HEMOTHERAPIE: LES PREPARATIONS DU SANG
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- Valentin Robichaud
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1 HEMOTHERAPIE: LES PREPARATIONS DU SANG Partie II Dr AKA ANY-GRAH Sandrine Pharmacotechnie 1
2 OBJECTIFS PEDAGOGIQUES 1. Définir l hémothérapie 2. Connaître les éléments constitutifs du sang 3. Définir les préparations du sang (produits labiles, stables et substituts du sang) 4. Décrire les méthodes d obtention des préparations du sang 5. Connaître les usages, les avantages et les inconvénients d utilisation des préparations du sang 6. Citer les contrôles à réaliser sur les préparations du sang 2
3 PLAN I. Généralités II. Méthodes d obtention des préparations du sang III. Les produits sanguins labiles IV. Les produits sanguins stables V. Les substituts sanguins VI. Conclusion 3
4 IV. LES PRODUITS SANGUINS STABLES 4
5 IV.1 RÔLES DES PRODUITS SANGUINS STABLES Albumine Volume sanguin Facteurs Coagulation de coagulation γ Globulines Immunologique 5
6 IV.2 METHODES DE PREPARATION 1. Par fractionnement (Cohn, plasmaphérèse) 1.1 Sources: Pools de plasma (12 au max) Plasma placentaire Plasma de convalescents de certaines maladies infectieuses Donneurs: 25 prélèvements / an si plasmaphérèse 6
7 IV.2METHODES DE PREPARATION 1.2. Plasmaphérèse 1.3. Purification Dialyse: Elimination des petites molécules Protéines bas PM Ac nucléiques Sels minéraux Centrifugation en continu 7
8 IV.2 METHODES DE PREPARATION 2. Préparation par la méthode chromatographique Résines: DEAE (DiethylAminoEthyl) Billes de silice traité Tampons spécifiques d élution Phosphate Acétate Résultats: γ Globulines (I) Albumines (II) Meilleur rendement que COHN 8
9 IV.2 METHODES DE PREPARATION 3. Stérilisation Inactivation virale (après Cohn ou chromatographie) Chauffage: Solvant organique à 60 C Vapeur à 60 C en présence de stabilisant et de conservateur Chimique: Solvant détergent β propionique ph acide Irradiation: UV ou γ 9
10 IV.2 METHODES DE PREPARATION 3.Stérilisation (suite) Inactivation virale: Contrôle avec des virus de référence: Poliovirus HIV 10
11 IV.2 METHODES DE PREPARATION Stérilisation (suite) Filtration clarifiante et stérilisante Lyophilisation Manipulation en zone Stérile Aseptique En continu Basse température 11
12 IV.3 LES DIFFERENTS TYPES DE PRODUITS SANGUINS STABLES IV-3-1 L albumine humaine Définition Conservation Albumine en poudre Présentation Indication thérapeutique Contrôle 12
13 IV-3-1 L albumine humaine Définition: Protéine la plus importante du plasma 584 AA PM: Da Maintient de la pression oncotique Transport des éléments 13
14 IV-3-1 L albumine humaine Conservation: A basse T = - 20 C Sous azote ou sous vide Durée cons : 5 ans Stock hospitalier: Solution d Albumine Cas de détresse: Alb lyop (cons +++) 14
15 IV-3-1 L albumine humaine Présentations: Solution isotonique 4 g / 100 ml Solution hypertonique 20 g / 100 ml 15
16 IV-3-1 L albumine humaine: PREPARATION DE L ALBUMINE (1) PLASMA STANDARD PLASMA CRYODESSECHE FRACTIONNEMENT Ethanol 19% ph 5,85 SURNAGEANT I + II + III Ethanol 40% ph 5,9 SURNAGEANT IV SOLUTION BRUTE D ALBUMINE 16
17 IV-3-1 L albumine humaine: PREPARATION DE L ALBUMINE (2) SOLUTION BRUTE D ALBUMINE PRECHAUFFAGE 4 h à 60 C REPARTITION EN FLACON SOLUTION MI CHAUFFAGE FINAL 10h à 60 C (Inactivation Pasteur) QUARANTAINE à 32 C ALBUMINE 17
18 IV-3-1 L albumine humaine Indications Etat de choc Hypovolémie Remplace la transfusion de plasma total Solution stable Dépourvue de tout risque de contamination 18
19 IV-3-1 L albumine humaine Contrôle Paillettes jaunes pales Solution: limpide, légèrement brunâtre, opalescente Contrôles: Stérilité ph Origine humaine avec un antisérum humain Essai croisé avec un antisérum animal Pureté par électrophorèse 19
20 IV-3-1 L albumine humaine Contrôles (suite): Dosage : Azote total Hb libre: limite d hémolyse Sodium Perte à la dessiccation Apyrogénicité Innocuité 20
21 IV.3.2 Fibrinogène Définition: PM = Donneurs: Max 50 Forme: Lyophilisat: Poudre blanche Solution opalescente 21
22 Conservation IV.3.2 Fibrinogène Basse T Sous azote ou sous vide Indications: Obstétrique: Accouchement prématuré Avortement hémorragique Décrochage placentaire 22
23 Contrôle Origine humaine ph Dosage: Protéines Taux de Fibrinogène Innocuité Apyrogénicité Stérilité IV.3.2 Fibrinogène 23
24 IV.3.3 Gamma globulines (= immunoglobulines) Pool de donneurs: fois plus d Ac que la normale Mélange d Ac: 98% IgG 2% IgA 24
25 IV.3.3 Gamma globulines : Prépraration d immunoglobulines humaines normales DON DE SANG SANG FRAIS 1 / FRACTIONNEMENTS SUCCESSIFS PLASMA CONGELE 2 / TRAITEMENT A LA PEPSINE SOLUTION FINALE 1 / FILTRATION STERILISANTE 2 / REPARTITION EN FLACONS 3 / LYOPHYLISATION GAMMAGLOBULINES 25
26 IV.3.3 Les gamma globulines (=immunoglobulines) Les immunoglobulines polyvalentes Les immunoglobulines spécifiques Structure chimique d une immunoglobuline 26
27 IV.3.3 Gamma globulines Monographie Immunoglobulines polyvalentes: Rougeole oreillons Immunoglobulines spécifiques: Anti-HBs Antitétaniques Antirabiques. Anti-D Anti-HBs 27
28 Indications: IV.3.3 Gamma globulines Infection très lente des voies aériennes sup Rougeole Tétanos oreillons Hépatite épidémique Agammaglobulinémie 28
29 IV.3.4 Fractions coagulantes d origine humaine Facteur Antihémophilique A: F VIII Préparation: Décongélation très lente du plasma liq congelé: Cryoprécipité: F VIII + Fibrinogène Dialyse Lyophilisation Surnageant: PPSB + Albumine Purification par chromatographie 29
30 IV.3.4 Fractions coagulantes d origine humaine Monographie Facteur VIII anti-hémophilique A Facteur IX anti-hémophilique B Facteur Willebrand Fibrinogène Complexe prothrombinique (PPSB) Facteur XIII Facteur VII 30
31 IV.3.4 Fractions coagulantes d origine humaine Complexe prothrombinique (PPSB) Proconvertine: F VII Prothrombine: F II Stuart: F X Antihémophilique B: F IX 31
32 IV.3.4 Fractions coagulantes d origine humaine Indications: Déficit spécifique de ces facteurs anticoagulants Hémorragies de toutes origines 32
33 V. LES SUBSTITUTS SANGUINS DEFINITION 33
34 V.1 Substituts plasmatiques Albumine: PM = Assure la viscosité et l osmolarité Grande hydrophilie Charge électrique négative T1/2 = 6 à 12h 34
35 V.1 Substituts plasmatiques Albumine: Pas de perturbations hémodynamiques: Hémostase Viscosité ph Qualités industrielles: Molécule stable Production aisée Matières 1ères peu couteuses et abondante Contrôles faciles à effectuer 35
36 V.1 Substituts plasmatiques Solutés d urgence: Glucosés NaCl Ringer lactate 36
37 V.1 Substituts plasmatiques Colloïdes naturels modifiés Dextrans: Obtention par fermentation du saccharose Lactobacille: Leuconostoc mesenteroïdes Polymère de glucose 37
38 V.1 Substituts plasmatiques Colloïdes naturels modifiés Gélatine modifiée (Plasmagel ) Obtention par hydrolyse acide à chaud Repolymérisation en milieu alcalin avec l acide succinique PM = à
39 V.1 Substituts plasmatiques Colloïdes naturels modifiés PVP: Haut PM T1/2 élevé Interdit dans certains pays (Canada) Hydroxyethylamidon (Lomol ) Très utilisé Amidon hydrolysé par oxyde d éthylène 39
40 V.1 Substituts plasmatiques Colloïdes naturels modifiés Polyaminoacide Polypeptide synthétique A partir de 3 acides aminés: Asp, Gly, Lys Blocage des fonctions carboxyliques Absence de réponse antigénique 40
41 V.2 Substituts érythrocytaires Transporteurs d oxygène Besoins militaires: Problèmes de conservation Compatibilité immunologique Regain d intérêt dans les années 80: VIH Hépatites Récemment : Creutzfeld-Jacob 41
42 V.2 Substituts érythrocytaires Perfluorocarbones: Produits synthétiques Bonne dissolution de l O 2 et de nombreux gaz Dérivés d hémoglobine Hb humaine ou animale modifiée Hb recombinée 42
43 V.2 Substituts érythrocytaires Avantages: Compatibilité universelle Bonne conservation: 1 à 3 ans Production en grande quantité possible Risque infectieux réduit Solution alternative pour les patients réfractaires à la transfusion sanguine Réduit la dépendance aux dons de sang 43
44 V.2 Substituts érythrocytaires Indications: Anémie Cancer du sang Effets indésirables: Hypertension Allergie Ictère Troubles gastriques Hémoglobinurie 44
45 VI. CONCLUSION Problème de santé publique important Nécessite une meilleure maîtrise sécuritaire Vulgarisation des substituts sanguins Accroissement des dons 45
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