Patrick Balaguer - IRCM - Institut de Recherche en Cancérologie de Montpellier INSERM U896
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- Jean-Pascal Beauséjour
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1 Lignées cellulaires bioluminescentes et récepteur nucléaire recombinant : deux outils complémentaires pour la compréhension des interactions entre perturbateurs endocriniens et récepteurs nucléaires Patrick Balaguer - IRCM - Institut de Recherche en Cancérologie de Montpellier INSERM U896
2 Récepteurs Nucléaires cibles de molécules environnementales a,b a,b AhR dioxin, HAPs a,b,g a,b,g
3 Méthodes de détection de ligands de récepteurs nucléaires Méthodes in silico ou cristallographiques QSARs Modélisation de la liaison du ligand au récepteur Méthodes In Vitro Biochimiques Liaison à une protéine de transport, à une enzyme, à un récepteur Liaison d un coactivateur ou un corépresseur à un récepteur Méthodes In Vitro Cellulaires Expression de gènes naturels (protéines, enzymes, réponse cellulaire) Expression de gènes rapporteurs (b-galactosidase, luciférases) Méthodes In organo (Cultures organotypiques) Expression de gènes naturels (protéines, enzymes, réponse cellulaire) Méthodes In vivo (souris, poisson-zèbre, xénope) Expression de gènes naturels ou rapporteurs
4 Etude de l activité estrogénique des bisphénols
5 Liaison aux récepteurs des estrogènes des bisphénols
6 Cristallisation de complexes récepteurs nucléaires /perturbateurs endocriniens Purification + EDC Cristallisation Expression dans E Coli Carte de densité électronique Etablissement du modèle Diffraction aux rayons X
7 2 modes de liaison à ERa des bisphénols M421 F404 L391 M421 F404 L391 herα/e2 Y537S T347 A350 herα/bpa wt T347 A350 herα/bpc 3 liaisons H dans la conformation agoniste - - M421 F404 L391 M421 F404 L391 1 nouvelle liaisons H dans la conformation antagoniste T347 Y537S T347 A350 herα/bpaf Y537S T347 A350 herα/bpaf
8 Site Web pour le criblage de perturbateurs endocriniens Predict the binding mode and affinity of any compound to NHRs
9 Modélisation des bisphénols avec les récepteurs nucléaires ERa, ERb, AR et ERRg
10 Cristallisation d autres xénoestrogènes E2 BPA BPC Benzophenone-2 (UV filter) TCBPA HPTE Butylparaben 4-tert-octylphenol α-zearalanol Ferutinine Benzylbutylphthalate Chlordecone
11 Etude des activités «récepteurs nucléaires» d échantillons complexes Echantillons humains (tissu adipeux, sérum) Puberté précoce (F. Paris, CHU, Montpellier) Métabolites A. Riu et D. Zalko, INRA, Toulouse Échantillons alimentaires, naturels (extraits de plantes) Estrogènes partiels (F. Paris, Montpellier) Echantillons environnementaux Selim Aït-Aïssa, INERIS Verneuil en Halatte Hélène Budzinski, LPTC Bordeaux
12 Cabaton et al, Environ Sci Pollut Res Int 2011 (D Zalko INRA) Purification de perturbateurs endocriniens à partir de matrices biologiques Production de ERa, PPARg, PXR Purification des PEs présents dans un échantillon complexe (alimentaire, environnemental, humain, métabolites) Immobilisation sur colonne Identification des PEs par analyse chimique de type Orbitrap, GC-Tof ERa PPARg PXR Riu et al, Food Chem Tox 2008 (D Zalko INRA) Creusot et al, Anal Bioanal Chem 2013 (S Aït-Aïssa, INERIS) Creusot et al, Anal Bioanal Chem 2013 (S Aït-Aïssa, INERIS) Dagnino et al, Environ Toxicol 2012 (H Fenet, Hydrosciences) Riuet al, Env Heath Perspect 2011 (D Zalko INRA) Riu et al, Toxicol Sci 2011 (D Zalko INRA)
13 Groupe de recherche Collaborations Patrick Balaguer (DR2 INSERM) Marina Grimaldi IR CDD CHU Abdel Boulahtouf IE ICM Béatrice Dendélé Post-doc INSERM Vanessa Delfosse, William Bourguet, Jean-Luc Pons, Gilles Labesse CBS, Montpellier Anne Riu, Daniel Zalko, INRA, Toulouse Selim Aït Aïssa, François Brion, Jean-Marc Porcher, INERIS, Verneuil en Halatte Vincent Laudet, IGFL, Lyon Barbara Demeneix, MNHN, Paris Jean-Phillippe Antignac, Ronan Cariou et Bruno le Bizec ONIRIS Nantes Hélène Budzinski, Université Bordeaux Création d une plateforme multi-organismes et multi-sites dédiée à l étude des PEs, la mesure de leur présence et leur identification dans des matrices biologiques, alimentaires et environnementales
14 Merci pour votre attention Patrick Balaguer - IRCM - Institut de Recherche en Cancérologie de Montpellier INSERM U896
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