Recherche translationnelle : un nouvel aspect de travail des ARCs/TECs

Transcription

1 Recherche translationnelle : un nouvel aspect de travail des ARCs/TECs Jean-Louis Legoux CHR d Orléans

2 Recherche translationnelle : quelques exemples Gestion des prélèvements

3 Recherche translationnelle De quoi s agit il? De la mise en relation de résultats cliniques avec des résultats biologiques

4 Recherche translationnelle? Exemples

5 Recherche translationnelle? Tissu tumoral Sang total Serum Urine Selles

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7 FIRE 3 FOLFIRI cetuximab (anti-egfr) FOLFIRI bevacizumab (anti-vegf) Cancer du colon métastatique en première ligne

8 FIRE 3 : Impact des mutations RAS Rare KRAS mutations NRAS mutations Nouvelle RAS mut ~ 10% KRAS mut ~ 40% ~ 50% RAS RAS wt wt Douillard et al., New Engl J Med 2013; 369: V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

9 FIRE 3 : Site des mutations»patients WT KRAS exon 2 KRAS EXON 1 EXON 2 EXON 3 EXON wt 4,3% 4,9% NRAS EXON 1 EXON 2 EXON 3 EXON ,8% 2% 0% BRAF EXON 11 EXON 15 0% % V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

10 FIRE 3 : Répartition des patients N = 592 KRAS exon 2 wild-type ITT population N = 752 Patients non sélectionnés L1 CCRM KRAS inconnus : 30 Pas de traitement : 13 Pas de traitement KRAS mt : 4 N = 113 KRAS exon 2 mutant population* N = 407 (69%) RAS evaluable population N = 342 RAS wild-type N = 65 (16%) New RAS mutant N = 58 FOLFIRI + Cetuximab N = 55 FOLFIRI + Bevacizumab N = 171 FOLFIRI + Cetuximab N = 171 FOLFIRI + Bevacizumab N = 34 FOLFIRI + Cetuximab N = 31 FOLFIRI + Bevacizumab *Update analysis from Stinzing S, et al. Ann Oncol 2012;23: V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

11 FIRE 3 : Evaluation de la survie globale FOLFIRI + Cetuximab FOLFIRI + Bevacizumab Mois 95%-CI Mois 95%-CI Hazard ratio p KRAS exon 2 WT ITT population (N = 592) 28,7 24,0-36,6 25,0 22,7-27,6 0,77 0,62-0,96 0,017 RAS WT (N = 342) 33,1 24,5-39,4 25,6 22,7-28,6 0,70 0,53-0,92 0,011 RAS MT (N = 65) 16,4 15,9-27,6 20,6 17,0-28,4 1,20 0,64-2,28 0,57 KRAS exon 2 MT and RAS MT (N = 178) 20,3 16,4-23,4 20,6 17,0-26,7 1,09 0,78-1,52 0,60 V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

12 FIRE 3 : Survie globale - RAS* wild type 1.0 Evénements n/n (%) médiane (mois) 95%-CI Probabilité de survie FOLFIRI + Cetuximab FOLFIRI + Bevacizumab 91/171 (53,2%) 110/171 (64,3%) Δ= 7,5 mois 33,1 24,5-39,4 25,6 22,7-28,6 HR 0,70 (95% CI : 0,53 0,92) Log-rank p=0,011 N at risk Mois depuis début du traitement *KRAS and NRAS exon 2,3 and 4 wild-type V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

13 FIRE 3 : Conclusions» Détermination complète du statut RAS indispensable avant prescription d anti-egfr et en L1 CCRM» Modification d AMM probable du cetuximab pour restriction d emploi aux patients RAS WT» Résultats en 2014 de l essai du CALGB avec 1117 pts inclus (FOLFOX/FOLFIRI beva vs cetuximab) V. Heinemann et al., ESMO 2013, A O-17

14 Recherche translationnelle?»tissu tumoral»sang total»serum»urine»selles

15 FOLFOX vs LV5FU2 : FFCD cancer colorectal métastatique N = 410 A B * 5FU + acide folinique (AF) ** 5FU + AF + oxaliplatine *** 5FU + AF + irinotécan LV5FU2 FOLFOX6 Objectif principal : Survie sans progression après 2 lignes FOLFIRI ligne 1 ligne 2 ligne 3 FOLFOX 6 * ** *** FOLFIRI 5FU ou capecitabine ou autre

16 Survie sans progression après N = lignes 70 % ont reçu une seconde ligne dans chacun des bras toxicité en première ligne : Arrêt Tox hématologique Bras A : 1% 6 % Bras B : 16 % 37 % (p<0.0001)

17 Bras monothérapie : 17 mois Bras bithérapie : 16 mois logrank p=0.64) Survie sans progression après 2 lignes

18 FFCD Survie globale

19 Progression-free survival rate 100% 80% 60% 40% 20% TYMS-5 UTR prédictif de la Survie Sans Progression à la ligne 1 3R/3R : 5FU seul aussi efficace que 5FU+oxaliplatine HR = 0.96 ; 95% CI = [ ] p = % Traitement personnalisé? At risk Sequential arm Combination arm 0% Months Patients 3R/3R HR, 0,96; 95% CI, 0,66-1,40, At risk Progression-free survival rate Sequential arm Combination arm 80% 60% 40% 20% 0% HR = 0.59 ; 95% CI = [ ] p = Months Patients 2R/3R HR=0,59; 95% CI, 0,42-0, Progression-free survival rate 100% 80% 60% 40% 20% Patients 2R/2R (HR=0,39; 95% CI, 0,23-0,68) HR = 0.39 ; 95% CI = [ ] p = Test de tendance entre les 3 HRs, p=0,006 At risk Sequential arm Combination arm 0% Months V. Boige JCO 2010

20 Recherche translationnelle? Tissu tumoral Sang total Serum Urine Selles

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22 Recherche translationnelle? Tissu tumoral Sang total Serum Urine Selles

23 FFCD : ADK du pancréas et gemcitabine en situation adjuvante Etude du métabolisme de la gemcitabine Dépend de la cytidine désaminase Dosages de gemcitabine Corrélations avec Polymorphismes de la cytidine désaminase Survie sans récidive Etude translationnelle Valider une hypothèse scientifique Préparer une stratégie de choix de traitement sur un critère biologique

24 BUT DE L ETUDE FFCD 1004 Détermination phénotypique et génotypique de la CDA comme marqueur prédictif de surexposition ou sous-exposition plasmatique en gemcitabine étude de la toxicité de la gemcitabine Les échantillons sanguins prélevés en début d étude, avant le 1 er cycle de traitement, sont obligatoires Il est indispensable de les identifier, de les stocker dans les meilleures conditions pour les envoyer ensuite, pour l analyse L ARC FFCD devra pouvoir vérifier leur stockage, lors d un monitoring sur site FFCD 1004 v.1-19/04/

25 PRELEVEMENTS SANGUINS OBLIGATOIRES : DETERMINATIONS GENOTYPIQUE ET PHENOTYPIQUE = avant le début du traitement 1 tube sec (5 ml) 1 tube EDTA (10 ml) 4 C < 10 h 4 C, 2500 rpm, 20 mn destruction Stockage à -80 C Stockage à -80 C FFCD 1004 v.1-19/04/

26 PRELEVEMENTS SANGUINS OBLIGATOIRES : DETERMINATIONS GENOTYPIQUE ET PHENOTYPIQUE = avant le début du traitement Identification des échantillons :3 premières lettres du nom et 2 premières lettres du prénom, n d inclusion dans l étude Fiche de prélèvement indiquant le n de tube, le lieu de stockage (très précisément n du congélateur, n de bac, n de porte-tubes) : dans le dossier médical ; l ARC FFCD doit avoir accès à ce lieu de stockage. Récupération des échantillons : en cours d étude et en fin d étude (sous carboglace) FFCD 1004 v.1-19/04/

27 = 1 e cure du 1 er cycle PRELEVEMENTS SANGUINS OPTIONNELS: ETUDE PHARMACOCINETIQUE J1 J8 J15 J22 T0 Tfin Tfin+90 Tfin x Tubes EDTA coatés à la tétrahydro-uridine (5 ml) fournis au lancement de l étude pour les centres volontaires 4 C, 2500 rpm, 15 mn destruction Stockage à -80 C envoi groupé au laboratoire de la Timone FFCD 1004 v.1-19/04/

28 TRAITEMENT DES ECHANTILLONS SANGUINS Étude génotypique (tube EDTA sang total): Recherche de la mutation 79A>C sur le gène CDA, par technique de PCR quantitative de type HRM + toute autre mutation Étude phénotypique (tube sec fraction sérique après centrifugation): Dosage enzymatique de l activité CDA par spectrophotométrie visible Quantification des protéines sériques totales Pharmacocinétique (tubes EDTA coatés à la THU plasma) : Dosage de la gemcitabine plasmatique et de son principal métabolite, le dfdu, par chromatographie HPLC-UV phase inverse Devenir des échantillons à la fin de l étude : o o o o Échantillons conservés à -80 C (sérums) et 4 C (ADN) jusqu à la conclusion de l étude Sérums et plasmas détruits à la conclusion de l étude Sang total résiduel détruit à la fin de l étude ADN extraits conservés au laboratoire de Transfert en Oncologie (Pôle Oncologie de l APHM) FFCD 1004 v.1-19/04/

29 Etudes translationnelles en cancérologie Urines : cancers de vessie? Selles : études de dépistage du cancer du côlon

30 Etudes translationnelles en cancérologie Etude de la tumeur : histologie puis biologie moléculaire Facteurs pronostiques : BRAF et cancer du colon Facteurs prédictifs de l efficacité d un traitement : nécessite un bras contrôle. RAS et cancer du colon Biopsies de la tumeur ou cellules tumorales circulantes. Mutations KRAS et cancer du colon Etude de l hôte : Appareillage enzymatique : pancréas et cytidine désaminase Réponse immunologique : T-Reg et anti-vegf Facteurs de croissance circulants (VEGF)

31 Recherche translationnelle : un nouvel aspect de travail des Arcs/Tec Gestion des prélèvements Consentement des patients Prélèvement des tissus Prélèvement de sang Transport du sang Transport de l imagerie

32 Consentement des patients Consentement à l étude clinique Consentement à l étude biologique Intégré à celui de l étude clinique Facteur déterminant Inclusion : étude de cancers du colon RAS non muté Stratification : sur mutation BRAF (cancers du côlon) Critère principal de l étude Séparé du consentement clinique : étude exploratoire ancillaire

33 Consentement des patients Mêmes règles que le consentement clnique Relu par comité de patients Evalué par le CPP Signé librement par le patient après un délai de réflexion Recueilli par une personne indentifiée (investigateur)

34 Consentement des patients Etudes génétiques constitutionnelles : Réglementation spécifique Protection contre le risque de discriminations eugéniques futures Limitées aux recherches explicitement listées dans le texte du consentement Etudes sur le génôme de la tumeur Peuvent être considérées comme une adjonction aux études histologiques Informations moins détaillées dans le formulaire Possibilité de découverte future de nouveaux facteurs Tests ultérieurs sur la cohorte de l essai.

35 Prélèvement des tissus Etude de biologie moléculaire Sur tissu tumoral Sur tissu de soutien (réponse stromale) Sur cellules sanguines Vérifier que le tissu employé est le bon Microprélèvement (microdissection) fait par l anatomo-pathologiste : incontournable Sélection des cellules pas cytométrie de flux et contrôle des caractères des cellules sélectionnées avant utilisation

36 Prélèvement des tissus Anatomo-pathologistes Indemnisation Frais de sortie des prélèvements : temps de techniciens et de secrétariat Temps médical de micro-dissection Information préalable De l anapath référent sur l étude. Comité biologique de l essai» Conception» Rédaction des annexes» Rédaction du consentement éclairé De la communauté des anatomo-pathologistes : en les intégrant aux congrès cliniques e via leurs sociétés savantes De l équipe locale de l investigateur

37 Prélèvement des tissus : réponse tumorale à un traitement Etudes des pièces opératoires Etudes sur pièces fraîches Examen extemporané Information nécessaire de l anapath référent de l étude Difficile Etude de la réponse microscopique Morphologie Immuno-histochimie Biologie moléculaire

38 Transport des tissus Assuré par les services d anatomo-pathologie Circuits de transport cf. relectures spécialisées Problème des études internationales Transports de tissus humains : réglementée Problèmes médico-légaux Problème des transplantations d organe En général études sur tissus sont décentralisées avec un laboratoire par pays

39 Transport du sang Sang total ou serum Centrifugation Boîtes spécifiques Transporteurs spécifiques Contrat particulier : normes spécifiques Agrément du transporteur Anticiper ce qui se passe à l arrivée

40 Prélèvement de sang CPP : geste aggressif Précieux Réalisation Laborantine IDE Service clinique IDE de CIC Quand? Vendredi? Possibilité d acheminement Possibilité de pré-traitement/mise en conservation

41 Transport de l imagerie CD-Rom : copie et envoi Accord du patient Accord du médecin radiologue Copie de PACS local sur clé ou ordinateur portable de l ARC mobile Transport par réseau INTERNET PACS à PACS Etiam en France Réseau des hôpitaux de la Région Bretagne Réseau des CLCC Réseau de l AP-HP : en cours Réseau des CHU : en cours FFCD

42 Fin