LES ANTICORPS ANTI-ANTIGENES SOLUBLES DU FOIE (anti-sla)
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- Louis Chénier
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1 LES ANTICORPS ANTI-ANTIGENES SOLUBLES DU FOIE (anti-sla) 18 ième journée de biologie de Marseille, 27 ième colloque IBS-Corata Septembre 2010 Catherine JOHANET Unité d Immunologie, CHU Saint-Antoine, Paris
2 MALADIES AUTO- IMMUNES DU FOIE MAI affections ou les lésions des organes cibles résultent du déclenchement d une réponse immunitaire dirigée contre des autoantigènes MAI du foie - cholestases chroniques auto-immunes cirrhose biliaire primitive cholangite sclérosante primitive formes mixtes ou overlap syndrome cholangites auto-immune (CBP séronégative) - hépatites auto-immunes HAI-1 Ac anti-sla HAI-2 (enfant) Maladies peu fréquentes, multifactorielles (facteurs génétiques, environnementaux, présence d auto-anticorps..)
3 LES HEPATITES AUTO-IMMUNES (HAI) Clinique Biologie Anapath Symptômes : Asthénie Ictère Prurit, Début insidieux HAI ans ans HAI ans HAI-2 Biochimie : cytolyse ASAT ALAT IgG Autoanticorps : anti-actine anti-nucléaire anti-sla anti-lkm-1 anti-lc-1 3 à 20 N HAI-1 HAI-2 Hépatite chronique active : inflammation portale fibrose nécrose hépatocytaire (piecemeal necrosis)
4 Critères Score Critères Score Sexe féminin +2 Alcool < 25 g/j +2 Ratio Ph ase alcaline/asat >3 < Alcool > 60 g/j -2 γ-globuline ou IgG HLA DR3 ou DR 4 +1 > 2 fois la normale +3 Maladie auto-immune associée fois la normale +2 Présence d un autre type d autoanticorps (anti-sla, ANCA) fois la normale +1 Hépatite d interface +3 ANA, anti- ML, anti-lkm1 Infiltrat plasmocytaire +1 >1:80 1: Présence de cellules en rosette +1 1:40 +1 Absence d aspect caractéristique -5 <1:40 0 Anomalies des canaux biliaires -3 Anti-mitochondries positifs -4 Stéatose, granulomes -3 Marqueurs viraux positifs -3 Réponse au traitement +2 Marqueurs viraux negatifs +3 Rechute +3 Médicaments hépatotoxiques oui non Avant traitement: HAI certaine: >15 HAI probable: Après traitement: HAI certaine: >17 HAI probable: 12-17
5 CRITERES SIMPLIFIES Critères simplifiés de l HAI-1 (Hennes, 2008) 1. IgG 2. ANA ou anti-actine >16g/l 1/40 1 point 2 points >18g/l 1/80 ou anti-sla positif 3. Histologie 4. Marqueurs viraux Compatible avec HAI Typique de l HAI négatifs 6: HAI probable; 7: HAI certaine
6 HISTORIQUE 1ère description ancienne 1987, Manns : 1 ère description des Ac anti-sla dans l HAI-3 (HAI mal documentée, touchant la femme jeune) 1993, Czaja : HAI , Lohse : identité entre Ac anti-sla et Ac anti-lp (liver pancréas) Intérêt plus récent 1999 : Inclusion dans la nouvelle grille de score diagnostique des HAI comme critères additionnels (International autoimmune hepatitis group report : review of criteria for diagnosis of autoimmune hepatitis; J Hepatol, 1999). identification des cibles antigéniques a permis le développement de techniques de détection.
7 CIBLES ANTIGENIQUES Cibles antigéniques: nombreuses (par immunoblot, le SLA est constitué de plusieurs molécules à 58, 50, 48, 35, 27, 25 kda) Glutathion S-transférase (1998, J. Wesierska-Gadek) Par immunocriblage de banque d ADN complémentaire: Prot 50 kda de la famille des sérine hydroxymethyltransferases impliquée dans un complexe associant t-arn et sélénocystéine appelé trnp(ser)sec (2000, I. Wies) = antigène majeur Par spectrométrie de masse: Isoformes de l énolase et de la catalase, N- hydroxyarylamine sulfotransférase (HAST-1) (2003, E. Ballot ) antigène majeur = trnp(ser)sec : confirmation par spectrométrie de masse (2010, M Volkmann)
8 Cible antigénique: UGA sérine-trna protéine La sérine portée par son ARNt est transformée en sélénocystéine et le codon UGA (normalement codon stop) dirigerait l insertion de la sélénocystéine dans les enzymes
9 DETECTION des Ac ANTI-SLA L IFI sur foie/rein/estomac de rat (triple substrat) permet la détection de l ensemble des marqueurs hépatiques à l exception des Ac anti-sla. ELISA inhibition (technique de référence) Ac anti-sla dans le sérum à tester Ag SLA dans un surnageant g Ac anti-sla dans le sérum à tester Avidinepéroxydase Ig biotynilée d'un sérum anti-sla + de référence Ig d'un sérum anti- SLA+ de référence Substrat % d'inhibition = DO sérum nég - DO sérum à tester DO sérum nég - DO blanc
10 DETECTION des Ac anti-sla Dot-blot, technique la plus utilisée, Ag natif ou recombinant, dot unique ou multiple (ensemble des marqueurs d intérêt des pathologies hépatiques autoimmunes) seuil Ag recombinant Ag natif Dot-blot Western blot Western-blot, Ag: fraction cytosolique de foie de rat, ou recombinant ELISA ou RIA: Ag natif ou recombinant
11 INTERÊT A RECHERCHER les Ac anti-sla? Dans le diagnostic des HAI et des formes mixtes Comme marqueur pronostique Dans la prise en charge thérapeutique Comme marqueur de susceptibilité génétique
12 Intérêt diagnostique des Ac anti-sla: Incidence selon les auteurs HAI-1 HAI-2 Manns Czaja Lhose Nishioka Kanzler Wies /33 7/62 22/103 1/18 13/89 35/98 24% 11% 21% 6% 15% 35% 0/12 CBP CSP 0/40 0/173 0/84 0/25 0/23 HAI/CBP Hépatites cryptogéniques Hépatites virales Hépatopathies non AI MAI non hépatiques Témoins sains antigène 5/37 8/8 14% 100% 3/20 15% 0/81 0/19 1/507 1/138 0/565 0,2% 0,7% 0/153 0/850 0/50 0/238 0/165 0/120 natif natif natif natif natif natif
13 Intérêt diagnostique des Ac anti-sla: Incidence selon les auteurs HAI-1 HAI-2 CBP CSP HAI/CBP Hépatites cryptogéniques Hépatites virales Ballot Ma Baeres Vitozzi Czaja Miyakawa /106 19/33 69/304 22/52 21/172 5/75 12% 58% 23% 42% 12% 7% 0/54 18/31 20/48 0/5 58% 42% 0/52 0/20 0/8 0/46 0/37 7/17 0/10 41% 2/7 29% 10/49 0/14 4/10 0/3 20% 40% 0/105 0/40 0/29 0/47 Hépatopathies non AI MAI non hépatiques Témoins sains antigène 0/25 1/41 0/1026 0/55 2/46 0/20 0/48 0/102 0/56 0/98 0/40 natif recombinant recombinant recombinant recombinant recombinant
14 Intérêt diagnostique des Ac anti-sla: Incidence selon les auteurs HAI-1 Vitozzi Torres Rigopoulou /81 44% HAI-2 CBP CSP HAI/CBP Hépatites cryptogéniques 0/14 Hépatites virales Hépatopathies non AI MAI non hépatiques Témoins sains antigène 5/48 0/17 0/240 10% 0/202 0/60 recombinant recombinant recombinant
15 Intérêt diagnostique des Ac anti-sla Sensibilité: 15 à 40% Ac présent chez l adulte et l enfant Sensibilité fonction: -des techniques de détection -de l origine géographique des patients (Baeres, 2002) fréquence faible au Japon (7%) confirmé sur plusieurs études (NishioKa, 1997; Miyakawa, 2003). 15 à 30% formes mixtes (CBP-HAI) 20% hépatites cryptogéniques qu ils permettent de reclasser en HAI-1 Spécificité: >98% Excellente à l exception de 2 études: Ma, 2002 (CSP) et Vitozzi, 2002 (HAI-2 )et 2004 ( HVC)
16 Ac anti-sla: étude Hôpital Saint-Antoine 148 sérum anti-sla positif (4% des tests) 102 patients 81 dossiers cliniques HAI-1, 72 / 81 patients (89%) HAI-1 n= 62 77% OVERLAP n=10, 12% AUTRES 7 CBP/HAI (8%) 3 CSP/HAI (4%) (critères conventionnels). 60% HAI certaine 40% HAI probable (score HAI, en excluant anti-sla, IAIHG 1999). Tous les enfants appartiennent à ce groupe n=9, 11% 3 hépatites virales C 3 hépatites médicamenteuses (nitrofurantoïn, ibuprofen) 3 tests hépatiques perturbés sans diagnostic établi. Eyraud, liver int 2009
17 Ac anti-sla: étude Hôpital Saint-Antoine Profil immunologique des patients SLA+ HAI-1 (n=72) Actine+ 18% ANA+ 15% ANA+ Actine+ 10 % Anti-SLA seul 57% Eyraud, liver int 2009
18 Place des Ac anti-sla dans la démarche diagnostique En cas de suspicion d HAI: L IFI sur triple substrat reste la technique de première intention permet la détection de l ensemble des marqueurs hépatiques à l exception des Ac anti-sla Détection des Ac anti-sla en première intention: Peut se justifier par leur spécificité supérieure à celle des autres Ac associés à l HAI-1 Détection des Ac anti-sla en seconde intention: Indispensable en cas d IFI négative
19 Intérêt des Ac anti-sla comme marqueur pronostique beaucoup moins étudié et reste encore à confirmer Ballot Ma Czaja Czaja Eyraud Ac anti-sla Décès, TH SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- 1/13 6/93 10/44 1/37 4/21 8/65 2/17 23/138 9/50 8% 6% 23% 3% 19% 12% 12% 17% 18% rémission plus difficile, plus de TH et de décès (Ma et al,hepatology 2002) (mais, population pédiatrique dont l évolution est souvent plus sévère que chez l adulte) Hépatites autoimmunes de novo et récidive d HAI après TH. (Duclos-Vallée, gut 2003) 41% des HAI récidivent (suivi > 10 ans après TH) prévalence des anti-sla: 30% dans le groupe avec récidive vs 0% dans le groupe sans récidive Fréquence des autres Ac (antinucléaires, anti-actine) ne diffère pas significativement dans les 2 groupes Effectif faible
20 Ac anti-sla dans la prise en charge thérapeutique Kanzler Ballot Baeres Czaja Ac anti-sla Réponse initiale au traitement SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- 20/21 66/76 12/13 87/93 36/43 155/202 16/21 51/65 95% 87% 92% 94% 84% 77% 76% 78% Ac anti-sla Réponse initiale au traitement Czaja Eyraud SLA+ SLA- 15/17 112/138 41/50 88% 81% 82% SLA+ SLA- réponse initiale au traitement identique pour HAI-1 anti-sla+ et HAI-1 anti-sla-
21 Ac anti-sla dans la prise en charge thérapeutique Ac anti-sla Rechute après arrêt du traitement Baeres Czaja Czaja SLA+ SLA- SLA+ SLA- SLA+ SLA- 26/35 92/170 16/16 40/51 15/15 100/138 74% 54% 100% 78% 100% 72% rechute après arrêt traitement: significativement plus fréquente chez les patients anti- SLA positifs (Baeres, gut 2002; czaja, autoimmunity 2004)
22 Intérêt des Ac anti-sla comme marqueurs de susceptibilité génétique Peu d études Anti-SLA: associé à l allèle principal de susceptibilité et de sévérité de l HAI: DRB1*0301 association négative avec l allèle DRB1*0401 corrélé à une bonne réponse au traitement
23 Ac anti-sla et pathogénie des HAI Interactions multifactorielles - Hépatocyte= cible du conflit immunologique -ASGPR présents à la surface des hépatocytes -Localisation membranaire admise pour CYP2D6 -LT intra hépatique: CD8+ - autoanticorps immunologie HAI génétique environnement génétique -Bactéries -Virus (HCV, HTLV1, herpes virus, rougeole) HLA HAI-1 -facteur de risque: DRB1*03 (formes sévères) DRB1*04 (formes modérées) -associations protectrices: DRB1*15 HAI-2 DRB1*03 (peu d études) CTLA-4 Polymorphisme du gène CTLA-4. activation lymphocytaire (pas de blocage du signal inhibiteur CD28-CTLA-4)
24 Ac anti-sla et pathogénie des HAI - Une courte séquence hydrophobe de la protéine SLA rendrait possible l insertion membranaire de cet Ag - % de T-régulateurs inversement corrélé au taux d Ac anti-sla La baisse du taux de T- reg favorise l apparition de ces Ac immunologie génétique HAI environnement génétique HLA -Ac anti-sla associés à l allèle de sévérité des HAI: DRB1* Possible mimétisme entre la protéine SLA et des agents microbiens a été évoqué mais n a pas pu être confirmé
25 CONCLUSION Bon marqueur diagnostic de l HAI-1 Particulièrement important chez les patients qui ne possèdent pas les marqueurs classiques Exceptionnellement présents dans d autres hépathopathies (HVC, hépatites médicamenteuses). Intérêt pronostic: reste à confirmer Ne semble pas être un marqueur de mauvais pronostic Pourrait permettre d évaluer le risque de rechute à l arrêt du traitement Et pour les patients transplantés, le risque de récidive de l HAI
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