie Curie, Hôpital Saint-Antoine, Paris, France. Lydie Humbert Dominique Rainteau
19 Effet de l agoniste par voie orale sur les protéines des jonctions serrées 12j Agoniste TGR5 OU véhicule 900 Actine Claudine 2 JAM-A WT Véhicule Agoniste KO Véhicule Agoniste J13 Cholécystectomie Variation (en %) après gavage par l agoniste comparé au véhicule seul Actine JAM-A Claudine 2 WT KO
20 Expression des protéines des jonctions serrées dans la vésicule biliaire de souris ARN messager Immunofluorescence 120 WT TGR5-KO 100 GB mrna (% of WT) * * * * 20 0 Occludin ZO-1 E-cad JAM-A Cldn 3 *: lumière vésiculaire Images comparables avec : claudine 1 claudine 2 claudine 5 occludine Barre d échelle: 10µm
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