Plateau technique de Cytométrie en Flux Analyse et Tri Cellulaire
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- Jean-René Rivard
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1 Compte-rendu de la réunion du CoS 25 novembre 2014 Membres présents : AUDONNET Sandra, CORAUX Christelle, ESCOTTE-BINET Sandie, LAMKHIOUED Bouchaïb, LE NAOUR Richard, TOURNOIS-HIRZEL Claire, VAN GULICK Laurence Membre excusé : MAURICE Pascal Membre absent : BETOULLE Stéphane Ordre du jour 1. Point d information sur "Tri cellulaire et Hygiène et Sécurité" 2. Retours sur le Congrès de l AFC/SFI (Lille du 4-6 Novembre 2014) 3. Informations sur le choix de l acronyme du plateau et du logo 4. Points divers (listing Anticorps et sondes fluorescentes, bilan du questionnaire animations scientifiques et techniques, bilan de l'enquête projet tri cellulaire...) Mr Le Naour ouvre la séance par quelques points d informations généraux et informe que : 1. Une réunion des responsables des plateaux techniques de la plateforme Santé (PICT, animaleries, CRB et Cytométrie en flux) s est tenue le 16 septembre 2014 en présence du directeur de la SFR afin de discuter de la répartition du résidu de l enveloppe budgétaire affectée à la plateforme Santé (montant de euros). Mr Le Naour précise qu il a défendu le bilan du plateau technique de cytométrie en flux sur le premier semestre 2014 et que, justifiant de la relance de l activité du plateau, il a obtenu 5000 euros supplémentaires pour le fonctionnement du plateau technique sur le second semestre de l année A l issu de ce point, Madame Audonnet propose de présenter, au cours de la première réunion du CoS de l année 2015, un bilan financier de l utilisation des crédits du plateau sur l exercice 2014.
2 2. Concernant le budget 2015, un dialogue de gestion était prévu courant octobre/novembre entre les instances de l URCA (Laurent Martini, VP Commission recherche, et Michaël Molinari en charge de l organisation des plateformes de l URCA) et les responsables du plateau technique de cytométrie en flux pour discuter du budget de fonctionnement du plateau pour A la demande de l URCA et dans le but de préparer le dialogue de gestion, Mr Le Naour précise que Mme Audonnet et lui-même ont rempli un document circonstancié présentant l organisation administrative et scientifique du plateau, les projets, les partenariats, les publications et les formations liés au plateau ainsi que le budget 2014 et le budget prévisionnel 2015 associés à une réflexion sur l évolution souhaitée pour le plateau dans le cadre du futur contrat quinquennal. Finalement, Mr Le Naour constate qu aucune réunion ni aucun dialogue avec les instances de l URCA n a eu lieu et que, sans consultations préalables, un budget global dédié aux plateformes a été voté lors du conseil d administration du 18 novembre A la suite de ce point d information, une discussion est ouverte entre les différents membres du CoS qui regrettent l absence de réunions préparatoires pour le budget 2015 à l échelle du plateau technique. La discussion fait également apparaître un problème de visibilité du plateau technique de cytométrie en flux de la plateforme Santé au regard de l existence du plateau mobicyte rattaché à une autre plateforme. Mr Le Naour rappelle qu il a, à plusieurs reprises, alerté les instances de l Université sur la nécessité d organiser rapidement une réunion entre les responsables des deux plateaux. Il se propose de refaire cette demande au cours de la réunion des Directeurs d Unités qui se déroulera le 27 novembre Messieurs F-X Maquart et J-H Renault ont été invités à présenter le secteur Santé de l URCA a l Université de Mons le 24 novembre Pour préparer cette présentation, JH Renault a demandé à Mr Michel (co-responsable de PICT) de coordonner la réalisation de deux diapositives pour présenter la Plateforme Santé. Des informations portant sur le plateau de cytométrie ont été transmises à Mr Michel pour préparer le diaporama.
3 4. Des HRS (Heures Responsabilités Services) liées à la gestion de l activité des plateaux techniques ont été attribuées pour chacun des plateaux techniques de l URCA. Ainsi, 6h d HRS ont été attribuées à Mr Le Naour qui assure la responsabilité du plateau de cytométrie. Mr Le Naour précise qu il aurait souhaité que Mme Audonnet puisse bénéficier de ces heures sous la forme d une prime mais que, renseignements pris, cela ne pouvait être possible compte tenu de la notion de "décharges d enseignements" associés à l attribution des HRS. Mr Le Naour informe qu un dossier pour l obtention de la prime NBI (Responsable Appareils Scientifiques Lourds) a été déposé par Mme Audonnet. Par ailleurs, Mr le Naour informe les membres du CoS que 12h d HRS ont été attribuées à l ensemble de la Plateforme Santé et que ces heures ont été réparties par Mr FX Maquart de la façon suivante : 6 h à Mr Michel et Mr Piot, 3h à Mr Dukic et 3h à Mr Le Naour. 5. Dans le contexte où les plateaux techniques doivent s autofinancer, se pose le problème du règlement des heures d utilisation et de l achat des réactifs dans le cadre des TP de démonstration des cursus L et M. Mr Le Naour précise que pour le cursus Professionnel, un arrangement a été trouvé avec les responsables de filières pour l année universitaire Par ailleurs, le problème des TP pédagogiques a été remonté auprès de S. Jaisson qui l a relayé auprès de L. Debelle et Mr Carton, VP CFVU Formation. A l issu de ce dernier point, Mr Le Naour cède la parole à Mme Audonnet qui reprend les points chronologiques de l ordre du jour : 1. Point d information sur "Tri cellulaire et Hygiène et Sécurité" Mme Audonnet rappelle que la problématique du tri cellulaire sur le plan hygiène et sécurité est toujours d actualité et a été évoquée lors du Congrès de l AFC/SFI qui s est tenu à Lille du 4 au 6 novembre 2014 et lors de la dernière réunion du PUG (groupe de cytométristes parisiens) à laquelle Mme Audonnet a assisté le 12 novembre Mme Audonnet résume les travaux présentés lors de ces deux manifestations et qui ont été menés conjointement par Jan Baijer (responsable cytométrie du CEA - Fontenay-aux-Roses) et Thibault Andrieux (responsable cytométrie AniRA Lyon sud). Les tests réalisés par les deux intervenants sur leur trieur respectif placé sous enceinte de confinement, montre la nécessité formelle
4 de placer le trieur sous une enceinte de confinement et de proposer une méthode commune de contrôle du bon fonctionnement de l enceinte. Un groupe de travail a été constitué dans ce sens au sein de l AFC. Mme Audonnet précise que dans la cadre de la restructuration du Pôle Santé un document de travail relatant les nouvelles exigences en termes de confinement lié au tri cellulaire par cytométrie en flux va être adressé à JH Renault. 2. Retours sur le Congrès de l AFC/SFI (Lille du 4-6 Novembre 2014) Mme Audonnet présente un résumé sur différents aspects de la cytométrie qui ont été abordés lors du Congrès annuel de l AFC/SFI. - Présentation d une application de cytométrie : le FlowRNA dont les kits sont commercialisés par Affimetrix-eBioscience. Cette technologie permet de réaliser à la fois des marquages protéiques membranaires, intracellulaires et le marquage de 4 ARNm par échantillons. Cette technologie permet de réaliser des études de cinétique et de corrélation entre transcription et traduction, d étudier l hétérogénéité de l expression génique, de regarder des marqueurs pour lesquels les Ac n existent pas encore, d évaluer l ARN viral dans des cellules infectées Mme Audonnet précise qu un séminaire sera organisé autour de cette application et que l équipe de Mr Le Naour envisage de la tester. - Présentation du cytomètre analyseur spectral SP6800 Spectral Analyzer de chez Sony qui apparaît comme une petite révolution dans le monde de la cytométrie en flux et qui offre un potentiel dont les limites ne sont pas encore établies. Son système optique unique permet une analyse spectrale de la fluorescence, ce qui permet notamment d obtenir une signature spectrale par cellule, de s affranchir du problème des compensations, de dissocier dans un même échantillon GFP et FITC, de soustraire l autofluorescence des cellules, de contrôler la qualité des sondes fluorescentes - Présentation d une nouvelle NF qualité adaptée aux plateformes technologiques : NF X Cette norme reprend l intégralité de la norme ISO9001 et pour la partie "Management" les recommandations de la norme ISO Mme Audonnet annonce également aux membres du CoS qu elle a été contactée, lors du congrès, par les membres de l AFC (Mr Vincent Gentil en particulier) qui ont émis le
5 souhait que le Congrès de l AFC 2017 ou 2018 soit organisé à Reims. La secrétaire de l AFC a transféré à Mme Audonnet la charte d organisation du congrès. Mr Le Naour précise qu il a récemment discuté avec Mr Ploton, qui a déjà organisé ce congrès à Reims, et que ce dernier lui a confirmé que la société organisatrice (Alphavisa) était très compétente pour toute l organisation autour du congrès. Mme Audonnet et Mr Le Naour restent en attente d informations supplémentaires de la part de l AFC avant de faire une proposition concrète d organisation d un tel congrès aux membres du CoS. Mme Audonnet informe qu elle a discuté lors du congrès avec Mr Romaric Lacroix qui travaille dans l'unité INSERM "Endothélium, pathologies vasculaires et cibles thérapeutiques" dirigé par le Pr Dignat-Georges. Mr Lacroix travaille depuis plusieurs années sur les activités protéolytiques des microparticules et sur la mesure des microparticules par cytométrie en flux, deux thématiques qui intéressent plusieurs équipes de la SFR. Mme Audonnet précise qu elle a commencé les démarches pour faire intervenir Mr Lacroix dans le cadre des séminaires de la SFR Cap Santé. La date retenue est celle du 29 janvier 2015 de 11h à 12h. Enfin, Mme Audonnet informe que dans le cadre du prix Jeune Cytométriste (13 candidats ont postulé, 4 ont été sélectionnés pour présenter en 20 min leurs travaux), Mme Meghraoui (EA 4683) a obtenu le second prix pour ses travaux sur "Peptides d élastine et modulation de la réponse T helper lors de l emphysème pulmonaire chez la souris" qui utilisent différentes applications de cytométrie en flux telles que les multi-marquages membranaires et intracellulaires et les microdosages multiplex de cytokines sur surnageant de culture. 3. Informations sur le choix de l acronyme du plateau et du logo Mme Audonnet rappelle qu à la suite à la dernière réunion du CoS, elle a sollicité l ensemble des membres du CoS, pour que des propositions d acronyme lui soient envoyées afin de faciliter la création d un logo par le service de communication de l URCA. Après épuration des propositions par le service de communication, 11 propositions ont été soumises à un vote par l ensemble des membres du CoS pour arrêter un choix définitif. L acronyme finalement retenu est URCACyt (pour Université de Reims Champagne-Ardenne Cytométrie). Le choix a été soumis à Mr Laurent du service communication de l URCA qui a travaillé à la
6 réalisation d un logo. Mme Audonnet présente aux membres du CoS, les 7 propositions de logo que lui a transmis Mr Laurent. Après discussion, il ressort qu aucun des logos proposés ne fait l unanimité et il est convenu de proposer un nouveau cahier des charges à Mr Laurent. 4. Points divers (listing Anticorps et sondes fluorescentes, bilan du questionnaire animations scientifiques et techniques, bilan de l'enquête projet tri cellulaire...) - Mme Audonnet informe les membres du CoS que, malgré une nouvelle relance sur la mise en place d'un listing d anticorps, de sondes fluorescentes et d isotypes contrôles dont l utilisation était validée en cytométrie et ceci afin de permettre aux utilisateurs du plateau technique de pouvoir disposer de façon ponctuelle d un échantillon à des fins de tests ou de mises au point, elle n a reçu aucune réponse. Mme Coraux signale que, pour ce qui la concerne, elle ne dispose que des anticorps utilisés dans les projets de cytométrie en cours. Mr Le Naour signale, que pour son unité, Mme Meghraoui transmettra le listing des anticorps murins et qu il fera établir celui des anticorps humain. Un nouveau point sera fait lors de la prochaine réunion. Il est rappelé que ce listing ne sera consultable que par Mme Audonnet et ne sera en aucun cas communiqué. - Mme Audonnet fait le bilan des réponses qu elle a obtenues à la suite de l envoi (via les mailing-listes des SFR Cap Santé et Condorcet) du questionnaire permettant d évaluer les centres d intérêts et les besoins des utilisateurs sur les applications de cytométrie en flux et ainsi d organiser des journées thématiques ciblées répondant aux attentes des utilisateurs. Mme Audonnet indique qu elle a reçu 18 réponses (14 URCA, 1 UPJV, 1 Institut LaSalle Beauvais, 1 AgroParitech, 1 industriel G.H. Mumm). Les 3 items les plus demandés sont : Préparation des échantillons, contrôles et choix des fluorochromes, marqueurs de viabilité Marquages intracellulaire, phosphoprotéines et facteurs de transcription - Avantages de la cytométrie par rapport au western blotting
7 Microdosages multiplex en cytométrie en flux d'analytes solubles ou de protéines présentes dans les lysats cellulaires - CBA - et formation à l'utilisation du logiciel FCAP Array - BD Biosciences Mme Audonnet signale que n ayant pas trouvé d interlocuteur auprès des prestataires de cytométrie susceptible d organiser le premier item, elle se chargera elle-même de son organisation dans le courant du 1 er semestre Pour le deuxième item, Mme Audonnet informe qu elle a déjà pris un contact avec un responsable de chez Ozyme-BioLegend pour mettre en place le séminaire au cours du premier semestre de l année Pour le troisième item, Mme Audonnet est en attente d une réponse par BD Biosciences pour organiser le séminaire avant la fin de l année Compte tenu des délais trop courts pour assurer une large diffusion de l évènement, Mr Le Naour propose de reporter cette programmation en début d année Mme Audonnet signale qu elle a également pris contact lors du congrès de l AFC/SFI de novembre pour organiser en 2015 un séminaire sur le FlowRNA. - Mme Audonnet fait également le bilan des retours liés au questionnaire envoyé via les mailing-listes des SFR Cap Santé et Condorcet, pour identifier les futurs projets de recherche nécessitant l utilisation du tri cellulaire par cytométrie en flux. Mise à part les projets en cours (Mme Coraux et Mr Brassart), Mme Audonnet n a eu aucun retour. Il est décidé par les membres du CoS d attendre avant de renvoyer le questionnaire. - Le dernier point qui portait sur les prochaines manifestations de cytométrie ne pouvant être évoqué faute de temps, il est remplacé par une information écrite présentée ci-dessous. Journées thématiques de l AFC : la photonique en cancérologie préclinique (3/2/2015, Nice) et Basophile-Mastocyte : Exploration cytométrique dans l allergie et autres pathologies (12/3/2015, Paris) Congrès de l AFC (18-20/11/2015, Juan-lès-Pins) Journées thématiques de la SFM : Cytométrie et Microbiologie (23/3/2015, Paris) 30th Congress of the International Society for Advancement of Cytometry (26-30/6/2015, Glasgow) Mr Le Naour lève la séance à 10h45.
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