APPLICATION AU DOSAGE PAR HPLC D UN PRINCIPE ACTIF DANS UNE SPECIALITE

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1 TRANSPOSITION PAR VALIDATION RESTREINTE D UNE METHODE VALIDEE APPLICATION AU DOSAGE PAR HPLC D UN PRINCIPE ACTIF DANS UNE SPECIALITE 28/11/2007 Yves GUGGISBERG

2 1-BUT / DOMAINE APPLICATION 2-REFERENTIEL 1 1. BUT : Transposition par validation restreinte d une méthode validée : Proposition de protocole dans le cadre du dosage par HPLC d un principe actif dans une spécialité DOMAINE D APPLICATION : Transposition d une technique de dosage validée d une spécialité : - sur une autre spécialité similaire (cas des génériques) - contenant ou non dans sa formulation un ou plusieurs ecipients différents de ceu présents dans la spécialité dont la technique est validée 2 - REFERENTIEL : European OMLC Network «VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES» PA/PH/OMCL (05) 47, DEF May 2005 (1. Transfert of a method) Procédures opératoires internes (conformité, dosage) 2/45

3 3 - PRINCIPE Réaliser une séquence définie d injections permettant de : Réaliser un test de conformité du système Répondre au principau tests dans le cadre d une validation restreinte Effectuer le dosage du principe actif dans un produit fini Séquence d injections => Ensemble de données brutes (pesées, chromatogrammes) Traitement des données brutes => Répondre au tests demandés (utilisation sélective des données) 3/45

4 3 PRINCIPE PROPOSITION DE PROTOCOLE Jour 1 : Jour 2 : - Stabilité - Spécificité matière première - Répétabilité - Spécificité spécialité - Effet matrice - Linéarités gammes étalon et spécialité - Dosage - Eactitude - Fidélité intermédiaire - Effet mémoire L approche de chaque critère de validation comprend 3 parties : 1. Opération : décrit l essai à réaliser pour répondre au test 2. Traitement des données : principe du calcul / formule 3. Conclusion : résultat découlant du calcul Traitement des données et les différents calculs sur logiciel Ecel : - utilisation classique logiciel : fonctions mathématiques courantes (moyennes, écarts, ) - utilisation fonctions statistiques : fonctions spécifiques (droites régression, analyses variance, ) 4/45

5 3 PROPOSITION PROTOCOLE D INJECTION : JOUR 1 JOUR 1 SPECIFICITE STABILITE REPETABILITE BLANC ETALON 1-0 ETALON 1-1 (pureté) ETALON 1-2 ETALON 1-3 ETALON 1-4 ETALON 1-5 ETALON 1-6 ETALON 1-7 X (t =fin séquence J2) BLANC 5/45

6 3 PROPOSITION PROTOCOLE D INJECTION : JOUR 2 JOUR 2 SPECIFICITE EFFET MEMOIR E LINEARITE EXACTITUD E FIDELITE INTERMEDIAIRE DOSAGE EFFET MATRICE ETALON SPE ETALON SPE BLANC ETALON 80 % SPECIALITE 80 % ETALON 100 % /1 SPECIALITE 100 % /1 X (pureté) ETALON 100 % /2 SPECIALITE 100 % /2 ETALON 100 % /3 SPECIALITE 100 % /3 ETALON 120 % SPECIALITE 120 % BLANC 0.5 (ETALON + SPE) BLANC 6/45

7 4 - SPECIFICITE 4-1. Opération : Réaliser une analyse de pureté de pic - Sur chacun des principau pics - D un étalon - D une spécialité - Sur un détecteur à barrettes de diodes Si les opérations de validation sont réalisées sur un détecteur monochromatique : vérifier la spécificité sur un détecteur à barrettes de diodes 4-2. Traitement des données : En fonction de la présence ou de l absence du bruit de fond => adapter les paramètres de calcul de pureté 4-3. Conclusion : L échantillon doit présenter un niveau de pureté acceptable => dans le cas contraire : nécessité d injecter les ecipients 7/45

8 5 - STABILITE 5-1. Opération : Estimer la durée totale d une séquence Réaliser sur une prise d essai de matière première étalon 100 % : - une injection au temps t = 0 - une injection au temps t = fin séquence 5-2. Traitement des données : Ecart = (aire pic au temps fin 100) aire pic au temps Conclusion : Le produit considéré stable si : - aire de fin de séquence est compris entre 98.0 et % de l aire du pic de temps 0 - absence de pic supplémentaire 8/45

9 6 - REPETABILITE 6-1. Opération : Effectuer 7 injections étalon matière première 6-2. Traitement des données : Rejeter la première injection Calculer le CV des 6 injections suivantes 6-3. Conclusion : Le CV doit être inférieur ou égal à 1.0 % 9/45

10 7 EFFET MATRICE 7-1. Opération : - Injection solution étalon - Injection solution spécialité (c = 100%, par e. solutions pour dosage) - Injection du mélange à parts égales des 2 solutions 7-2. Traitement des données : Comparer les écarts entre : aire pic étalon aire pic spécialité aire pic mélange (0.5 étalon spécialité) 7-3. Conclusion : Théorie : (aire pic étalon + aire pic spécialité)/2 = aire pic mélange L écart doit être compris entre 98.0 et % 10/45

11 8 - LINEARITE 8-1. Opération : Linéarité à effectuer :- sur le principe actif seul = gamme étalon - sur la forme pharmaceutique = gamme spécialité Pour chaque gamme :- 3 points indépendants 80, 100 et 120 % - 3 prises essais différentes (pas de dilution de sol. mère) - la concentration du point 100 % (calculée à partir de la valeur théorique fabricant) - les 2 gammes sont à réaliser le même jour / 1 seule injection de chaque solution 8-2. Traitement des données : Pour chaque gamme (étalon et spécialité) calculer : - les paramètres de régression : droite y=b+a / pente b / ordonnée à l origine a / coefficient détermination R 2 - le test de validité des droites (test de F) 8-3. Conclusion : On doit s assurer que la réponse obtenue est due à une régression linéaire: => par le test de F : si F calculé > F fié pour un alpha=5% (valeur critique de F alpha fié) => et par le calcul de R 2 (> 0.980) : eistence d une pente / ordonnée passe par l origine 11/45

12 9 - DOSAGE 9-1. Opération : Réaliser 3 prises d essais étalon et 3 prises d essais spécialités Alterner injection étalon et spécialité Une seule injection de chaque solution 9-2. Traitement des données : Vérifier le facteur de réponse des étalons (98.0 < FR < 102.0%) Pour chaque couple étalon/spécialité calculer la valeur de dosage Réaliser la moyenne des 3 valeurs 9-3. Conclusion : La valeur individuelle de chaque dosage doit être comprise entre 95.0 et % La moyenne des 3 valeurs doit être comprise entre 95.0 et % avec un CV acceptable 12/45

13 10 - EXACTITUDE Opération : Elle est déduite des données de la LINEARITE des gammes Etalon et Spécialité Traitement des données : Les valeurs obtenues pour chaque point (80, 100 et 120 %) de la gamme de la spécialité sont projetées sur la gamme étalon On obtient ainsi la quantité recouvrée, à partir de laquelle on calcule le pourcentage de recouvrement Calcul de la quantité recouvrée : On dispose -> pour étalon :droite régression : aire étalon = b +a -> pour spécialité : aire spécialité => quantité recouvrée = (aire pic spécialité a) b Pourcentage de recouvrement : => % recouvrement = (quantité recouvrée 100) quantité (*) (*) soit : valeur théorique, valeur BA fabricant, valeur trouvée lorsque dosage effectué en même temps que la validation restreinte Conclusion : L eactitude est vérifiée si la valeur moyenne de recouvrement est comprise entre 95.0 et % 13/45

14 11 FIDELITE INTERMEDIAIRE Opération : Correspond à la «répétabilité» des 3 points 100 % de la matière première et du dosage provenant de 3 prises d essais différentes Traitement des données : Projection de chaque point de la spécialité sur la droite de régression de la spécialité ET Projection de chaque point étalon sur la droite de régression de la matière première Pour chaque aire mesurée => calculer la concentration corrigée : c c spécialité = (aire spécialité a spécialité) b spécialité c c étalon = (aire étalon a étalon) Conclusion : b étalon La Fidélité intermédiaire est satisfaisante si chacun des CV est inférieur à 2.0 % 14/45

15 12 EFFET MEMOIRE Opération : Injecter un Blanc en début et en fin de séquence Traitement des données et conclusion : Vérifier l absence de pic supplémentaire Si pic : valeur limite : 0.1 % aire pic principal 15/45

16 14 - EXEMPLE D APPLICATION Molécule Ranitidine chlorhydrate Méthode de dosage : HPLC Application de la méthode validée de la spécialité de référence à une autre spécialité de la série génériques 16/45

17 Répétabilité RANITIDINE REPETABILITE ETALON N enregistrement : 00/X/MS/0378 Injection Prise essai (mg) 10,6 10,6 10,6 10,6 10,6 10,6 Moyenne Ecart type C.V. (%) Limite < 1,0 % Aire 1602, , , , , , , ,82 0,42 1,0 17/45

18 Stabilité RANITIDINE STABILITE ETALON N enregistrement : 00/X/MS/0378 Temps Prise essai (mg) Aire % Ecart / t = 0 (%) t = 0 10,6 1602, ,0 0,0 t = intermédiaire 10,6 1610, ,5 0,5 t = fin 10,6 1605, ,20 0,2 Limite % 98,0-102,0 + / - 2,0 Limite inférieure 98,0-2,0 Limite supérieure 102,0 2,0 18/45

19 Effet matrice RANITIDINE EFFET MATRICE N enregistrement étalon : 00/X/MS/0378 Etalon Spécialité 0,5 étalon + 0,5 spécialité % Ecart théorie / trouvé (%) Théorie Trouvé Prise essai 0,1005 1,5514 Aire 1504,9 1520,8 1512, , ,9 0,9 Limite % 98,0-102,0 + / - 2,0 Limite inférieure 98,0-2,0 Limite supérieure 102,0 2,0 19/45

20 Effet mémoire RANITIDINE EFFET MÉMOIRE sur BLANC Injection Pic interférent (oui / non) Blanc 1 Non Blanc 2 Non Conclusion : Absence d'effet mémoire 20/45

21 Données brutes RANITIDINE DONNEES BRUTES 00/X/MS/0378 ETALON 80% 100%-1 100%-2 100%-3 120% Prise d essai (g) : 0,0804 0,1005 0,1007 0,1003 0,1206 Titre (%) : 100,80% 100,80% 100,80% 100,80% 100,80% Teneur en eau (%) : 0,10% 0,10% 0,10% 0,10% 0,10% Volume de dilution (L) : 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 Concentration (g/l) 0,0810 0,1012 0,1014 0,1010 0,1214 Aire : 1212, , , , ,94 00/M/MS/0429 SPECIALITE 80% 100%-1 100%-2 100%-3 120% Prise d essai (g) : 1,2416 1,5514 1,5418 1,5524 1,8530 Poids moyen (g) : 0,3096 0,3096 0,3096 0,3096 0,3096 Teneur théorique (g) : 0,1500 0,1500 0,1500 0,1500 0,1500 Volume de dilution (L) : 8,3333 8,3333 8,3333 8,3333 8,3333 Concentration (g/l) 0,0806 0,1007 0,1000 0,1007 0,1202 Aire : 1235, , , , ,08 21/45

22 Calculs intermédiaires RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Ci - Cmoy (Ci - Cmoy) 2 Ai - Amoy (Ai - Amoy) 2 (Ci - Cmoy) (Ai - Amoy) Aires corrigées A i (A i - A moy) 2 (Ai - A i) 2 80% -0,0202 0, , ,9923 6, , ,4501 8, %-1 0, , , , ,1699E-26 33, % 0,0202 0, , ,8685 6, , ,4501 8, Somme : 0,0000 0,0008 0, , , , , , /M/MS/0429 SPECIALITE Ci - Cmoy (Ci - Cmoy) 2 Ai - Amoy (Ai - Amoy) 2 (Ci - Cmoy) (Ai - Amoy) Aires corrigées A i (A i - A moy) 2 (Ai - A i) 2 80% -0,0199 0, , ,7147 5, , ,534 40, %-1 0,0002 3,1454E-08-10, , , , , , % 0,0197 0, , ,3735 6, , ,538 42,21877 Somme : 0,0000 0,0008 0, , , , , , /45

23 Etude de régression ETALON RANITIDINE 3 points 80/100/120% 00/X/MS/0378 Aire moyenne : Concentration moyenne : Coefficient de détermination r 2 = Ecart-type résiduel = ETALON MATIERE PREMIERE 1510,7043 0,1012 0, ,13313 Analyse des variances de régression F calculé 3568,81615 F (1;1;0,05) 161 Au risque alpha de 5%, on conclue que l eistence de la pente est significative t calculé t (1 d.d.l.) Pente B = 14886,9312 Ecart-type de B = 249, , ,314 Ordonnée à l origine A = 4, Ecart-type de A = 25, , ,706 Au risque alpha de 5 %, la différence entre la pente et 0 est significative Au risque alpha de 5%, la différence entre A et 0 est non significative Si la différence entre A et O n'est pas significative, alors on peut conclure que la droite passe par l'origine au risque d'erreur considéré. 23/45

24 Linéarité ETALON RANITIDINE LINEARITE ETALON MATIERE PREMIERE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 Aire y = ,1067 R 2 = 0, /X/MS/0378 Linéaire (00/X/MS/0378) ,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 24/45

25 Etude de régression SPECIALITE RANITIDINE 3 points 80/100/120% 00/M/MS/0429 Aire moyenne : Concentration moyenne : Coefficient de détermination r 2 = Ecart-type résiduel = SPECIALITE 1530,9646 0,1005 0, ,70563 F calculé F (1;1;0,05) Analyse des variances de régression 729, Au risque alpha de 5%, on conclue que l eistence de la pente est significative 161 t calculé t (1 d.d.l.) Pente B = 15122,4588 Ecart-type de B = 559, , ,314 Ordonnée à l origine A = 11, Ecart-type de A = 56, , ,706 Au risque alpha de 5 %, la différence entre la pente et 0 est significative Au risque alpha de 5%, la différence entre A et 0 est non significative Si la différence entre A et O n'est pas significative, alors on peut conclure que la droite passe par l'origine au risque d'erreur considéré. 25/45

26 Linéarité SPECIALITE RANITIDINE LINEARITE SPECIALITE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/ Aire y = ,375 R 2 = 0, /M/MS/0429 Linéaire (00/M/MS/0429) ,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 26/45

27 Eactitude RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 80% 0, ,2969 0, %-1 0, ,8801 0, % 0, ,9359 0,1216 Teneur réelle (g): 0, /M/MS/0429 SPECIALITE Concentration (g/l) Aire Concentration Recouvrée (g/l) Recouvrement (%) Concentration (g/l) Recouvrement (%) 80% 0, ,9888 0, ,72 0, ,30 100%-1 0, ,8234 0, ,21 0, ,78 120% 0, ,0815 0, ,35 0, ,93 Moyenne (%): 102,09 103,67 27/45

28 Fidélité intermédiaire RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 100%-1 0, ,8801 0, %-2 0, ,3455 0, %-3 0, ,9791 0,1009 C.V. (%) : 0,61 00/M/MS/0429 SPECIALITE Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 100%-1 0, ,8234 0, %-2 0, ,4641 0, %-3 0, ,8700 0,1003 C.V. (%) : 0,34 28/45

29 Superposition des 2 droites ETALON / SPECIALITE RANITIDINE 2000 SUPERPOSITION DES 2 DROITES ETALON / SPECIALITE 1800 y = , Aire y = , /X/MS/ /M/MS/0429 Linéaire (00/M/MS/0429) Linéaire (00/X/MS/0378) ,0200 0,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 29/45

30 Dosage RANITIDINE Dosage de la ranitidine base par HPLC Titre étalon 100,8% Poids moyen SPECIALITE (g) 0,30962 Teneur en eau étalon 0,1% MM ranitidine (g/mol) 314,4 Volume dilution étalon 1000 MM ranitidine (g/mol) 350,9 Volume dilution dosage 8333,33 Masse (g) Aire F.R. Teneur (mg/unité) C.V. (%) F.R. % Etalon 1 0, , ,1% SPE MS/ , , ,40 Etalon 2 0, , ,28 100,6% SPE MS/ , , ,86 Etalon 3 0, , ,3% SPE MS/ , , ,69 Teneur moyenne (ranitidine base) Théorie (mg/unité) = Erreur maimum tolérée = Limite inférieure = Limite supérieure = Teneur (mg/unité) = 150,0 5,0% 142,5 157,5 152,3 30/45

31 EXEMPLE MODELE DE RAPPORT FINAL DE VALIDATION RESTREINTE DOMAINE DE CONCENTRATION Teneur théorique 100 % : 150 mg Points de gamme : 80 % 100 % 120 % PURETÉ DE PIC (sur barrette de diodes) Etalon Pur Impur Spécialité Pur Impur STABILITÉ de la spécialité sur la durée d'analyse Stable Instable EFFET MÉMOIRE Etalon Spécialité EFFET MATRICE EXACTITUDE Oui Non Oui Non Oui Non Limites : 95,0-105,0 % Sur une teneur théorique de 100 % :102,1 % Sur la teneur mesurée : 103,7 % FIDÉLITÉ INTERMÉDIAIRE («Répétabilité») C.V. limite : 2,0 % Etalon : 0,61 % Spécialité : 0,34 % LINÉARITÉ Coefficient de détermination r2 Limite inférieure : 0,98 Etalon Spécialité Analyse de variance de régression Eistence d'une pente significative : Etalon Oui Non Spécialité Oui Non Paramètres de régression Etalon : ordonnée origine A = 4,10 pente B = 14886,93 Spécialité : ordonnée origine A = 11,37pente B = 15122,46 Comparaison des paramètres de régression avec 0 La différence de A avec 0 doit être non significative (au risque d'erreur de 5 %). La différence de B avec 0 doit être significative (au risque d'erreur de 5 %). Etalon : - A ord. Origine Différence significative Différence non significative - B pente Différence significative Différence non significative Spécialité : - A ord. Origine Différence significative Différence non significative - B pente Différence significative Différence non significative Comparaison des paramètres de régression étalon/spécialité Théorie : la différence entre les paramètres de régression doit être non significative. Comparaison des pentes Différence significative Différence non significative Comparaison ordonnées à l'origine Différence significative Différence non significative 31/45

32 AUTRE EXEMPLE Molécule Phloroglucinol Méthode de dosage : HPLC Application de la méthode validée d une spécialité à une autre spécialité de la série génériques 32/45

33 Pureté de pic PHLOROGLUCINOL MATIERE PREMIERE 33/45 SPECIALITE

34 Données brutes PHLOROGLUCINOL RAPPORT DÉTAILLÉ 99/X/MS/1427 ETALON Statistiques de la régression Coefficient de détermination multiple Coefficient de détermination R^2 Coefficient de détermination R^2 Erreur-type Observations 0, , , , ANALYSE DE VARIANCE Degré de liberté Somme des carrés Moyenne des carrés F calculé Valeur critique de F Régression , , , , Résidus 1 95, , Total , /45

35 Données brutes PHLOROGLUCINOL Coefficients Erreur-type Statistique t Probabilité Limite inférieure seuil de confiance = 95% Limite supérieure seuil de confiance = 95% Ordonnée à l'origine, a -24, , , , , , Pente, b 1241, , , , , , ANALYSE DES RÉSIDUS Observation 1 2 Prévisions pour Y 598, , Résidus 3, , CONCLUSION DROITE ETALON Eistence d une pente significative au risque d erreur de 5 % L ordonnée à l origine n est pas significativement différente de 0 au risque d erreur de 5 % 3 907, , /45

36 Linéarité ETALON PHLOROGLUCINOL LINEARITE ETALON MATIERE PREMIERE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 y = 1241,7-24,638 R 2 = 0,998 points de gamme étalon DROITE ETALON Aire ,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800 Concentration g/l 36/45

37 Données brutes PHLOROGLUCINOL RAPPORT DÉTAILLÉ 99/M/MS/1301 SPECIALITE Statistiques de la régression Coefficient de détermination multiple 0, Coefficient de détermination R^2 Coefficient de détermination R^2 Erreur-type Observations 0, , , ANALYSE DE VARIANCE Degré de liberté Somme des carrés Moyenne des carrés F calculé Valeur critique de F Régression , , , , Résidus 1 69, , Total , /45

38 Données brutes PHLOROGLUCINOL Coefficients Erreur-type Statistique t Probabilité Limite inférieure seuil de confiance = 95% Limite supérieure seuil de confiance = 95% Ordonnée à l'origine, a -1, , , , , , Pente, b 1208, , , , , , ANALYSE DES RÉSIDUS CONCLUSION DROITE SPECIALITE Observation 1 2 Prévisions pour Y 601, , Résidus 3, , Eistence d une pente significative au risque d erreur de 5 % L ordonnée à l origine n est pas significativement différente de 0 au risque d erreur de 5 % 3 902, , /45

39 Linéarité SPECIALITE PHLOROGLUCINOL LINEARITE SPECIALITE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/ y = ,0327 R 2 = 0,9985 points de gamme spécialité DROITE SPECIALITE Aire ,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800 Concentration g/l 39/45

40 Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL COMPARAISON DES DROITES DROITE ETALON DROITE SPECIALITE 99/X/MS/ /M/MS/1301 a 1 = -24, a 2 = -1, b 1 = 1241, b 2 = 1208, S2 = 1 95, S 2 = 2 69, Sa 1 = 35, Sa 2 = 29, Sb 1 = 55, Sb 2 = 47, Egalité des variances (F-test) : VERIFIER SI LES 2 VARIANCES SONT IDENTIQUES S 2 1 = S 2 2 F calculé = 1, F = (S 2 2 /S2 1 ) F (0,05;1;1) = 161,4 lu sur table avec S 2 2 >S2 1 Hypothèse H0 : S 2 1 = S 2 2 => F calculé < F fié => CONCLUSION les 2 variances peuvent être considérées comme identiques 40/45

41 Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL Comparaison des pentes b Sb 1 -b 2 = t calculé = 73, , S b1-b2 = (Sb 1 2 +Sb 2 2 ) 1/2 t = (b 1 -b 2 )/S b1-b2 t (0,05;2) = 4,303 lu sur table Hypothèse H0 : b1 = b2 => t calculé < t fié => CONCLUSION les 2 pentes peuvent être considérées comme identiques avec b 1 >b 2 Comparaison des ordonnées à l'origine Sa 1 -a 2 = 46, S a1-a2 = (Sa 1 2 +Sa 2 2 ) 1/2 t calculé = 0, t = (a 1 -a 2 )/ Sa1-a2 t (0,05;2) = 4,303 lu sur table avec a 1 >a 2 Hypothèse H0 : a1 = a2 => t calculé < t fié => CONCLUSION les 2 ordonnées à l'origine peuvent être considérées comme identiques 41/45

42 Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL CONCLUSION COMPARAISON DES DROITES : Les variances ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % Les pentes ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % Les ordonnées à l origine ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % 42/45

43 Superposition des 2 droites ETALON/SPECIALITE PHLOROGLUCINOL SUPERPOSITION DES 2 DROITES ETALON / SPECIALITE 1000 SPECIALITE y = , R 2 = 0, points de gamme spécialité Aire ETALON y = 1241,7-24,638 R 2 = 0,998 points de gamme étalon DROITE SPECIALITE DROITE ETALON 0 0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0, Concentration g/l 43/45

44 Eactitude PHLOROGLUCINOL EXACTITUDE 99/X/MS/1427 ETALON concentration (g/l) aire 80% 0, , %-1 0, , % 0, ,532 99/M/MS/1301 SPECIALITE concentration (g/l) aire concentration recouvrée (g/l) recouvrement (%) biais (%) 80% 0, ,428 0, ,73-1,73 100%-1 0, ,257 0, ,54 0,46 120% 0, ,686 0, ,28-0,28 moyenne (%) : 100,52 44/45

45 Fidélité intermédiaire PHLOROGLUCINOL (REPETABILITE des 3 points étalon et spécialité) Points 100% ETALON 99/X/MS/ %-1 100%-2 concentration (g/l) 0,6281 0,6231 aire 747, ,299 [C] corrigée ETALON (g/l) 0,6217 0,6225 recouvrement (%) 98,98 99,90 100%-3 0, ,569 0, ,30 moyenne : 0, ,73 écart-type : 0,0023 0,68 CV (%) : 0,36 0,68 Points 100% SPECIALITE 99/M/MS/ %-1 100%-2 concentration (g/l) 0,6221 0,6221 aire 744, ,307 [C] corrigée SPECIALITE (g/l) 0,6165 0,6240 recouvrement (%) 99,09 100,30 100%-3 0, ,156 0, ,60 moyenne : 0, ,00 écart-type : 0,0051 0,79 CV (%) : 0,83 0,79 45/45