Le dosage de la ferritine

Transcription

1 Le dosage de la ferritine Formation des Assistantes médicales mars 2014 Dr M.F. Rossier Service de Chimie clinique & Toxicologie

2 La ferritine. Macromolécule (PM > 440 kd). Composée de 24 sous-unités: H (Heavy) acides et L (Light) basiques. > 20 isoformes décrites avec des distributions tissulaires spécifiques (foie, rate, moelle, placenta, tumeurs, ). Noyau contient jusqu à 2500 ions Fe 3+ Taux circulants ( µg/l) reflètent les réserves en fer de l organisme MAIS Varient en cas d inflammation (phase aigue), en présence de certaines tumeurs, lors de nécrose cellulaire ou de perturbation de l érythropoïèse. 2

3 Les valeurs de ferritine Concentrations utiles (en µg/l): -Valeurs de référence (H > F) -Déplétion en Fe < 20 -Carence martiale < 12 -Surcharge en Fe > 400* * Exclure syndrome inflammatoire, nécrose ou Ca Chez la femme: -Grossesse diminution -Ménopause augmentation 3

4 Le dosage de la ferritine par immunodosage 2013: dosages de ferritine à l ICHV Cobas e-411 Cobas e-601 4

5 Pré- et post-analytique Dosage effectué sur: -Sérum (recommandé) -Plasma (possible, mais nécessite une correction > 10%) Stabilité: -7 jours à 4 C -12 mois à -20 C 5

6 Mesurer des molécules, c est comme Compter sa monnaie. 6

7 dans l obscurité 7

8 Méthodes analytiques Anticorps spécifique Spectromètre de masse 8

9 Les immunodosages 2 modes possibles: - Compétition - Sandwich* 9

10 Structure des immunoglobulines 150 KDa 10

11 Principe du dosage immunométrique (en sandwich) 11

12 Principe du dosage immunométrique (en sandwich) + + Analyte (sample) 1st Antibody (in excess) 2 nd antibody (labeled) + Separation sandwich Bound fraction, complex Free fraction 12

13 ELISA en méthode sandwich 2 nd Ab, biotinylated enzyme/ streptavidine substrate chromogene colored product 1 st Ab hormone 13

14 Le système «elecsys» (électrochimiluminescence) 620 nm 14

15 Immunodosage avec détection par ECL Avantages par rapport à l ELISA: 1) On peut répéter la mesure de nombreuses fois car le complexe de Ru(bpy)3 est régénéré à chaque cycle Amplification du signal Augmentation de la sensibilité 2) On contrôle la durée du signal Augmentation de la précision 15

16 Specific binding (B/B 0 ) (= detected signal) Courbes de calibration et domaine de dosage B 0 «sandwich» B=50% NSB EC 50 Analyte concentration (log M) 16

17 Profil de précision et domaine de dosage Ferritine : µg/l CV (%) 4% Méthode A Limite tolérable d imprécision Domaine d analyse pour méthode A Concentration de l analyte 17

18 Limitations des immunodosages 18

19 L effet crochet dû à un excès d analytes 19

20 Amélioration par une étape de lavage intermédiaire En cas de suspicion: - Diluer l échantillon - Effectuer un lavage avant le 2 ème anticorps wash Ferritine: pas d effet crochet observé jusqu à µg/l 20

21 Les anticorps interférents Divers types d interférence par anticorps: - Anticorps hétérophiles (ex. HAMA: human anti mouse) - Facteurs rhumatoïdes (anti IgG) - Autres anticorps (ex. anti-streptavidine, anti-ru) 21

22 Présence d anticorps hétérophiles (HAMA) : ~ 4% mab Surestimation de l analyte Ag mab HAMA Anticorps endogènes hétérophiles Adapted from ahajournals.org 22

23 Anticorps hétérophiles (HAMA) 23

24 Prévention des interférences par HAMA Use chimeric or humanized antibodies for the assay Y Add non immune mouse antibodies 24

25 Questions 25