Exploration plaquettaire : une interface informative de la relation clinico-biologique
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- Ariane Pinette
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1 1 Exploration plaquettaire : une interface informative de la relation clinico-biologique KHATERCHI Amir amir.khaterchi@aphp.fr 18/01/2018 Service d Hématologie Biologique (Pr ELALAMY) - Hôpital TENON Pôle de Biologie médicale et Pathologie Chef de pôle Dr M. VAUBOURDOLLE
2 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparine (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 2
3 TENON HEMATOLOGIE BIOLOGIQUE Cytologie Hémostase plasmatique Explorations plaquettaires 3
4 TENON HEMATOLOGIE BIOLOGIQUE Cytologie Hémostase plasmatique Explorations plaquettaires 4
5 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparine (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 5
6 8 Relation structure/activité La plaquette : Spécificités et Complexité Cellule anucléée (2-4 µm de diamètre/volume moyen 7-10 fl) Durée de vie = 8-10 jours Valeurs usuelles : Giga/L 6
7 8 Relation structure/activité La plaquette : Spécificités et Complexité Vue en surface : Membrane plasmique Vue en Coupe équatoriale membrane externe mitochondrie système canaliculaire connecté à la surface microtubules d'actine granule dense (d) granule alpha (a) lysosome (l) 7
8 Composition des granules plaquettaires La plaquette : Spécificités et Complexité 8
9 La plaquette : Spécificités et Complexité Rôle : Plaquettes Adhésion de plaquettes à l espace sous endothélial Thrombus plaquettaire Cellules endothéliales Espace sous endothélial Etat normal Lésion endothéliale, adhésion puis activation plaquettaire Agrégation plaquettaire : formation du thrombus SAMU VASCULAIRE : Premières cellules sur les lieux de la lésion vasculaire pour assurer le colmatage de la brèche endothéliale et rétablir l intégrité pariétale Ferguson JJ. Antiplatelet Therapy in Clinical Practice. London: Martin Dunitz; 2000:
10 Récepteurs Promouvant l Adhésion Facilitant la Sécrétion Autorisant l Agrégation 10 Calvo C
11 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparine (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 11
12 La plaquette : Réalités et pluralité Tests fonctionnels Cytométrie en flux Biologie molécul re PLAQUETTES SANGUINES Tests immunologiques 12
13 Etude phénotypique Etude morphologique Etude génétique Etude fonctionnelle Equipements du laboratoire AGRÉGATION PLAQUETTAIRE SECRETION PLAQUETTAIRE TEMPS D OCCLUSION in vitro é Optique Impédance ATP-mètrie Radio marquage PFA-100 CYTOMÈTRE EN FLUX MICROSCOPE PHARMACOGÉNÉTIQUE Navios - Coulter 13
14 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparines (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 14
15 La thrombopénie induite par Héparines La thrombopénie induite par l héparine (TIH) : complication rare potentiellement sévère des traitements anticoagulant par héparine (HNF ou HBPM) PF4 Héparine-PF4 PLT PLTa PLT PLTa Héparine PF4 L héparine modifie le Facteur 4 Plaquettaire (F4P) qui devient immunogène. Les anticorps «héparine dépendants» peuvent alors activer les plaquettes => thrombopénie avec ou sans thrombose 15
16 La thrombopénie induite par Héparines Toute suspicion de TIH impose : arrêt immédiat du traitement par l héparine mise en place d un traitement alternatif coûteux (Orgaran, Argatroban ) Contact étroit entre les cliniciens et les spécialistes d hémostase sans attente de la confirmation des tests biologiques (immunologiques/fonctionnels) : Véritable urgence thérapeutique 16
17 La thrombopénie induite par Héparines TIH : tests fonctionnels actuels Test d Agrégation Plaquettaire en Plasma Riche en Plaquettes AGREGATION Plasma patient suspecté de TIH HNF Ou HBPM Plaquettes témoin PAS D AGREGATION Méthode photomètrique 17
18 La thrombopénie induite par Héparines TIH : tests fonctionnels actuels Test d Agrégation Plaquettaire en Plasma Riche en Plaquettes Avantages : Le plus couramment utilisé Spécificité: ~ 80% Inconvénients : Sensibilité moyenne (65%) : sélectionner et tester plusieurs témoins (85%) Etapes prénalytiques contraignantes Technique longue (2 heures) Arrêté pour 18
19 La thrombopénie induite par Héparines TIH : tests fonctionnels actuels Test de Libération de la Sérotonine Radiomarquée (test de référence) C 14 Sérotonine Lavage Avantages : Spécificité: > 95% Sensibilité: > 80 % Plasma malade + Héparine Inconvénients : 4 sites en France dont Tenon Radioéléments Technique très longue (1 jour et ½) 19
20 La thrombopénie induite par Héparines TIH : Développement diagnostique Analyse par Impédancemétrie : Mesure de l activation plaquettaire par l augmentation de la résistance électrique entre deux électrodes en sang total. Multiplate Augmentation de la résistance enregistrée en continu et exprimée en aire sous la courbe (AUC) - unités (AU*min) 20
21 La thrombopénie induite par Héparines TIH : Développement diagnostique Heparin-Induced whole blood platelet aggregation assessed by Multiple Electrode Aggregometry : HIMEA 340 µl Sang total citraté du témoin µl Plasma citraté patient suspecté TIH + 40 µl Héparine (1 IU/ml) 1 min incubation 15 min enregistrement 21 Elalamy et al, J Thromb Haemost 2009
22 La thrombopénie induite par Héparines TIH : Développement diagnostique HIMEA Validation d une nouvelle méthode de diagnostic - Multiplate - étude prospective de 200 patients HIMEA new TAP Sensibilité % Spécificité % VPP % Avantages : Rapide (16 min) Sang total Cout réduit Accessible Pas de radioélément VPN % Gkalea, Elalamy et al, Platelets
23 La thrombopénie induite par Héparines SSC ISTH Standardisation internationale de la nouvelle méthode Etude multicentrique en cours
24 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparines (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 24
25 La thrombopénie induite par Héparines Optimisation dans le diagnostic Révision des process de réalisation de la TIH 4 symboles : 25
26 La thrombopénie induite par Héparines Optimisation dans le diagnostic 26
27 La thrombopénie induite par Héparines Optimisation dans le diagnostic HIMEA HIMEA HIMEA : Intégrer dans la nomenclature NABM SRA = RIHN 27
28 AGENDA Le service et son environnement La plaquette : spécificités et complexité Relation structure/activité Rôles physiopathologiques La plaquette : contextes cliniques et thérapeutiques Focus sur la thrombopénie induite par Héparines (TIH) Développement Optimisation dans le diagnostic Perspectives : autres développements pour le diagnostic de la TIH (ATP-mètrie, cytométrie ) 28
29 Perspectives NOUVEAUX OUTILS : recherche d alternative au SRA Lumiagrégation : Agrégation Sécrétion d ATP (luciferin/luciferase) comparable au performance du test SRA? à HIMEA? 29
30 MERCI DE VOTRE ATTENTION 30
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