Incidence de la Môle. Faible incidence Pays du Nord. Forte incidence pays du Sud CHORIOCARCINOME

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1 Henriette Poaty 10 ème RENCONTRE DE BIOLOGIE TECHNIQUE BRAZZAVILLE CHORIOCARCINOME Cancer utérin Maladie gestationnelle trophoblastique 20 %- 50 % complication de la môle hydatiforme complète Droz, 1999; Shapter et coll., 2001; Xue coll., 2004 MÔLE HYDATIFORME COMPLETE Grossesse anormale Dégénérescence hydropique des villosités choriales placentaires Absence d embryon Origine Androgénique++ou biparentale Absence de gènes maternelle Incidence de la Môle Faible incidence Pays du Nord Europe : Amérique du Nord: 0,6 1/1000 nces France: 1/1000 nces(800 cas /an) Forte incidence pays du Sud Sud-est asiatique: 3,2-9,9/1000 nces Afrique: 3,7 /1000-4,3/1000 nces 1

2 Incidence transformation MH en CC Variable selon les régions (France:50 à 100 cas /an) Sénégal 5 % Maroc (254 MHC) 6 % Congo (47 MHC) 18 % Afrique du Sud (112) 20 % Bouffetal et coll., 2010; Moodeleyet coll., 2003; Moukassa, 1997 Môle Tumeur greffée Empreinte de type paternel Régulation anarchique d autres gènes Caryotype diploïde OBJECTIFS DE L ETUDE Choriocarcinome Immunité Maintien déséquilibre? Evolution? Certains responsables? transformation maligne Anomalies chromosomiques? Gains oncogènes/antioncogènes? MATERIEL D ETUDE Môles Hydatiformes (20) 10 ADN, 10 coupes paraffine MATERIEL ET METHODES Choriocarcinomes post môlaires (47) 14 ADN, 33 Coupes en paraffines Lignées cellulaires choriocarcinome (3) BeWo JAR JEG Placenta normal 9 SA 10 SA 11 SA 2

3 TECHNIQUES D ETUDE ADN: CGH-array 244K Cultures cellulaires: caryotypes pour lignées FISH Coupes & immunohistochimie TECHNIQUE DE CGH Technique de cytogénétique moléculaire: Combine caryotype à la biologie moléculaire Analyse global du génome: visualise à la fois anomalie CH(CNA, CNV) et moléculaire (profil du génome par gain/pertes) avec faible résolution 1Mb Type puces: 1. Génome complet: 44K, 60K, 105K, 180K, 244K 2. 1 chromosome donné 3. Région dédiée: région d intérêt, ADN mitochondrial (30K) Hybridation Génomique Comparée Indications ADN test Marqué Cy3 vert Mélange équimolaire + ADN compétiteur cot1 ADN référence Marqué Cy5 rouge Hybridation Détection quantitative des signaux Lame microarray + oligonucléotides synthétiques 60 mers n = spots ADM2 Algorithm Mesure rapport rouge -vert Normalisation et Segmentation Calcul Gains - Pertes Prénatal Malformations fœtales, SAE Cytogénétique : DPN, FCS, MFIU Caryotype anormal Postnatal = constitutionnel Tumeurs solides: cancer sein, choriok Retard mental idiopathique Maladies psychiatriques: Schizophrénie 3

4 CGH RESULTATS Môles: profils normaux. 10 mcgh Choriocarcinome de novo: anomalies modérées. 5/11 mcgh ; 7/11 acgh Lignées cellulaires anomalies 3/3 chromosomiques complexes acgh acgh +14q M176-18q M26 4

5 acgh FISH Trisomie 14 +1q q +14q +16q q JEG -X M176 Sonde 14q32 (IGH-V) et 16q (MAF-R) Cellule avec 3 copies du 14 illustrant une trisomie du 14q32 et 2 copies normale du 16. FISH Perte du 18 CNA (Copy Number Abnormalities) des choriocarcinomes par acgh(partiel) Tumeurs CNA Position (Mb), [ratio] LC CNA Position (Mb), [ratio] +14q24.2q [1.20] JAR +5q.2q [1.25] JEG Sonde BCL2 / SERPINB2. 1 copie du q32.3q [1.] -7q31.1q [0.67] +17-8p.1p ,32 [0.70] +19-8q13.1q [0.6] +20q [1.27] - 8q21.1q [0.48] M p36.3p [1.24] +8q.3q [1.25] +1p35.3p [1.7] +9q32q [1.25] + 1p [1.3] -10p15.3q [0.73] - 1q [0.72] -10q25.2q [0.51] +14q [1.5] -10q25.3qter [0.74] M2 -X -11pterp [0.75] M26 +11q [1.25] +12p [1.35](3) -18q12.2q [0.75] +12p13.2p [2.3](3) +19p [1.22] +12p [2.1](3) M27(2) +11q [1.20] +12p12.3p [3.6](3) CNAs(126): CC 21, BEWO 27, +12p12.2p [2.1](3) JAR 47, JEG q12q [1.3](3) +12q [2.29](3) 5

6 Régions minimales communes (MCR) +1p36.2p p35.3p p q21.2q.1 +5p13.3p12 +5q.2q q35.2q35.3-8p.3p12-8q13.1q q32q p14.3p12 +11q13.1 CNA (126): CC 21, BEWO 27, JAR 47, JEG MCR +12p13.2p q q32.2q q11.2q q21.2q q q q11.2 -Xp22.2p21.3 -Xp22.3 MCR MCR et GENES Position (Mb) Taille (Mb) Gain CC LC Gènessélectionnés /Perte 14q32.2q32.3 <100,26-101,22> 0.9 G 2 2 DIO3 DLK1 RTL1 16q11.2q24.3 < > G 2 MMP2 MMP15 18q12.2q21.3 <50,15-59,79> 9.67 P 1 2 SERPINB2 PMAIP1 BCL2 MBD2 MDEA TCEB3 19q G INSL3 19q13.4 < > 0,22 G 1 3 DPRX ZNF33 20q11.2 <32,34-34,90> 2,5 G 1 3 PROCR MMP24 DNMT3B Xp22.31 <7,25-7,37> 0.12 P 2 3 STS Xp22.2p21.3 <12,57-25,24> 12.6 P 2 3 PRDX4 ETUDE FONCTIONNELLE par immunohistochimie 2 groupes de gènes: Métalloproteïnases: MMP2 MMP7 MMP9 MMP14 MMP24 et leurs inhibiteurs: TIMP2² SERPINB2 ²Gènes soumis Empreinte L IMMUNOHISTOCHIMIE Technique qui associe les principes d immunologie à l histochimie Permet la détection d un antigène (protéine) dans un tissu donné grâce à l utilisation d un anticorps Détermine marqueurs moléculaires (membranaire, cytoplasmique, nucléaire, intercellulaire) 6

7 Utilisation des AC primaires correspondants qui se fixe à l Ag AC secondaire AC couplé à un traceurpermet de visualiser liaison Ag-AC Avidinebiotine (vitamine H) ou streptavidine biotine ou polymère Peroxydase Anticorps II Anticorps I Antigène Biotine Avidine Applications IHC Multiples: anapath, cancérologie Confirmation de certains diagnostics Prise en charge thérapeutique Valeur pronostic dans certains cas Permet une meilleure recherche MMP2 (Matrixmetalloproteinase2/72 kdatype IV collagenase/72 kdagelatinase) 16q12.2 Oncogène. Dégrade collagène IV, Clive KISS1 Reproduction, développement embryonnaire, régulation vascularisation, réponse inflammatoire Plusieurs voies de régulation: TIMPs(TIMP2+), PTK œstrogène, progestérone 7

8 MMP2 Placenta Môle Choriocarcinome MMP2 CC M281x40 CC M176x40 M269x40 M176x40 x40 Placenta 10 SA cytoplasme CTB+ Lame basale, MH + +, CC +++ Choriocarcinome: marque Cytoplasme et membrane des CTB des villosités en prolifération, MEC SERPINB2 [serine proteïnaseinhibitor/serpinpeptidase inhibitor, clade B (ovalbumin)/plasminogen activator-inhibitor2/pai-2)] SERPINB2 Antioncogène, dégrade les proteïnases 18q21.2q Contribution FCS + AP, rôle inflammation, immunité invasion tumorale Placenta x40 M176 x 40 Cytoplasme STB + microvillosités +++ Môle M114 8

9 CONCLUSION (4) Maladie polygénique CONCLUSION dérèglements géniques secondaires se superposeraient au déséquilibre génique initial des gènes soumis à empreinte parentale Modèle classique de cancer avec une signature génomique spécifique (empreinte et mirna) Intérêt de présenter ce travail Poster Importations des techniques au Congo: 1. FISH 2. Immunohisochimie Poaty H. et al. Genome-wide High-Resolution acgh Analysis of Gestational Choriocarcinomas. PloSone 2012, 7(1): e29426 Etude cytogénomique de la môle hydatiforme et du choriocarcinome gestationnels. Bull du Cancer 2012, 20(10)

10 JY. Picard REMERCIEMENTS A. Bernheim P. Coullin P. Dessen AL Diata E. Leguern C. Gombé D Carles JF. Peko A. Valent S. Prevost A. Ngolet B.M Lebwaze Danse des Moyes à Tongo MERCI A TOUS A B C D Fécondation Ovocyte II anucléé Maturation ovocyte défectueuse Mère mutation NLRP7 Fécondation anormale ou ou Duplication SPZ p Môle complète hétérozygote 46,XX ou 46,XY 46 p Môle partielle 69,XXX / XXY / XYY Môle complète homozygote 46,XX Môle complète biparentale 46,XX/XY ou partielle Villosité œdémateuse Cordon d une môle partielle ombilical (Kierszenbaum, 2006) Fœtus mortifié Critères de sélection des gènes Présents dans 2 MCR au moins (hg18) et deux des critères ci-dessous 1. Expression dans le placenta 2. Implication dans développement embryonnaire /placentaire 3. Implication dans le cancer/apoptose 4. soumis à l empreinte parentale 10

11 BeWo JEG JAR Caryotype des lignées 71-72,XXY,add(X)(p21-22), +1, add(1)(p36),+2, -4,+5,-6, add(7)(p22),-11,-13x2, i(13q),-18, der(19)t(9;19)(q13;p13), +mar[cps16] ,XXY,add(X)(p21-22),+2,+5, add(7)(p22), add(7)(q32), +9,t(10;15)(p10;q10),-11,-13, i(13q),t(14;11)(q15;p13), -18, del(18)(q22), +mar[cps21] ,XXY, add(x)(p22),del(1)(p31), t(1;13)(p13;q14), t(3;3)(q12;qter), add(4)(q22),+5, -8, del(8)(q22),-10, add(11)(q10), der(13)(q11q34), add(17)(p12),-19,-21, +mar[cps18] Nombre d échantillons CH CC + CL 3 CC 3 Môle x CNAs(126): CC 21, BEWO 27, JAR 47, JEG 31 Chromosomes impliqués TIMP2 17q25.3 Placenta 9SA x 40 Môle M114x20 Chorio M281 x 40 Placenta 9SA, cytoplasme CTB ++ Môle et choriocarcinome. Négatifs 11