Notice QuantiFERON -CMV ELISA 2 96

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1 Notice QuantiFERON -CMV ELISA 2 96 Test d interféron-gamma (IFN-γ) sur sang total mesurant les réponses contre les antigènes peptidiques du cytomégalovirus humain Utilisation prévue pour le diagnostic in vitro Cellestis, a QIAGEN Company Level 2, Office Tower 2, Chadstone Centre 1341 Dandenong Road, Chadstone, Victoria, 3148, Australie Téléphone : (Australie) , (Europe) QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse Hilden, ALLEMAGNE Rév FR

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3 Contenu Introduction 4 Principes du test 5 Temps requis pour effectuer le test 5 Réactifs et stockage 6 Matériel nécessaire mais non fourni 7 Stockage et manipulation 7 Avertissements et précautions 8 Prélèvement et manipulation des échantillons 10 Instructions d utilisation 12 Étape 1 - Incubation du sang et prélèvement du plasma 12 Phase 2 - Test QuantiFERON-CMV ELISA de l IFN-γ humain 12 Calculs et interprétation du test 16 Interprétation des résultats 17 Limitations 17 Valeurs attendues 18 Caractéristiques des performances 20 Performances cliniques 20 Seuil du test 20 Études cliniques 21 Spécificité 21 Sensibilité 21 Études validant l utilité clinique 22 Directives de consensus international en matière de prise en charge du cytomégalovirus dans la transplantation d un organe solide 24 Caractéristiques des performances du test 25 Informations techniques 26 Résultats indéterminés 26 Échantillons de plasma coagulé 26 Guide de dépannage 27 Bibliographie 29 Symboles 30 Coordonnées 30 Résumé de la procédure du test 31 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015 3

4 Utilisation prévue Le test QuantiFERON-CMV ELISA (QF-CMV) est un test in vitro utilisant un cocktail de peptides simulant certaines protéines du cytomégalovirus humain (CMV) pour stimuler les cellules de sang total héparinisé. La détection de l interféron-gamma (IFN-γ) par dosage d immunoabsorption à enzyme liée (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ou ELISA) est utilisée pour quantifier les réponses in vitro à ces antigènes peptidiques associés au contrôle immunitaire d une infection à CMV. La perte de la fonction immunitaire peut être associée au développement de la maladie à CMV. Le test QF-CMV est destiné à être utilisé pour surveiller le niveau d immunité anti-cmv chez un patient. Le test QF-CMV n est pas conçu pour déterminer une infection à CMV et ne doit pas être utilisé pour exclure une infection à CMV. Introduction Le CMV est un virus de type herpes affectant 50 à 85 % de la population adulte. Cette infection est une complication fréquente d une immunosuppression, en particulier après une transplantation, et peut contribuer de manière sensible à la morbidité et à la mortalité des receveurs de transplants. Les thérapies immunosuppressives actuelles utilisées pour prévenir le rejet d un organe transplanté ont des effets néfastes sur les lymphocytes T et les réponses immunitaires à médiation cellulaire (CMI), ce qui se traduit par une sensibilité accrue aux infections virales après transplantation. L importance de la fonction des lymphocytes T en matière de suppression de la réplication du CMV est également soulignée par le fait que les lymphocytes T de type CD8 + spécifiques au CMV (LTC) peuvent fournir une protection contre une pathogenèse liée au virus. Le dénombrement des LTC CD8 + spécifiques au CMV chez des patients immunodéprimés et la production d IFN-γ peuvent être prédictifs d un risque de développement d une maladie à CMV. La production d IFN-γ peut être une indication fonctionnelle pour identifier des LTC spécifiques au CMV. Le test QF-CMV est conçu pour détecter des réponses CMI aux antigènes peptidiques qui simulent des protéines du CMV. Les peptides du CMV sont sélectionnés de manière à cibler les lymphocytes T CD8 +, notamment les haplotypes HLA de classe I suivants : A1, A2, A3, A11, A23, A24, A26, B7, B8, B27, B35, B40, B41, B44, B51, B52, B57, B58, B60 et Cw6 (A30, B13), qui couvrent plus de 98 % de la population humaine. Les personnes infectées par le CMV produisent généralement dans leur sang des lymphocytes CD8 + qui reconnaissent ces antigènes. Ce processus de reconnaissance implique la génération et la sécrétion de la cytokine IFN-γ. La détection puis la quantification d IFN-γ constituent la base de ce test. 4 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

5 Principes du test Le test QF-CMV est effectué en 2 étapes. Dans un premier temps, on prélève du sang total dans chacun des tubes de prélèvement sanguin du test QF-CMV, à savoir un tube de contrôle Nil, un tube d antigène de CMV et un tube mitogène. Le tube mitogène est utilisé avec le test QF-CMV comme contrôle positif, en particulier en cas de doute sur le statut immunitaire de l individu. Il peut aussi servir de contrôle pour la bonne manipulation et la bonne incubation du sang. Les tubes doivent être incubés à 37 C dès que possible et dans les 16 heures suivant le prélèvement. Après une période d incubation de 16 à 24 heures, les tubes sont centrifugés, le plasma est retiré et la quantité d IFN-γ (UI/ml) est mesurée par QF-CMV ELISA. La quantité d IFN-γ contenue dans les échantillons de plasma des tubes d antigène du CMV et mitogène peut souvent se situer au-dessus des limites supérieures de la plupart des lecteurs de test ELISA, même dans le cas d individus présentant une immunosuppression modérée. Pour des résultats qualitatifs, il convient d utiliser les valeurs calculées pour le plasma non dilué. Pour des résultats quantitatifs, qui requièrent des valeurs réelles exprimées en UI/ml, les échantillons de plasma doivent être dilués dans le rapport 1/10 dans le diluant vert et analysés avec le test ELISA conjointement avec le plasma non dilué. Remarque : pour les échantillons dont les valeurs se situent dans la plage de valeurs du kit QF-CMV ELISA (c est-à-dire jusqu à 10 UI/ml), il faut utiliser le résultat obtenu avec l échantillon de plasma non dilué. Pour de telles concentrations d IFN-γ, les valeurs obtenues en utilisant le rapport de dilution 1/10 des échantillons de plasma peuvent s avérer inexactes. Un test est considéré comme réactif en matière de réponse d IFN-γ si la valeur obtenue en UI/ml pour le tube Antigène de CMV est notablement supérieure à la valeur d IFN-γ du tube Nil. L échantillon de plasma stimulé par le Mitogène sert de contrôle positif d IFN-γ pour chaque échantillon testé. Une réponse faible vis-à-vis du Mitogène constitue un résultat indéterminé si un échantillon de sang présente également une réponse non réactive pour les antigènes de CMV. Ce profil peut être obtenu en présence d un nombre insuffisant de lymphocytes, d une activité réduite des lymphocytes consécutive à une manipulation inadéquate des prélèvements, d un remplissage/mélange insuffisant du tube Mitogène ou d une incapacité des lymphocytes d un patient de produire de l IFN-γ, comme pour les patients récemment transplantés. L échantillon Nil permet un ajustement vis-à-vis du bruit de fond ou d interactions non spécifiques de l IFN-γ dans les échantillons de sang. Le niveau d IFN-γ du tube Nil est retranché des niveaux d IFN-γ déterminés pour les tubes Antigène de CMV et Mitogène (voir le chapitre «Interprétation des résultats», page 17 de cette notice pour un aperçu sur la manière dont sont interprétés les résultats du test QF-CMV). Temps requis pour effectuer le test Le temps requis pour effectuer le test QF-CMV est estimé ci-dessous ; le temps requis pour tester plusieurs échantillons en lots est aussi indiqué : Incubation à 37 C des tubes de sang : ELISA : 16 à 24 heures Environ 3 heures pour 1 microplaque ELISA Moins d 1 heure de travail Ajouter 10 à 15 minutes pour chaque microplaque supplémentaire Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015 5

6 Réactifs et stockage Blood Collection Tubes (Single Patient Pack) (tubes de prélèvement sanguin (pack pour patient unique)) N de référence Nombre de préparations 1 QuantiFERON Nil Control (contrôle QuantiFERON Nil, bouchon gris) QuantiFERON CMV Antigen (antigène de QuantiFERON CMV, bouchon bleu) QuantiFERON Mitogen Control (contrôle QuantiFERON Mitogène, bouchon violet) 1 tube 1 tube 1 tube Notice des tubes de prélèvement sanguin QF-CMV 1 QuantiFERON-CMV ELISA Components (composants du kit QuantiFERON-CMV ELISA) Kit 2 plaques ELISA N de référence Bandelettes pour microplaques (12 8 puits) enduites d anticorps monoclonaux IFN-γ murins anti-humains Human IFN-γ Standard, lyophilized (standard humain IFN-γ, lyophilisé ; contient de l IFN-γ humain recombinant, de la caséine bovine, du thimérosal 0,01 % m/v) Green Diluent (diluant vert ; contient de la caséine bovine, du sérum normal de souris, du thimérosal 0,01 % m/v) Conjugate 100 Concentrate, lyophilized (concentré de conjugué 100, lyophilisé ; IFN-γ HRP murin anti-humain, contient du thimérosal 0,01 % m/v) Wash Buffer 20 Concentrate (concentré de tampon de lavage 20 ; ph 7,2, contient du ProClin 300 0,05 % v/v) Enzyme Substrate Solution (solution de substrat enzymatique ; contient du H 2O 2, 3,3', 5,5' tétraméthylbenzidine) Enzyme Stopping Solution (solution de blocage d enzyme ; contient 0,5M H 2SO 4) 2 jeux de bandelettes pour microplaques 12 8 puits 1 flacon (8 UI/ml si reconstitué) 1 30 ml 1 0,3 ml ml 1 30 ml 1 15 ml Notice QF-CMV ELISA 1 * Contient de l acide sulfurique. Voir page 8 pour les précautions d emploi. 6 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

7 Matériel nécessaire mais non fourni Incubateur à 37 C ; CO 2 non requis Pipettes à volume variable calibrées de 10 µl à µl avec embouts jetables Pipettes multicanales calibrées de 50 µl et 100 µl avec embouts jetables Agitateur de microplaque Eau déionisée ou distillée, 2 litres Laveur de microplaque (laveur automatique recommandé) Laveur de microplaque équipé d un filtre de 450 nm et d un filtre de référence de 620 à 650 nm Stockage et manipulation Tubes de prélèvement sanguin Stocker les tubes de prélèvement sanguin QF-CMV à une température comprise entre 4 et 25 C. Les tubes de prélèvement sanguin QF-CMV doivent être à une température comprise entre 17 et 25 C au moment du remplissage. La durée de vie des tubes de prélèvement sanguin QF-CMV est de 15 mois au maximum à partir de la date de fabrication, à condition de les stocker à une température comprise entre 4 et 25 C. Réactifs de kit ELISA Stocker le kit à une température comprise entre 2 et 8 C. Toujours protéger la solution de substrat enzymatique de la lumière directe du soleil. Réactifs reconstitués et inutilisés Pour des instructions sur la manière de reconstituer les réactifs, veuillez vous référer à la section «Instructions d utilisation - phase 2» (étapes 3 et 5 des pages 12 et 14). Le standard IFN-γ humain reconstitué peut être conservé jusqu à 3 mois s il est stocké à une température comprise entre 2 et 8 C. Noter la date à laquelle le standard IFN-γ humain a été reconstitué. Une fois reconstitué, le concentré de conjugué 100 inutilisé doit être stocké à une température comprise entre 2 et 8 C et utilisé dans les 3 mois. Noter la date à laquelle le conjugué a été reconstitué. Le conjugué concentré prêt à l emploi doit être utilisé dans les 6 heures suivant sa préparation. Le tampon de lavage concentré prêt à l emploi peut être stocké à température ambiante (22 ± 5 C) jusqu à 2 semaines. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015 7

8 Avertissements et précautions Utilisation prévue pour le diagnostic in vitro. Lors de la manipulation des produits chimiques, toujours porter une blouse de laboratoire, des gants jetables et des lunettes de protection adéquats. Pour plus d informations, consulter les fiches de données de sécurité (FDS) appropriées. Celles-ci sont disponibles en ligne dans un format PDF pratique et compact sur le site répertoriant les FDS imprimables pour chaque kit QIAGEN et chaque composant. AVERTISSEMENT : le sang humain doit être manipulé comme s il était potentiellement infectieux. Observer les directives correspondantes de manipulation du sang. Les mentions de danger et conseils de prudence suivants s appliquent aux composants du QuantiFERON-CMV ELISA. Mentions de danger QuantiFERON Conjugate (Conjugué QuantiFERON) Contient de l acide borique. Danger! Peut nuire à la fertilité ou au fœtus. Éliminer le contenu/récipient dans une usine de traitement des déchets agréée. En cas d exposition prouvée ou suspectée : consulter un médecin. Se procurer les instructions avant utilisation. Garder sous clef. Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. QuantiFERON Enzyme Stopping Solution (Solution de blocage d enzyme QuantiFERON) Contient de l acide sulfurique. Danger! Provoque des brûlures de la peau et des lésions oculaires graves. Peut être corrosif pour les métaux. Éliminer le contenu/récipient dans une usine de traitement des déchets agréée. EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l eau pendant plusieurs minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer. EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU (ou les cheveux) : enlever immédiatement les vêtements contaminés. Rincer la peau à l eau/se doucher. Appeler immédiatement un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin. Garder sous clef. Porter des gants de protection/ des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. QuantiFERON Enzyme Substrate Solution (Solution de substrat enzymatique QuantiFERON) Attention! Provoque une légère irritation cutanée. En cas d irritation cutanée : consulter un médecin. 8 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

9 QuantiFERON Green Diluent (Diluant vert QuantiFERON) Contient du trisodium 5-hydroxy-1-(4-sulphophényl)-4-(4-sulphophénylazo)pyrazole- 3-carboxylate. Attention! Peut provoquer une allergie cutanée. Éliminer le contenu/ récipient dans une usine de traitement des déchets agréée. Enlever les vêtements contaminés et les laver avant réutilisation. En cas d irritation ou d éruption cutanée : consulter un médecin. Porter des gants de protection/des vêtements de protection/ un équipement de protection des yeux/du visage. QuantiFERON IFN-γ Standard (Standard IFN-γ QuantiFERON) Contient de l acide borique. Danger! Peut nuire à la fertilité ou au fœtus. Éliminer le contenu/récipient dans une usine de traitement des déchets agréée. En cas d exposition prouvée ou suspectée : consulter un médecin. Se procurer les instructions avant utilisation. Garder sous clef. Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. QuantiFERON Wash Buffer 20 Concentrate (Concentré de tampon de lavage 20 QuantiFERON), nouveau Contient ProClin 300. Attention! Peut provoquer une allergie cutanée. Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. Informations de sécurité Autres informations Le non-respect des consignes de la notice du QF-CMV peut engendrer des résultats erronés. Lire attentivement les instructions avant toute utilisation. Ne pas utiliser le kit si un flacon de réactif présente des signes d endommagement ou de fuite avant son utilisation. Ne pas mélanger ou utiliser les bandelettes pour microplaque, le standard IFN-γ humain, le diluant vert ou le concentré conjugué 100 de différents lots de kit QF-CMV. Les autres réactifs (concentré de tampon de lavage 20, solution de substrat enzymatique et solution de blocage d enzyme) peuvent être interchangés entre les kits si les réactifs ne sont pas périmés et que les détails du lot sont enregistrés. Éliminer les réactifs inutilisés et échantillons biologiques conformément aux réglementations locales, régionales et nationales. Ne pas utiliser les tubes de prélèvement sanguin du test QF-CMV ou des kits QF-CMV ELISA après la date d expiration. S assurer que l équipement de laboratoire tel que les laveurs et lecteurs de microplaque ont été calibrés/validés pour utilisation. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015 9

10 Prélèvement et manipulation des échantillons QF-CMV utilise les tubes de prélèvement sanguin suivants : 1. Contrôle Nil (bouchon gris) 2. Antigène de CMV (bouchon bleu) 3. Contrôle Mitogène (bouchon violet) Les antigènes ont été séchés sur la paroi interne des tubes de prélèvement sanguin ; il est donc essentiel que le contenu des tubes soit soigneusement mélangé avec le sang. Les tubes doivent être transférés dans un incubateur à 37 C dès que possible et dans les 16 heures suivant le prélèvement. Pour des résultats optimaux, respecter les procédures suivantes : 1. Pour chaque sujet, prélever 1 ml de sang par ponction veineuse directement dans chaque tube de prélèvement sanguin QF-CMV. Cette procédure doit être effectuée par un phlébotomiste expérimenté. Les tubes de prélèvement sanguin QF-CMV peuvent être utilisés à une altitude allant jusqu à 810 mètres. En cas d utilisation des tubes de prélèvement sanguin QF-CMV à une altitude supérieure à 810 mètres ou en cas de faible volume de sang, il est possible de prélever le sang à l aide d une seringue avant d en transférer immédiatement 1 ml dans chacun des 3 tubes. Pour des raisons de sécurité, la meilleure méthode consiste à retirer l aiguille de la seringue en respectant les procédures de sécurité adéquates, à retirer les bouchons des 3 tubes QF-CMV et à ajouter 1 ml de sang dans chacun des tubes (jusqu à la marque noire située sur le côté de l étiquette du tube). Replacer correctement les bouchons des tubes et mélanger comme décrit ci-dessous. Étant donné que le prélèvement sanguin pour des tubes de 1 ml est relativement lent, conserver le tube sur l aiguille pendant 2 à 3 secondes une fois qu il semble s être rempli à la hauteur souhaitée afin de s assurer que le bon volume est prélevé. La marque noire située sur le côté des tubes indique un volume de remplissage à 1 ml. Les tubes de prélèvement sanguin QF-CMV ont été validés pour des volumes allant de 0,8 à 1,2 ml. Si le niveau de sang d un tube ne se rapproche pas de la ligne d indication, il est recommandé d obtenir un nouvel échantillon sanguin. Si une aiguille «papillon» est utilisée pour le prélèvement sanguin, un tube de purge doit être utilisé pour que la tubulure soit remplie de sang avant que les tubes de prélèvement sanguin QF-CMV ne soient employés. Le sang peut aussi être prélevé dans un seul tube de prélèvement sanguin générique contenant de l héparine de lithium comme anticoagulant avant d être transféré vers les tubes QF-CMV. Utiliser uniquement l héparine de lithium comme anticoagulant car les autres anticoagulants peuvent interférer avec le test. Remplir un tube de prélèvement sanguin (volume minimal 5 ml) et mélanger doucement en retournant le tube plusieurs fois pour dissoudre l héparine. Le sang doit rester à température ambiante (22 ± 5 C) avant d être transféré dans les tubes QF-CMV pour incubation, qui doit impérativement être lancée dans les 16 heures suivant le prélèvement sanguin. 10 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

11 2. Immédiatement après avoir rempli les tubes QF-CMV, les secouer dix (10) fois suffisamment fort pour s assurer que toute la paroi interne du tube est tapissée de sang, et ce, afin de dissoudre les antigènes présents sur les parois du tube. Les tubes doivent être à une température de 17 à 25 C au moment du remplissage. Le secouement trop énergique des tubes peut provoquer une perturbation du gel et peut entraîner des résultats aberrants. Si le sang a été prélevé dans un tube d héparine de lithium, les échantillons doivent être mélangés de manière homogène avant d être répartis dans les tubes QF-CMV. S assurer que le sang est bien mélangé en retournant doucement le tube juste avant de répartir les échantillons. Déposer des aliquots d 1 ml (un par tube QF-CMV) dans les tubes correspondants de valeur zéro, antigène CMV et mitogène. La meilleure méthode, à réaliser dans des conditions d asepsie en respectant les procédures de sécurité adéquates, consiste à retirer les bouchons des trois tubes QF-CMV et à ajouter 1 ml de sang dans chacun des tubes (jusqu à la marque noire située sur le côté de l étiquette du tube). Replacer correctement les bouchons des tubes et mélanger comme décrit ci-dessus. 3. Étiqueter correctement les tubes. Veiller à ce que chaque tube (valeur zéro, Antigène de CMV, Mitogène) soit identifiable par son étiquette ou par d autres moyens. 4. Après avoir été remplis, secoués et étiquetés, les tubes doivent être transférés dans un incubateur à 37 ± 1 C dès que possible et dans les 16 heures suivant le prélèvement. Avant l incubation, maintenir les tubes à température ambiante (22 ± 5 C). Ne pas réfrigérer ou congeler les échantillons sanguins. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

12 Instructions d utilisation Étape 1 - Incubation du sang et prélèvement du plasma 1. Si le sang n est pas incubé immédiatement après avoir été prélevé, effectuer un nouveau mélange des tubes en les retournant 10 fois avant l incubation. 2. Incuber les tubes DEBOUT à 37 C pendant 16 à 24 heures. L incubateur ne nécessite pas de CO 2 ou d humidification. 3. Après incubation, les tubes de prélèvement sanguin peuvent être maintenus à une température comprise entre 4 et 27 C pendant 3 jours maximum avant l étape suivante. 4. Après l incubation des tubes à 37 C, le prélèvement du plasma est facilité si les tubes sont centrifugés pendant 15 minutes de à FCR (g). Le module de gel séparera les cellules du plasma. Si ce n est pas le cas, les tubes doivent être recentrifugés à une vitesse plus élevée. Il est possible de prélever le plasma sans centrifugation, mais il faudra faire particulièrement attention à le retirer sans perturber les cellules. 5. Après la centrifugation, éviter le pipetage répété ou le mélange du plasma par d autres moyens avant de le prélever. Prendre garde à ne pas perturber la matière sur la surface du gel, quelle que soit l étape. Les échantillons de plasma doivent être prélevés uniquement à l aide d une pipette. Les échantillons de plasma peuvent être chargés directement depuis les tubes de prélèvement sanguin centrifugés vers la microplaque QF-CMV ELISA, y compris lorsque des stations de travail ELISA automatiques sont utilisées. Les échantillons de plasma peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8 C jusqu à 28 jours ou, s ils ont été collectés, à une température inférieure à -20 C (de préférence inférieure à -70 C) sur de longues périodes dans des tubes ou des récipients de stockage de plasma. Pour des échantillons de test corrects, prélever au moins 150 µl de plasma. Phase 2 - Test QuantiFERON-CMV ELISA de l IFN-γ humain 1. Tous les échantillons de plasma et réactifs, sauf le concentré de conjugué 100, doivent être amenés à température ambiante (22 ± 5 C) avant d être utilisés. Attendre au moins 60 minutes pour l équilibration. 2. Retirer du cadre les bandelettes superflues, les resceller dans la poche en aluminium et les replacer au réfrigérateur pour les stocker jusqu à leur utilisation. Prévoir au moins une bandelette pour les standards QF-CMV ELISA et suffisamment de bandelettes pour le nombre de patients testés. Après utilisation, conserver le cadre et le couvercle pour un emploi ultérieur avec les bandelettes restantes. 3. Reconstituer le standard IFN-γ lyophilisé avec le volume d eau déionisée ou distillée indiqué sur l étiquette du flacon du standard. Mélanger délicatement afin d éviter la formation de mousse et pour garantir une resolubilisation complète. La reconstitution du standard au volume indiqué produira une solution à une concentration de 8,0 UI/ml. Remarque : le volume de reconstitution du standard IFN-γ humain (standard du kit) diffère selon les lots. Utiliser le standard du kit reconstitué pour produire une série de dilution à 1 pour 4 de l IFN-γ dans le diluant vert (GD) du kit (voir figure 1). Le S1 (standard 1) contient 4,0 UI/ml, le S2 (standard 2) contient 1,0 UI/ml, le S3 (standard 3) contient 0,25 UI/ml et le S4 (standard 4) contient 0 UI/ml (GD seul). Les standards doivent être testés au moins en duplicats. 12 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

13 Procédure recommandée pour les standards dupliqués a. Étiqueter les 4 tubes «S1», «S2», «S3», «S4». b. Ajouter 150 µl de GD à S1, S2, S3, S4. c. Ajouter 150 µl du standard du kit à S1 et mélanger soigneusement. d. Transférer 50 µl de S1 à S2 et mélanger soigneusement. e. Transférer 50 µl de S2 à S3 et mélanger soigneusement. f. Le GD seul sert de standard zéro (S4). 150 µl 50 µl 50 µl Standard de kit reconstitué Standard 1 4,0 UI/ml Standard 2 1,0 UI/ml Standard 3 0,25 UI/ml Standard 4 0 UI/ml (diluant vert) Figure 1. Préparation d une courbe de standard par dilution en série. Préparer des dilutions fraîches du standard de kit pour chaque session ELISA. 4. Reconstituer le concentré de conjugué 100 lyophilisé avec 0,3 ml d eau déionisée ou distillée. Mélanger doucement pour réduire la formation de mousse et pour garantir une solubilisation complète du conjugué. Le conjugué concentré prêt à l emploi est préparé en diluant la quantité requise de concentré de conjugué 100 reconstitué dans le diluant vert (voir tableau 1 : Préparation du conjugué concentré prêt à l emploi). Mélanger soigneusement mais doucement pour éviter la formation de mousse. Ramener tout concentré de conjugué 100 non utilisé à une température comprise entre 2 et 8 C immédiatement après emploi. Utiliser uniquement du diluant vert. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

14 Tableau 1. Préparation du conjugué concentré prêt à l emploi Nombre de bandelettes Volume du concentré de conjugué 100 Volume de diluant vert 2 10 µl 1,0 ml 3 15 µl 1,5 ml 4 20 µl 2,0 ml 5 25 µl 2,5 ml 6 30 µl 3,0 ml 7 35 µl 3,5 ml 8 40 µl 4,0 ml 9 45 µl 4,5 ml µl 5,0 ml µl 5,5 ml µl 6,0 ml 5. Pour les échantillons de plasma prélevés dans les tubes de prélèvement sanguins puis congelés ou stockés pendant plus de 24 heures avant le test, mélanger soigneusement avant l ajout au puits ELISA. Si les échantillons de plasma sont ajoutés directement depuis les tubes QF-CMV centrifugés, tout mélange du plasma doit être évité. 6. Si des résultats quantitatifs sont requis, diluer également les plasmas CMV et Mitogène dans le rapport 1/10 avec le diluant vert (10 µl de plasma homogénéisé à 90 µl de GD). Le plasma Nil ne doit pas être dilué. Il est recommandé de tester en parallèle les échantillons suivants : Nil, Antigène de CMV, Mitogène, Antigène de CMV (1/10), Mitogène (1/10) Toutefois, les options d échantillon de patients suivants sont également traitées par le logiciel d analyse QuantiFERON-CMV : Nil, Antigène de CMV, Mitogène Nil, Antigène de CMV (1/10), Mitogène (1/10) Nil, Antigène de CMV, Mitogène, Antigène de CMV (1/10) Nil, Antigène de CMV (1/10), Mitogène 7. Ajouter 50 µl du conjugué concentré prêt à l emploi fraîchement préparé dans les puits ELISA requis à l aide d une pipette multicanale. 8. Ajouter 50 µl d échantillons de plasma de test dans les puits appropriés à l aide d une pipette multicanale. Enfin, ajouter 50 µl à chaque standard 1 à Mélanger le conjugué et les échantillons/standards de plasma soigneusement en utilisant un agitateur de microplaque pendant 1 minute. 10. Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber à température ambiante (22 ± 5 C) pendant 120 ± 5 minutes. Les microplaques ne doivent pas être exposées à la lumière directe du soleil pendant l incubation. 14 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

15 11. Au cours de l incubation, diluer une mesure du concentré du tampon de lavage 20 avec 19 mesures d eau déionisée ou distillée et mélanger soigneusement. Une quantité suffisante de concentré de tampon de lavage 20 est fournie pour préparer 2 litres de tampon de lavage concentré prêt à l emploi. Laver les puits avec 400 µl de tampon de lavage concentré prêt à l emploi pendant au moins 6 cycles. Un laveur de microplaque automatique est recommandé. Il est essentiel de procéder soigneusement au lavage avant d exécuter le test. Veiller à ce que chaque puits soit complètement rempli de tampon de lavage jusqu en haut pour chaque cycle de lavage. Une période de trempage d au moins 5 secondes est recommandée entre chaque cycle. Un désinfectant de laboratoire standard doit être ajouté au réservoir d effluent avant de suivre les procédures établies pour la décontamination de matériel potentiellement infectieux. 12. Placer les microplaques face vers le bas sur une serviette absorbante sans peluche pour éliminer tout résidu de tampon de lavage. Ajouter 100 µl de solution de substrat d enzyme dans chaque puits et mélanger soigneusement à l aide d un agitateur de microplaque. 13. Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber à température ambiante (22 ± 5 C) pendant 30 minutes. Les microplaques ne doivent pas être exposées à la lumière directe du soleil pendant l incubation. 14. Après les 30 minutes d incubation, ajouter 50 µl de solution de blocage d enzyme à chaque puits et mélanger. La solution de blocage d enzyme doit être ajoutée aux puits dans le même ordre et à environ la même vitesse que pour le substrat à l étape Mesurer la densité optique (DO) de chaque puits dans les 5 minutes de blocage de la réaction à l aide d un lecteur de microplaque équipé d un filtre 450 nm et d un filtre de référence de 620 à 650 nm. Les valeurs DO sont utilisées pour calculer les résultats. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

16 Calculs et interprétation du test Le logiciel d analyse QuantiFERON-CMV, permettant l analyse des données brutes et le calcul des résultats, est disponible auprès de QIAGEN à l adresse Le logiciel effectue une évaluation de contrôle qualité du test, génère une courbe de standard et fournit un résultat de test pour chaque sujet, comme détaillé dans la section Interprétation des résultats. Le logiciel d analyse rapporte la dilution la plus faible générant un résultat compris dans l intervalle du QF-CMV ELISA, en prenant en compte le facteur de dilution. En alternative à l utilisation du logiciel d analyse QF-CMV, les résultats peuvent aussi être déterminés selon la méthode suivante. Génération de la courbe de standard (si le logiciel d analyse QF-CMV n est pas utilisé) Déterminer les valeurs DO moyennes des réplicats du standard du kit sur chaque microplaque. Construire une courbe de standard log (e)-log (e) en traçant le log (e) de la DO moyenne (axe y) par rapport au log (e) de la concentration IFN-γ des standards en UI/ml (axe x), en omettant le standard zéro dans ces calculs. Calculer la ligne de meilleur ajustement pour la courbe de standard par analyse de régression. Utiliser la courbe de standard pour déterminer la concentration IFN-γ (UI/ml) de chacun des échantillons de plasma de test à l aide de la valeur DO de chaque échantillon. Ces calculs peuvent être effectués à l aide des packs logiciels disponibles avec les lecteurs de microplaque ainsi qu avec les tableurs standards ou logiciels statistiques (comme Microsoft Excel ). Il est recommandé d utiliser ces logiciels pour calculer l analyse de régression, le coefficient de variation (%CV) pour les standards ainsi que le coefficient de corrélation (r) de la courbe de standard. Le résultat rapporté doit provenir de la dilution la plus faible générant un résultat compris dans l intervalle du QF-CMV ELISA, en prenant en compte le facteur de dilution lorsque cela est possible. Contrôle qualité du test L exactitude des résultats du test dépend de l exactitude de la génération de la courbe de standard. Ainsi, il convient d examiner les résultats dérivés des standards avant d interpréter les résultats des échantillons du test. Pour que le dosage ELISA soit valide : La valeur DO moyenne du standard 1 doit être 0,600. Le %CV des valeurs DO des réplicats du standard 1 et du standard 2 doit être < 15 %. Les valeurs DO des réplicats pour les standards 3 et 4 ne doivent pas varier de plus de 0,040 unité de densité optique par rapport à leur moyenne. Le coefficient de corrélation (r) calculé à partir des valeurs d absorbance moyennes des standards doit être 0,98. Le logiciel d analyse QF-CMV calcule et rapporte ces paramètres de contrôle qualité. Si les critères ci-dessus ne sont pas respectés, l analyse est invalide et doit être répétée. La valeur DO moyenne du standard zéro (diluant vert) doit être 0,150. Si la valeur DO moyenne est > 0,150, la procédure de lavage de microplaque doit être examinée. 16 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

17 Interprétation des résultats Les résultats QuantiFERON-CMV sont interprétés selon les critères suivants : CMV moins valeur zéro (UI/ml)* Mitogène moins valeur zéro (UI/ml) Résultat du test QF-CMV Rapport/interprétation < 0,2 0,5 Non réactif Réponse immunitaire aux antigènes de CMV NON détectée 0,2 Tous Réactif Réponse immunitaire aux antigènes de CMV détectée < 0,2 < 0,5 Indéterminé Impossibilité de détection de réponse immunitaire aux antigènes de CMV et au Mitogène * Les réponses d IFN-γ au contrôle positif pour l Antigène de CMV et le Mitogène peuvent souvent sortir de la plage de valeurs du lecteur de microplaque. Ce cas de figure n a aucun impact sur la qualité des résultats. Voir la section «Dépannage» pour les causes possibles. Limitations Les résultats du test QuantiFERON-CMV doivent être utilisés conjointement avec les antécédents épidémiologiques de chaque patient, son statut médical actuel et d autres évaluations diagnostiques. Les résultats non fiables ou indéterminés peuvent survenir dans les cas suivants : Déviations par rapport à la procédure décrite dans la notice QuantiFERON-CMV ELISA. Niveaux excessifs d IFN-γ dans le tube de contrôle. Plus de 16 heures entre le prélèvement de l échantillon sanguin et l incubation à 37 C. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

18 Valeurs attendues Les valeurs d IFN-γ attendues ont été obtenues en testant le kit QuantiFERON-CMV sur 591 échantillons prélevés sur des individus en bonne santé, dont 343 étaient séropositifs et 248 étaient séronégatifs (IgG anti- CMV). Le statut sérologique anti-cmv était inconnu au moment du test QF-CMV. Parmi les 248 échantillons issus de sujets séronégatifs au CMV, 100 % (248/248) des échantillons testés étaient non réactifs au test QF-CMV ELISA, présentant des réponses d IFN-γ < 0,2 UI/ml dans le tube Antigène du CMV (moins la valeur Nil). La répartition des réponses IFN-γ dans le tube Antigène du CMV (moins la valeur Nil) pour les 343 sujets séropositifs au CMV est indiquée (figure 2). Nombre d échantillons IFN-γ (UI/ml) Figure 2. Répartition des réponses IFN-γ au QF-CMV (moins la valeur Nil) chez les sujets séropositifs en bonne santé (n = 343). La répartition des réponses IFN-γ dans le tube Mitogène (moins la valeur Nil) a été déterminée sur la base de 733 échantillons prélevés sur des adultes en bonne santé à l aide du test QF-CMV ELISA, indépendamment de la sérologie à base d IgG anti-cmv (figure 3). Un résultat avec le tube Mitogène (moins la valeur Nil) inférieur à 0,5 UI/ml indique que le test a échoué ou que l individu présente un état immunocompromis. Dans une population en bonne santé, 2 résultats seulement sur 733 entraient dans cette catégorie. 18 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

19 Nombre d échantillons IFN-γ (UI/ml) Figure 3. Répartition des réponses IFN-γ pour le Mitogène (moins la valeur Nil) chez les sujets en bonne santé (n = 733). La répartition des réponses IFN-γ aux tubes Nil a été déterminée avec échantillons de plasma prélevés sur des sujets en bonne santé à l aide du test QF-CMV ELISA, indépendamment de la sérologie à base d IgG anti-cmv (figure 4). Population (%) IFN-γ (UI/ml) Figure 4. Distribution des réponses IFN-γ au tube Nil chez des individus en bonne santé (n = 1 020) exprimée en pourcentage de la population. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

20 Caractéristiques des performances Performances cliniques Une valeur seuil de test, destinée à déceler une exposition antérieure au CMV en utilisant le test QF-CMV, a été établie après une analyse des résultats obtenus sur un groupe d individus en bonne santé (n = 223), où l on a comparé les résultats du test QF-CMV aux résultats sérologiques à base d IgG anti-cmv. Une analyse de la courbe ROC a déterminé qu une valeur seuil de test de 0,04 UI/ml (après soustraction de la valeur Nil) offrait des valeurs prédictives positives et négatives optimales pour le test QF-CMV (aire sous la courbe = 0,9679 [IC à 95 % = 0,9442 à 0,9915, p < 0,0001]), et représentait ainsi le seuil auquel ce test était le plus efficace pour son usage prévu sur une population en bonne santé. Les performances du test QF-CMV ont été comparées à celles du test sérologique à base d IgG anti-cmv SeraQuest (Quest International). Le test QF-CMV révèle 95 % (294 individus sur 310) de conformité avec le test sérologique à base d IgG anti-cmv chez des individus en bonne santé, aucun des 149 donneurs séronégatifs n affichant la moindre réactivité au test QF-CMV, et 145 donneurs séropositifs sur 161 présentant une réponse réactive au test QF-CMV. La concordance positive globale était de 90 % et la valeur de concordance négative de 100 %. Le niveau de concordance chez les individus en bonne santé entre les réponses au test QF-CMV et le statut sérologique à base d IgG anti-cmv est indiqué dans le tableau 2. Tableau 2. Concordance entre le test QuantiFERON-CMV et le test sérologique à base d IgG anti-cmv chez des individus sains. Sérologie du CMV Positif Négatif Total Réactif QuantiFERON-CMV (46,8 %) Non réactif (53,2 %) Total 161 (51,9 %) 149 (48,1 %) 310 (100 %) Seuil du test Le seuil de test clinique recommandé pour ce dosage est de 0,2 UI/ml dans le tube Antigène de CMV (moins la valeur Nil), bien que des seuils différents puissent être validés pour des contextes cliniques différents. 20 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

21 Études cliniques En l absence de normes définitives permettant de confirmer ou d exclure le diagnostic d une infection à cytomégalovirus, une estimation de la sensibilité et de la spécificité du test QF-CMV ne peut pas être réalisée dans la pratique. La spécificité et la sensibilité du test QF-CMV ont été estimées en évaluant le niveau de concordance entre les réponses au test QF-CMV et le statut sérologique à base d IgG anti-cmv chez des individus en bonne santé. La spécificité du test QF-CMV a été estimée en évaluant les résultats faussement positifs (réponses réactives avec le test QF-CMV) dans des échantillons de donneurs sains sans preuve d une exposition antérieure au CMV (individus séronégatifs au test à base d IgG anti-cmv). La sensibilité a été estimée en évaluant la réactivité au test QF-CMV d échantillons prélevés sur des donneurs en bonne santé présentant une preuve d exposition antérieure au CMV (individus séropositifs au test à base d IgG anti-cmv). Le test QF-CMV utilise un grand nombre d épitopes spécifiques au CMV issus de diverses protéines du CMV, offrant ainsi une large couverture de la population présentant différents haplotypes de HLA de classe I (environ 98 % de la population). Dans la mesure où les haplotypes de HLA des sujets testés pour la sérologie du CMV n étaient pas connus, il était prévu qu un petit pourcentage d individus de sérologie positive ne réagissent pas dans les tubes du test QF-CMV. Spécificité Dans une étude réalisée sur 591 échantillons prélevés sur des individus en bonne santé, aucun faux positif n a été détecté parmi les résultats de test QF-CMV chez les individus séronégatifs au test sérologique à base d IgG anti-cmv, avec 248 échantillons sur 248 non réactifs au test QF-CMV ELISA et négatifs au test sérologique à base d IgG anti-cmv. Les résultats obtenus suite au test QF-CMV et au test sérologique à base d IgG anti- CMV ont donc montré une concordance de 100 %. Dans toutes les autres évaluations de spécificité réalisées sur des receveurs transplantés avec des organes solides (1, 3, 4, 8, 12, 14-16), des receveurs transplantés avec des cellules souches hématopoïétiques (7, 13) et des patients infectés par le VIH (2), le niveau de concordance entre le test QF-CMV et le test sérologique à base d IgG anti-cmv était également de 100 %. Sensibilité Dans une étude réalisée à partir de 343 échantillons prélevés sur des individus en bonne santé séropositifs au test à base d IgG anti-cmv, le niveau de concordance entre les réponses au test QF-CMV et les résultats sérologiques à base d IgG anti-cmv était de 80,5 % avec 275 échantillons sur 343 réactifs au test QF-CMV et positifs au test sérologique à base d IgG anti-cmv. L écart observé peut provenir de résultats sérologiques faussement positifs pour le CMV ou de l absence de types de HLA réactifs chez les individus testés. Les niveaux de concordance d évaluation de la sensibilité réalisée sur des receveurs transplantés avec des organes solides (1, 3, 4, 8, 12, 14-16), des receveurs transplantés avec des cellules souches hématopoïétiques (7, 13) et des patients infectés par le VIH (2) se sont avérés plus faibles. Cela peut provenir de résultats sérologiques faussement positifs pour le CMV, de l absence de types de HLA réactifs chez les individus testés ou de l absence de lymphocytes T réactifs chez ces patients en raison de leur immunosuppression. Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

22 Études validant l utilité clinique L usage prévu du test sérologique à base d IgG anti-cmv comme du test QF-CMV est de permettre la détection de l immunité contre le CMV. Dans un contexte de transplantation, la sérologie du CMV est largement utilisée avant la transplantation pour établir les risques de complications liées au CMV qui sont encourus par un receveur après la transplantation, mais ne présente elle-même qu une valeur limitée après la transplantation. Le test QF-CMV peut également être utilisé chez des receveurs transplantés pour évaluer le niveau de l immunité au CMV chez les patients présentant un risque de développer une infection symptomatique au CMV et/ou une maladie due à l immunosuppression (6, 9-11). Un certain nombre d études cliniques publiées menées sur diverses cohortes de patients transplantés ont démontré l utilité du test QuantiFERON-CMV (1-5, 7, 8, 11-16). Dans le cadre d une vaste étude réalisée sur 108 receveurs transplantés avec des organes solides (4), les patients présentant un résultat de réactivité au test QF-CMV à la fin de la prophylaxie anti-cmv affichaient un taux notablement plus faible de développement ultérieur d une maladie à CMV (3,3 % ou 1/30 ; avec un seuil de test de 0,2 UI/ml) par rapport aux patients présentant un résultat non réactif au test QF-CMV (21,8 % ou 17/78, p = 0,044) (figure 5). Incidence de survenue d une maladie à CMV (%) Incidence de survenue d une maladie à CMV (%) Non réactif (n = 70) Réactif (n = 38) p = 0,038 Fin de la prophylaxie de la CMI (IFN-γ UI/ml) Seuil de référence de 0,1 UI/ml Non réactif (n = 78) Réactif (n = 30) p = 0,044 Fin de la prophylaxie de la CMI (IFN-γ UI/ml) Seuil de référence de 0,2 UI/ml A B Figure 5. Taux de survenue tardive d une maladie à CMV chez des patients présentant un résultat de réactivité au test QuantiFERON-CMV comparé à ceux présentant un résultat non réactif au test QuantiFERON-CMV à la fin de la prophylaxie. Données reproduites de Kumar et al (4). En outre, les receveurs séronégatifs pour le CMV transplantés avec un organe provenant d un donneur séropositif pour le CMV (D+R-) présentant un résultat de réactivité au test QF-CMV à la fin de la prophylaxie étaient moins fréquemment affectés d une maladie à CMV, et ce, sur des périodes de temps plus longues, ce qui indique que le test QF-CMV peut être utilisé pour identifier les patients présentant un risque de survenue tardive d une maladie à CMV. Cette étude révèle également que dans cette cohorte de patients transplantés présentant le risque le plus élevé de développement d une maladie à CMV, un résultat de réactivité après la prophylaxie est associé à de meilleures chances de ne pas contracter ultérieurement une maladie à CMV. Dans une étude effectuée sur 37 patients transplantés avec un organe solide (12), l évaluation des réponses de lymphocytes T CD8 + spécifiques au CMV avec le test QF-CMV renforce la prédiction d une clairance virale spontanée par rapport à la progression d une maladie à CMV, après des augmentations de la virémie à CMV. Dans cette étude, 24 patients sur 26 (92,3 %) présentant un résultat de réactivité au test QF-CMV 22 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015

23 (avec un seuil de test 0,2 UI/ml d IFN-γ) affichaient une clairance spontanée du CMV, tandis que seulement 5 patients sur 11 (45,5 %) ayant un résultat non réactif au test QF-CMV présentaient le même bilan. Une étude sur 67 patients ayant reçu une transplantation pulmonaire, évaluant les épisodes de virémie à CMV après transplantation (14), révèle que 18 épisodes de virémie à CMV sur 25 (72 %) présentaient d abord un résultat non réactif au test QF-CMV contre 4 épisodes sur 16 (25 %) présentant au préalable une réponse de réactivité au test QF-CMV (test exact de Fisher, p = 0,0046, voir la figure 6). p = 0,0046 % d épisodes d ADNémie de HCMV avec une charge virale > copies/ml Non réactif (n = 25) Réactif (n = 16) Réponses préalables de lymphocytes T CD8 + spécifiques au HCMV Figure 6. Analyse statistique des réponses de lymphocytes T CD8 + spécifiques au CMV, détectées par le test QuantiFERON-CMV, et du développement d une virémie à CMV (test exact de Fisher, p = 0,0046). Données reproduites de Weseslindtner et al (14). Dans le cadre d une vaste étude prospective multicentrique sur 127 patients séronégatifs au CMV, receveurs d un organe solide provenant de donneurs séropositifs au CMV (15), ayant tous reçu un traitement antiviral de prophylaxie, les patients présentant un résultat de réactivité au test QF-CMV (avec un seuil de test de 0,1 UI/ml) après la fin de la prophylaxie anti-cmv affichaient un taux notablement plus faible de survenue tardive d une maladie 12 mois après la transplantation (6,4 %), par rapport à ceux présentant un résultat non réactif au test QF-CMV (22,2 %) et ceux ayant un résultat indéterminé (58,3 %, p < 0,001). Lorsque les résultats indéterminés étaient classés dans la catégorie «non réactif», l incidence d une maladie à CMV survenant ultérieurement était de 6,4 % contre 26,8 %, p = 0,024. Les valeurs prédictives positives et négatives du test QF-CMV pour une protection contre une maladie à CMV étaient respectivement de 0,90 (IC à 95 % 0,74-0,98) et 0,27 (IC à 95 % 0,18-0,37). Il ressort de cette étude que le test QF-CMV peut s avérer utile pour prédire si un patient présente un risque faible, intermédiaire ou élevé de développement ultérieur d une maladie à CMV après la prophylaxie. Dans une étude prospective sur 55 receveurs transplantés avec un organe solide (16) analysant la relation entre les résultats du test QF-CMV avant transplantation et les épisodes de réplication du CMV après transplantation, une incidence plus élevée de réplication du CMV après transplantation a été observée chez les receveurs séropositifs au CMV présentant un résultat non réactif (avec un seuil de test de 0,2 UI/ml) au test QF-CMV avant transplantation (7/14 ou 50 %), par rapport aux receveurs séropositifs au CMV présentant un résultat de réactivité au test QF-CMV avant transplantation (4/30 ou 13,3 %, p = 0,021). Cette étude révèle que des receveurs non réactifs au test QF-CMV avant transplantation, et qui ont reçu un organe provenant d un donneur séropositif pour le CMV, présentaient un risque décuplé de réplication du Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/

24 CMV par rapport aux receveurs réactifs au test QF-CMV avant transplantation (rapport des cotes (RC) ajusté de 10,49, IC à 95 % de 1,88 à 58,46). Un test QF-CMV effectué avant transplantation peut donc s avérer utile pour prédire le risque de réplication du CMV après une transplantation, permettant ainsi une personnalisation de la prise en charge d une infection à CMV après la transplantation d un organe solide. Un certain nombre d autres études portant sur la détection de réponses de lymphocytes T CD8 + spécifiques au CMV à l aide du test QF-CMV dans une cohorte de receveurs transplantés sont à présent terminées (1, 3, 5, 7, 8, 11, 13) ou sont en cours de réalisation partout dans le monde. Directives de consensus international en matière de prise en charge du cytomégalovirus dans la transplantation d un organe solide L importance de la surveillance d une immunité spécifique au CMV a été reconnue et publiée dans le document «Mise à jour des directives de consensus international en matière de prise en charge du cytomégalovirus dans la transplantation d un organe solide» (Updated International Consensus Guidelines on the Management of Cytomegalovirus in Solid Organ Transplantation) (6). Ces directives internationales, élaborées par un jury d experts du CMV et de la transplantation d organes solides désigné par la Section des transplantations et des maladies infectieuses (Transplant Infectious Diseases Section) de la Société de transplantation (Transplantation Society), constituent des directives de consensus fondées sur des preuves et sur l opinion d experts pour la prise en charge du CMV, notamment dans les domaines suivants : diagnostics, immunologie, prévention et traitement. Ces directives concluent que «la surveillance immunitaire des réponses de lymphocytes T spécifiques au CMV peut être prédictive et déceler les individus présentant un risque de maladie à CMV après transplantation et peut être utile pour orienter la prophylaxie et les thérapies préemptives» (6). En outre, ces directives fournissent également des recommandations quant aux caractéristiques d un test idéal de surveillance de l immunité, notamment : la capacité d évaluer la quantité et la fonction des lymphocytes T CD4 + et CD8 + de receveurs d une transplantation la capacité de doser l IFN-γ une réalisation aisée, un coût réduit et la reproductibilité des délais de mise en œuvre courts la livraison aisée des échantillons à des laboratoires référents spécialisés Le test QF-CMV satisfait pratiquement tous les critères spécifiés dans ces directives et représente le seul test de surveillance immunitaire standardisé capable de détecter l IFN-γ, spécifique au CMV. 24 Notice QuantiFERON-CMV ELISA 02/2015