FEMTELLE upa/pai-1 REF 899. IVD C X42 2 l 8 C. Sekisui Diagnostics, LLC 500 West Avenue, Stamford, CT Tel. (203) Fax (203)

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1 M Sekisui Diagnostics, LLC 500 West Avenue, Stamford, CT 0690 Tel. (03) Fax (03) 60- FEMTELLE upa/pai- REF 899 (Plaques pré-coatées et réactifs pour x 96 tess) IVD C X4 l 8 C EC REP american diagnostica GmbH Kaplaneigasse 35, Pfungstadt, D-6439, Germany INDICATION FEMTELLE est proposée pour la mesure quantitative simultanée de l urokinase (upa) et de l Inhibiteur type de l Activateur du Plasminogène (PAI-), dans les extraits tissulaires de tumeurs. Cette mesure est utile dans les indications suivantes: ) Pronostic chez les patientes avec cancer du sein et à risque faible ou élevé de rechute après la chirurgie. 7,8,3,5,6,0,3 De faibles concentrations d upa et de PAI- au-dessous du seuil établi (3 ng d upa/mg et 4 ng PAI-/mg- de protéines totales), classent la patiente dans le groupe à risque faible de récurrence. Des concentrations d upa et/ou de PAI- au-dessus des valeurs seuil, classent la patiente dans le groupe à risque élevé de récurrence. ) Prédictivité: les concentrations d upa et de PAI- pourraient être utilisées pour prédire la réponse à la thérapie adjuvante. 8,3,0 La recherche clinique suggère que les patientes avec des taux faibles d upa et de PAI- ne bénéficieront probablement pas d une thérapie adjuvante, tandis que celle-ci serait bénéfique pour les patientes avec des taux élevés. 8,0,3,0 Les valeurs seuil sont les mêmes que pour le pronostic. Les concentrations d upa et de PAI- doivent être utilisées en association avec toute information clinique disponible et les autres moyens de diagnostic utilisés pour le suivi des patientes avec cancer du sein. 0,3 EXPLICATION DU TEST upa/pai- Le système d activation du plasminogène (PA) comprend l Activateur du Plasminogène de type urokinase (upa) qui est une sérine estérase, un inhibiteur des sérine-estérases (serpin), le Plasminogen Activator Inhibitor type- (PAI-) - inhibiteur qui inhibe spécifiquement l upa et le tpa (tissue-type Plasminogen Activator), et le récepteur de l upa (upar) sur la surface cellulaire. Ce système a été étudié de manière approfondie par plusieurs investigateurs -4, il en ressort que l upa et le PAI- sont des marqueurs biologiques importants de l évolution des tumeurs, et qu ils ont un rôle clé dans la prolifération cellulaire, l invasion et les metastases.,3,0,3 Les cellules tumorales synthétisent et secrètent l upa sous forme inactive monocaténaire, appelée scu-pa. Le scu- PA se fixe à l upar présent sur la surface cellulaire et est transformé en une enzyme active par diverses sérineestérases (plasmine, kallicréine plasmatique, trypsine), les métallo-protéases ou les cystéines-estérases (cathepsine B et L).,0, L upa fixé à l upar convertit le plasminogène en plasmine, ce qui conditionne la dégradation de la matrice extracellulaire, directement et/ou indirectement, par l activation de certaines métalloprotéases, ce qui favorise l invasion cellulaire et les métastases.,3 Le PAI- interagit avec les complexes upaupar pour former un complexe ternaire, internalisé par la cellule, ce qui initie la transduction du signal et la prolifération cellulaire. Le PAI- joue également un rôle important dans les métastases en interférant avec les propriétés adhésives de la vitronectine, ce qui facilite la migration des cellules tumorales. 4 L upa et le PAI- ont été validés comme étant des facteurs indépendants et forts de pronostic, et sont classés dans le plus haut degré d évidence (degré d évidence I) selon le Tumor Marker Utility System (Système Utile des Marqueurs Tumoraux),3,0 dans le cancer du sein. Des études cliniques multicentriques randomisées, ainsi que des méta-analyses rétrospectives, ont montré que la détermination des taux d upa et de PAI- dans les extraits tissulaires tumoraux permet d évaluer le risque de récidive de la maladie, 5,7-9,3,5,6,9,0,3 et de prédire la probabilité du bénéfice de la chimiothérapie adjuvante 8,3,0 et endocrine 7 pour les patientes avec cancer du sein. Les patientes ayant un taux élevé d upa ou de PAI- dans les extraits tissulaires de tumeur du sein ont une réduction significative de l espérance de vie sans rechute, ainsi qu une réduction de l espérance globale de survie par rapport aux patientes ayant des taux bas. 8,5,6 Des taux élevés d upa et de PAI- ont également été observés dans d autres types de cancer, comme le cancer de l ovaire ou gastrique.,8, Pour les patients avec des taux élevés d upa et/ou de PAI-, il y a une probabilité accrue pour que la thérapie adjuvante systématique soit bénéfique, tandis que chez les patients avec des taux bas la thérapie, avec ses inconvénients et ses effets secondaires, peut être évitée. 8 Le statut Her et la détermination des taux d upa et de PAI- sont des paramètres indépendants et complémentaires dans le cancer du sein. 4 Ainsi, les taux d upa et de PAI- dans les extraits tissulaires tumoraux de cancer du sein, associés à d autres données de laboratoires ou cliniques (i.e. le statut Her) peuvent aider les médecins à évaluer le risque individuel de récidive et aider dans la décision pour une thérapie adjuvante individualisée. 8,9,3,4

2 PRINCIPE DE LA METHODE FEMTELLE reconnaît les diverses formes d upa, incluant le sc-upa, l upa de Haut Poids Moléculaire (HPM), l upa complexé avec le PAI- ou avec le PAI- (Inhibiteur de l Activateur du Plasminogène ), ainsi que les formes latentes et actives du PAI- ou le PAI- complexé au tpa. La technique ELISA utilise des anticorps monoclonaux spécifiques de l upa ou du PAI- pour l immunocapture. Les extraits tissulaires des tumeurs, ayant une concentration protéique connue, sont incubés toute la nuit dans les puits de la plaque ELISA sensibilisée avec les anticorps monoclonaux anti-upa ou anti PAI-. Après lavage, on ajouté les anticorps de détection spécifiques de l upa ou du PAI-, biotinylés. Après une courte période d incubation, la streptavidine couplée à la péroxydase est ajoutée, ce qui permet la formation du complexe enzyme-anticorps de détection. L addition du substrat de la peroxidase 3,3,5,5, Tétraméthylbenzidine en présence de perborate génère une coloration bleue. La réaction est arrêtée par addition d acide sulfurique, et la coloration vire au jaune. La DO est mesurée à 450 nm et les concentrations d upa et de PAI- sont déterminées sur la courbe d étalonnage. La concentration protéique de l extrait tissulaire est déterminée avec une méthode chromogénique. Les résultats sont exprimés en ng d upa/mg- ou en ng PAI-/mg- de protéines totales dans l extrait tissulaire. REACTIFS FOURNIS R: 6 barrettes de 6 puits sensibilisés avec l Anti-uPA, avec cadre et couvercle (claire) R 6 barrettes de 6 puits sensibilisés avec l Anti-PAI-, avec cadre et couvercle (rouge marqué) 6 flacons de Standards upa : R3: 0, R4: 0., R5: 0.5, R6: 0.5. R7: 0.75, R8:.0 ng/ml (lyophilisés) 6 flacons de Standards PAI- : R9: 0, R0:.0, R:.5, R: 5.0, R3: 7.5, R4:0.0 ng/ml (lyophilisés) R5 flacons d Anticorps de détection pour upa,, anti- upa humain biotinylé (lyophilisés) R6 flacons d Anticorps de détection pour PAI-, anti- PAI- humain biotinylé (lyophilisés) R7 flacon de Conjugué pour upa, Streptavidine -péroxydase (60 µl) R8 flacon de Conjugué pour PAI-, Streptavidine- péroxydase (60 µl) R9 flacons de Diluant pour Conjugué (lyophilisés) R0 4 sachets de Tampon phosphate physiologique (PBS), ph 7.4 R flacons de Détergent, 5% Triton X-00 ( ml) R sachets de Tampon Tris physiologique (TBS), ph 8.5 (lyophilisés) R3 flacons de Substrat de la Péroxydase, TMB ( ml) (IRRITANT) EQUIPEMENT ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Eau désionisée filtrée sur filtre de 0. µ HO ( Liter) Pipette multicanaux de µl Pipettes de 0-00 µl Lecteur de Micro-plaques ELISA, réglé à 450 nm Tubes (Cryovials) de ml (Nunc, Wiesbaden, Germany) Azote liquide Réservoir à Azote liquide ou congélateur à -80 C avec système de stockage Ultracentrifugeuse avec rotor permettant de centrifuger à g Tubes d Ultracentrifugation Tubes de ml Micro broyeur (dispositif de pulvérisation, i.e. B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany Modèle S or U) Agitateur rotatif permettant d agiter délicatement les tubes Acide sulfurique 0.5 M (HSO4) (IRRITANT) Albumine Sérique Bovine (BSA, Sigma A-7030) Réactif de dosage des protéines par méthode BCA (Pierce Chemical Co. - #35; Pierce, Rockford, IL, marque fortement conseillée) Echantillons de contrôle (Extrait tissulaire de tumeur de souris Nude avec xénogreffe de tumeur du sein humaine, lignée cellulaire MDA-MB3, p.e. American Diagnostica GmbH REF 899C) Eviter toute contamination microbiologique des réactifs. Ne pas pipeter à la bouche et ne pas ingérer un quelconque réactif. Porter une blouse de laboratoire et utiliser des gants pour toutes les étapes du dosage. Eviter toute projection ou contact avec les yeux. Ne pas fumer, manger ou boire dans les zones où la manipulation est effectuée. IRRITANT R36/R37/R38/S6/S36/S37/S39S45 5 PREPARATION DES REACTIFS A. Standards. Reconstituer les flacons de Standards upa 0.0, 0.5, 0.50, 0.75 et.0 ng/ml avec ml de HO désionisée, et le Standard 0.0 ng/ml avec,0 ml d eau désionisée.. Reconstituer les flacons de Standards PAI-.0,.5, 5.0, 7.5 et 0.0 ng/ml avec ml de HO désionisée, et le Standard 0.0 ng/ml avec,0 ml d eau désionisée. 3. Agiter délicatement pendant 3 minutes. Ne pas secouer! B. Anticorps de Détection. Reconstituer les flacons d anticorps de détection de l upa et du PAI- par 5.5 ml d eau désionisée.. Agiter délicatement pendant 3 minutes. C. Diluant pour le Conjugué Enzymatique. Ajouter 0 ml de HO désionisée au flacon et agiter vigoureusement. D. Tampon de Lavage. Dissoudre un sachet de PBS dans 900 ml de HO désionisée et filtrée.. Ajouter 4 ml détergent Triton X-00 à 5%. 3. Compléter à un volume final de L avec HO désionisée rouge. 4. Agiter vigoureusement. E. Tampon de dilution pour Echantillons Préparer la quantité requise de Tampon pour Echantillons (en fonction du nombre d extraits tumoraux à tester, environ.0 ml/échantillon) en ajoutant de la BSA au Tampon de Lavage pour une concentration finale de % p/v ( g BSA pour 00 ml de Tampon de Lavage). F. Triton X-00 à 0% Ajouter 4 ml de Triton X-00 à 5%, à 6 ml de HO désionisée et filtrée. G. Tampon Tris Physiologique, TBS, ph 8.5. Dissoudre le contenu d un sachet de TBS dans 900 ml de HO désionisée filtrée.. Ajuster le volume final à L avec HO désionisée filtrée. 3. Agiter vigoureusement. CONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS Conserver les barrettes Elisa non utilisée, les réactifs liquides ou lyophilisés, à 8 C jusqu à la date de péremption indiquée sur le coffret. Les réactifs reconstitués doivent être conservés à: Semaines + à +8 C PRECAUTIONS Ne pas utiliser les réactifs du coffret après leur date de péremption. Ne pas mélanger les réactifs provenant de lots de coffrets différents. 3

3 PREPARATION DES ECHANTILLONS A. Pulvérisation des Tissus. Utiliser 50 à 300 mg de tissus congelés rà très basse température (par exemple dans le conteneur à Azote liquide).. Transférer le tissu congelé dans un micro broyeur ou un pulvérisateur, préalablement refroidi (dans l azote liquide). 3. Broyer ou pulvériser le tissu à vitesse maximale, pendant 30 secondes. 4. Transférer la poudre encore congelée dans un tube. B. Extraction tissulaire 5. Ajouter 0. ml de Triton X-00 à 0% dans.8 ml de TBS, ph 8.5, afin d obtenir une concentration finale en Triton X-00 de %. 6. Mettre en suspension la poudre tissulaire pulvérisée dans.0 ml de TBS, ph 8.5 contenant % de Triton X-00, froid (4 C). 7. Agiter délicatement la suspension tissulaire pendant 4-6 heures (h) à 4 C. 8. Centrifuger la suspension à 00,000 x g pendant h à 4 C, afin de séparer les débris cellulaires. 9. Enlever délicatement et rejeter toute couche lipidique en surface. Prélever le surnageant clair (extrait tissulaire) au-dessus du culot. Rejeter le culot ou les débris cellulaires. 0. Aliquoter le surnageant (extrait tissulaire) en fractions de 00 µl. Prendre un aliquot du surnageant, et mesurer la quantité totale de protéines dans l extrait tumoral. Conserver l extrait tissulaire dans l azote liquide ou à 80 C jusqu au dosage. Eviter les cycles congélation/décongélation, ce qui peut compromettre les résultats.. Pour un test ELISA immédiat, diluer l extrait tissulaire :0 dans le diluant échantillons. DETERMINATION DES PROTEINES Déterminer la concentration totale des protéines dans l extrait tissulaire, avec le coffret BCA de Pierce. La méthode BCA de Pierce pour le dosage des protéines est compatible avec la présence de détergent et n est pas affectée par les concentrations de Triton X-00 jusqu à %. Si nécessaire, ajuster la concentration protéique totale à -3 mg/ml avec du TBS avec % Triton X-00, ph 8.5. Nota: La présence de Triton X-00 interfère avec d autres tests pour les protéines. C est pourquoi seul le réactif BCA de Pierce est recommandé pour cette détermination. PROCEDURE DE DOSAGE ELISA DE L upa/pai- 0. Introduire 00 µl de conjugué dilué dans chaque puits. (Nota: Utiliser le conjugué enzymatique upa uniquement pour les puits sensibilisés par l anticorps anti-upa. Utiliser le conjugué enzymatique PAI- uniquement pour les puits sensibilisés par l anticorps anti-pai-).. Couvrir et incuber heure à Température Ambiante (0 5 C). Laver les puits 4 fois avec le Tampon de Lavage. 3. Ajouter 00 µl de substrat TMB à chaque puits; couvrir et incuber 0 minutes à Température Ambiante (0-5 C). Une coloration bleue se développe. 4. Arrêter la réaction à l aide de 50 µl de HSO4 0.5 M. Agiter délicatement les puits afin d assurer une bonne homogénéisation du HSO4. La coloration vire au jaune. 5. Dans les 0 minutes, mesurer la DO à l aide d un lecteur de plaques réglé à 450 nm. Soustraire la DO moyenne des blancs (bruit de fond) des DO obtenues pour les Standards et les Echantillons. LIMITES DU TEST En raison de l implication du PAI- dans les processus de cicatrisation, toute biopsie préopératoire de la tumeur primaire, antérieure à la prise d échantillon pour les dosages d upa et de PAI- peut induire (au moins temporairement) des taux élevés de PAI-, qui doivent alors être analysés avec précaution. CONTROLE DE QUALITE Pour l upa et le PAI-, les échantillons des patients doivent être testés parallèlement avec les contrôles pour l upa et le PAI-, pour conformité avec l Assurance Qualité. Les critères de qualité de cette méthode ELISA (REF 899),, ont été évalués en externe. COURBES D ETALONNAGE TYPE Tracer la courbe d étalonnage et déterminer la concentration d upa en portant en abscisses les concentrations d upa et en ordonnées les DO moyennes correspondantes. Tracer la courbe d étalonnage et déterminer la concentration de PAI- en portant en abscisses les concentrations de PAI- et en ordonnées les DO moyennes correspondantes. Les courbes de calibration doivent être réalisées chaque fois qu un nouveau test ELISA (REF 899) est réalisé. A partir des courbes de calibration, déterminer directement les concentrations d upa et de PAI- pour les échantillons dilués. Les courbes de calibration ci-dessous sont indiquées à titre d exemple uniquement: PREMIER JOUR. Prélever la quantité nécessaire de barrettes sensibilisées pour l upa du sachet et les placer sur le cadre fourni. Refermer hermétiquement le sachet avec le déshydratant, et le conserver à 8 C.. Prélever la quantité nécessaire de barrettes sensibilisées pour le PAI- du sachet et les placer sur le cadre fourni. Refermer hermétiquement le sachet avec le déshydratant, et le conserver à 8 C. 3. Dans les puits upa des barrettes ELISA, ajouter 00 µl de chaque Standard upa, les contrôles, et les extraits tissulaires dilués, pour tester l upa. Dans les puits PAI- des barrettes ELISA, ajouter 00 µl de chaque Standard PAI-, les contrôles, et les extraits tissulaires dilués, pour tester le PAI-. (Effectuer les dosages en double; voir plus loin la suggestion pour répartir les tests). 4. Couvrir et incuber une nuit à +4 C, dans une enceinte humide. SECOND JOUR 5. Laver les puits 4 fois avec le Tampon de Lavage. 6. Ajouter 00 µl d anticorps de détection de l upa dans chaque puits sensibilisé pour l upa. Ajouter 00 µl d anticorps de détection du PAI- dans chaque puits sensibilisé pour le PAI-. 7. Couvrir et incuber heure à Température Ambiante (0 à 5 C). 8. Laver les puits 4 fois avec le Tampon de Lavage. 9. Ajouter µl de Conjugué enzymatique à ml de diluant pour conjugué (Ajouter µl de conjugué à ml de diluant pour chaque barrette de 6 puits, quand la plaque entière n est pas utilisée). Densité Optique à 450 nm Courbe d'étalonnage pour l'elisa de l'upa concentration d'upa, ng/ml 4 5

4 Densité Optique à 450 nm Courbe d'étalonnage pour l'elisa du PAI concentration de PAI-, ng/ml CALCUL DES RÉSULTATS. A partir des courbes d étalonnage, et en utilisant la DO moyenne mesurée, déterminer la concentration d upa et de PAI-, en ng/ml, dans chaque échantillon testé.. Multiplier la valeur obtenue pour l échantillon par 0, afin d obtenir la concentration d upa et de PAI- dans l extrait tissulaire. (Nota: L extrait tissulaire a été dilué 0 fois avant d effectuer les dosages). 3. Diviser chacune des concentrations d upa et de PAI- (ng/ml) par la concentration de protéines totales (en mg/ml) déterminée pour l extrait tissulaire (voir ci-dessus) afin d obtenir les concentrations d upa et de PAI- en ng/mg de protéines totales. VALEURS ATTENDUES La valeur seuil pour les concentrations d upa permettant de discriminer un risque faible d un risque élevé, et de déterminer le bénéfice d une chimiothérapie est de 3 ng/mg de protéines totales. La valeur seuil pour les concentrations de PAI- permettant de discriminer un risque faible d un risque élevé, et de déterminer le bénéfice d une chimiothérapie est de 4 ng/mg de protéines totales. INTERPRETATION DES RESULTATS (voir l algorithme ci-joint) PERFORMANCES ET CARACTERISTIQUES Précision Cette méthode ELISA (REF 899) a été évaluée dans un laboratoire de contrôle de qualité, en utilisant des extraits tissulaires, préparés à partir de xénogreffes, et prélevés chez des souris Nude chez qui la lignée cellulaire de cancer du sein humaine MDA-MB3 a été implantée. Les échantillons ont été testés en double dans 0 séries (n=40). Pour l upa, la moyenne (ng/ml) et les coefficients de variation (CV) intra- et inter-essai étaient respectivement de 0.34 ng/ml, 5.4% et.3%. Pour le PAI-, la moyenne (ng/ml) et les coefficients de variation (CV) intra- et inter-essai étaient respectivement de 5. ng/ml, 6.7% et 4.7%. Seuil de sensibilité Le seuil de détection pour le dosage de l upa est de 5 pg upa/ml d échantillon. 6 Le seuil de détection pour le dosage du PAI- est de 5 pg PAI-/mL d échantillon. 6 Specificité Le dosage ELISA de l upa (REF 899) mesure les deux formes de UK de Haut Poids Moléculaire, ainsi que l upa complexé au PAI- ou au PAI-. Il n y a pas d interférence du tpa, du PAI-, des complexes de tpa ni du PAI-. 6 Le dosage ELISA du PAI- (REF 899) mesure les formes latentes et actives du PAI- et les complexes de PAI-. Il n y a pas d interférence du PAI-, des complexes de PAI-, du tpa ou des diverses formes de UK de Haut Poids Moléculaire. 6 TRAÇABILITE DU MATERIEL DE REFERENCE (STANDARDS) Toute information concernant la traçabilité du matériel de standardisation est disponible sur demande auprès d Sekisui Diagnostics, LLC. 6 LIMITES DE LA METHODE La méthode ELISA pour doser l upa et le PAI-(REF 899) ne convient pas pour des dosages sur plasma ou sérum et ne peut pas être utilisée pour tester des échantillons préparés à partir de coupes fixées par le formol. PRONOSTIC Le risque de récurrence peut être évalué à partir des dosages d upa et de PAI- dans les extraits tissulaires des tumeurs des patientes avec cancer du sein sans ganglions. 7,8,3,5,6,9,3 Pour les extraits tissulaires en détergent, des concentrations d upa inférieures à 3 ng/mg et de PAI- inférieures à 4 ng/mg, indiquent un risque faible de récurrence et une amélioration de la durée de vie sans rechute ou globale; des concentrations d upa supérieures à 3 ng/mg et/ou de PAI- supérieures à 4 ng/mg, indiquent un risque élevé de récidive. Nota: Au moins dans les zones tumorales proches du site de biopsie, le taux de PAI- peut devenir artéfactuellement élevé en raison des biopsies qui induisent des lésions cellulaires suivies de cicatrisation. Pour cela des taux élevés de PAI- (par exemple >4 ng/mg) dans les échantillons chirurgicaux doivent être analysés avec précaution, s il y a un risque qu ils soient affectés par l existence de biopsies pré-opératoires. PREDICTION La réponse à un traitement adjuvant par chimiothérapie, peut être prédite d après les résultats des dosages d upa et de PAI- dans les extraits tissulaires des tumeurs des patientes avec cancer du sein. 8,3 Des concentrations d upa inférieures à 3 ng/mg et de PAI- inférieures à 4 ng/mg, indiquent une probabilité faible de réponse thérapeutique à un traitement adjuvant de chimiothérapie. Des concentrations d upa supérieures à 3 ng/mg et/ou de PAI- supérieures à 4 ng/mg, indiquent une probabilité élevée de réponse thérapeutique à un traitement adjuvant de chimiothérapie. Il est recommandé d analyser les résultats des dosages de l upa et du PAI- en parallèle avec d autres paramètres cliniques et pathologiques des patientes, afin de fournir une information précise sur l estimation du risque et les options thérapeutiques individualisées

5 REFERENCES. Andreasen, P. A., et al. International Journal of Cancer 997; 7: -. Review.. Benraad, T. J., et al. European Journal Cancer 996; 3A(8): Duffy, M., et al. Clinical Chemistry 00; 48:8: Foekens, J. A., et al. Journal of Clinical Oncology 994; : Foekens, J. A., et al. Cancer Research 000; 60: Harbeck, N., et al. Breast Cancer Research and Treatment 999; 54: Harbeck, N., et al. Journal of Clinical Oncology 00; 0 (4): Harbeck, N., et al. Cancer Research 00; 6: Harbeck, N., et al. Clinical Breast Cancer 00; 3(3): Review. 0. Harbeck, N. et al. Thrombosis and Haemostasis 004; 9(3): Review.. Hayes, D. F., et al. Journal of Cancer Institute 996; 88: Janicke, F., et al. Cancer Research 994; 54: Janicke, F., et al. Journal of National Cancer Institute 00; 93 (): Kanse, S. M., et al. Experimental Cell Research 996; 4: Look, M., et al. Journal of National Cancer Institute 00; 94 (): Look, M., et al. Thrombosis and Haemostasis 003; 90: Meijer Van Gelder, M., et al. Cancer Research 004; 64 (3): Nekarda, H., et al. Cancer Research 994; 54: Prechtl, A., et al. International Journal of Biological Markers 000; 5(): Schmit, M., et al. Expert Rev Mol Diagn 0, : Schmitt, M., et al. Thrombosis and Haemostasis, 997; 78: Sweep, C. G. J., et al. British Journal of Cancer 998; 78: Thomssen, C., et al. Onkologie 003; 6: Review Article. 4. Zemzoum, I., et al. Journal of Clinical Oncology 003; (6): EC Directive 999/45/EC (European Directive on the classification, packaging and labeling of dangerous preparations): R36/R37/R38 = irritating to eyes, respiratory system and skin. S45 = in case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label where possible). S6 = in case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice. S36/S37/S39 = wear suitable protective clothing, gloves and eye/face protection. 6. Information available from Sekisui Diagnostics, LLC, Stamford, Connecticut Algorithme Pour Interpréter les Résultats du Coffret ELISA upa/pai- (REF 899) PRONOSTIC Excision chirurgicale de la tumeur Préparation de l extrait tissulaire de la tumeur Dosage des protéines totales et de l upa et du PAI- en ELISA PREDICTIVE* Disposition suggérée pour les puits Pour une barrette de 6 puits upa et PAI- inférieurs upa et/ou PAI- supérieurs upa et PAI- inférieurs upa et/ou PAI- supérieurs A S S B S S C S3 S3 D S4 S4 Risque faible de récidive Risque élevé de récidive Faible probabilité de bénéficier d une Forte probabilité de bénéficier E S5 S5 F S6 S6 G T T H T T * En fonction de la Ref. 8, 3, 0 S = Standard T = Echantillon ou Contrôle 8 9