Mise en place d'un test de génotoxicité sur le gardon Rutilus rutilus introduit dans des lagunes de traitement de lixiviats.

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1 Mise en place d'un test de génotoxicité sur le gardon Rutilus rutilus introduit dans des lagunes de traitement de lixiviats Ivan Starikov Encadrant: Lotfi Aleya Co-encadrant: Nicolas Capelli UMR CNRS 6249 Chrono-Environnement

2 Introduction Mise en décharge d ordures ménagères: Avantages: solution de facilité, la moins coûteuse et la plus répandue, pour traiter les déchets ménagers Inconvénients: écoulements de lixiviats parfois importants déversement direct dans le réseau hydrographique Source de pollution potentielle

3 Introduction Les éléments traces métalliques (ETMs): «substances extrêmement préoccupantes» (REACH, 2007) problème de concentration dans les compartiments environnementaux problème de transfert et/ou accumulation dans les chaînes alimentaires (Rogival et al., 2007)

4 Introduction Génotoxicité Les tests de génotoxicité sont de plus en plus utilisés pour observer les effets nocifs de certaines substances sur les espèces vivantes : Mutations Dommages à l'adn Anomalies cytogénétiques

5 Introduction Génotoxicité Ces tests sont particulièrement adaptés pour l étude des effets de mélanges complexes de substances toxiques dans les écosystèmes aquatiques (Ohe et al., 2004).

6 Objectif de l étude Mettre en place un test de génotoxicité Il permettra d estimer l impact des lixiviats sur le génome d une espèce aquatique représentative: le gardon (Rutilus rutilus)

7 Site d étude Système de traitement de lixiviats à Etueffont (Territoire de Belfort, France): Ancienne décharge (former landfill, ) Nouveaux casiers (new cell, ) Tuyau et système de lagunage (4 bassins) (Grisey et al., 2010)

8 19 ETMs présents dans l eau et les sédiments du bassin 4 ont été préalablement étudiés (Grisey et al., 2011): As, Be, Cd, Cr, Co, Cu, Li, Mn, Mo, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, Sr, Tl, Ti, V, Zn lagune 4 Les effets cancérogènes et mutagènes des ETM sont prouvées ou supposées (Bal, Kasprzak, 2002)

9 Echantillonnage: Les poissons sont prélevés: dans la lagune 4 (n = 10) et dans une pisciculture poissons témoins (n = 10) lagune 4

10 Modèle étudié: Le gardon Rutilus rutilus poisson benthopélagique commun peut atteindre 50 cm et 1,8 kg vit dans les lacs eutrophes, les moyennes et grandes rivières (Kottelat, Freyhof, 2007).

11 Le gardon est présent: dans la plupart des pays de l Europe dans une grande partie de l Asie du Nord introduit en Espagne et au Nord de l Italie. Matériels et méthodes Ce poisson est l objet de: pêche sportive ou commerciale pisciculture On peut supposer qu une consommation de gardons provenant de milieux contaminés peut présenter des risques sanitaires importants

12 Test de génotoxicité choisi: Technique RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Avantages: Relativement simple La connaissance du génome du modèle d étude n est pas indispensable Seules de faibles quantités d ADN sont nécessaires Le coût unitaire par analyse est raisonnable

13 Test de génotoxicité choisi: Technique RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Principe : Extraction et purification de l ADN

14 Extraction de l ADN Kit Dneasy Blood & Tissue (QIAGEN) Prélèvement des tissus et lyse pendant 6h à 56 C Purification par chromatographie d échange ionique Dosage et contrôle de l intégrité de l ADN après électrophorèse sur gel d agarose

15 Test de génotoxicité choisi: Technique RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Principe : Extraction et purification de l ADN Amplication de l ADN par PCR

16 Amplification de l ADN par PCR 6 amorces aléatoires seront utilisés (Amersham Pharmacy Biosciences) 50 ng d ADN est utilisé 45 cycles d amplification dénaturation (95 C, 1 min) hybridation (36 C, 1 min) élongation (72 C, 2 min)

17 Amplification de l ADN par PCR Visualisation et analyse des fragments obtenus entre le groupe contrôle et le groupe exposé

18 Témoin Diméthoate 2000 bp 200 bp Exemple de visualisation de produits RAPD issus du poisson zèbre : le fragment de 580 pb (ligne 5) qui est visible chez le poisson témoin a disparu chez le poisson exposé au diméthoate (Zhiyi, Haowen, 2004).

19 Premiers résultats Extraction de l ADN génomique Rutilus rutilus Kb ,1 4,3 2,3 0,5 1 Zone de prélèvement (sur gardon congelé) 1: ADN nageoire (10 mg) Gel agarose 0,8% 2: ADN chair (10 mg)

20 Merci pour votre attention!

21 Annexe Test de génotoxicité choisi: Technique RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) Inconvénients: Manque d information a priori sur l identité des produits d amplification Problèmes de reproductibilité Problèmes de co-migration