Colloque d auto-immunité septembre 2010

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1 Colloque d auto-immunité septembre 2010 Evaluation de différents Evaluation de différents tests pour la détection tests pour la détection des anti-mitochondries des anti-mitochondries dans la cirrhose biliaire dans la cirrhose biliaire primitive primitive Dr V. Aubert,

2 Plan de la présentation Rappel de la situation actuelle Evolution des connaissances / techniques Quelle(s) protéine(s)? Synthèse et propositions

3 Aspect clinique de la CBP Maladie autoimmune de l adulte Inflammation chronique et progressive des canaux biliaires intra-hépatiques Maladie chronique cholestatique du foie Fibrose / cirrhose Signes cliniques: Asthénie, prurit, ostéoporose Autres manifestations autoimmunes (Syndrome sec, thyroïdite, arthralgies, Raynaud, sclérodermie)

4 Diagnostic de la CBP Cholestase chronique AMA

5 Diagnostic de la CBP (suite) Signes histologiques 4 stades I : inflammation granulomateuse, nécroses épithéliales II: inflammation étendue aux lobules hépatiques, nécroses hépatocytaires III: processus de cicatrisation, fibrose, cholestase importante IV: cirrhose Signes biologiques Phosphatases alcalines, transaminases, IgM, bilirubine, hypercholestérolémie

6 Ethiologie de la CBP Facteurs infectieux Rejet incomplet, inflammation permanente Mécanismes immuno-allergique Asthme, intolérance médicamenteuse Facteurs génétiques

7 Epidémiologie de la CBP Femmes (90%) > 50 ans Prévalence (20 / ) femme > 40 ans 1 / 1000

8 Les anti-mitochondries (AMA) Figure 51. Diagram of a mitochondrion. Cible: Antigènes sur le complexe multienzymatique de la déshydrogénase des acides -cétoniques (membrane interne)

9 La recherche des AMA Décrit par Walker et al. (1965) Classifiés en 9 types (Berg & Klein, 1992) Anti-mitochondrie Maladies associées Ac (%) M1 cardiolipine Syphilis, LED 96% M2 (PDC) CBP Autres maladies chroniques du foie Sclérose systémique 96% 30% 7-25% M3 Pseudo-LED syndrome (pyrazolone) 100% M4 (sulphite oxidase) CBP (toujours avec M2) < 55% M5 Maladies du collagène Peu fréquent M6 Hépatites (Iproniazide) 100% M7 Myocardite aigüe 60% M8 CBP < 55% M9 (glycogène phosphorylase) CBP 50% d après Bradwell et al., 1999

10 La recherche des AMA cellules Hep-2 lame MSK lame LKS d après Biorad, 2005

11 LKM1 versus AMA Cf. UK NEQAS 0833 : anti-lkm1 sur rein de souris

12 LKM1 versus AMA Cf. UK NEQAS 0833 : anti-m2 sur rein de souris

13 Utilité des AMA Pos si titre > 1/20 Anticorps «utile» car véritable marqueur Ne permet pas de suivre l évolution de la CBP Pas de rôle pathogénique (épiphénomène) Evolution post-transplantation variable A rechercher chez tout patient avec cholestase intrahépatique inexpliquée Rôle pronostique si AMA pos et pas d anomalies des tests biochimiques hépatiques

14 AMA pos en absence de CBP Maladies autoimmunes Maladies infectieuses Autres Hépatite autoimmune (M2) Sclérodermie, CREST (M2) Polyarthrite rhumatoïde (M2, M5) Polymyosite (M5) Syndrome des antiphospholipides (M5) LES (M5) Hépatite virale C (M2) Tuberculose (M2) Lèpre (M2) Syphilis (M1) Lymphome de Hodgkin (M2) Dysglobulinémie (M2) Médicaments (M3,M6)

15 CBP AMA négatives 4 femmes avec caractéristiques histologiques et biologiques de CBP, mais AMA négatives (Brunner & Klinge, 1987) Cholangite autoimmune primitive = cholangiopathie autoimmune Prévalence 5 à < 30% des CBP

16 CBP AMA négatives Hepatology 1997;25: Vergani,D. & Bogdanos,D. Am J Gastro 2003;98(2):

17 CBP AMA négatives Chang Gung Med J 2003;26:323-9 Patients avec AMA négatifs - asymptomatiques - ANA

18 CBP AMA négatives CBP avec AMA négatifs ou AMA positifs même présentation clinique même évolution de la maladie Différence uniquement sur l expression sérologique de marqueurs non spécifiques d organes Problème de sensibilité analytique? Quels ANA?

19 Gp210 Sp100, PML, NDP53 Figure 25. Nuclear pores and nucleolar pattern. Marqueur de la sévérité de la maladie Itoh et al. 1998, J. Gastroenterol. 13: Invernizzi et al. 2001, J. Hepatol. 34: Figure 30. Multiple nuclear dots pattern. d après Bradwell, 2007

20 Antigènes réagissant avec les anticorps anti-nucléaires spécifiques de la CBP d après C.Corpechot, Hôpital St. Antoine, Paris

21 Gp210 protéine associée aux complexes du pore nucléaire Figure 23. Diagram of nuclear membranes and nuclear pore complex. d après Bradwell, 2007

22 CAC (n=174) 99 AMA + 75 AMA - 49 AMA- / M2-26 AMA- / M2 + (34.6%) Sp100 : 27/125(21.6%) 10/49(20.4%) gp210 : 9/125(7.2%) 6/49(12.2%) 13 patients avec anticorps (SLA, F-actine, p-anca) rencontrés dans les HAI IgM élevé IgG élevé Romero-Gomez, M. et al. Am J Gastro 2004;99:

23 Que se cache-t-il derrière le M2?

24 Antigènes des mitochondries - PDC-E2 pyruvate dehydrogenase complex - BCOADC-E2 branched chain oxo-acid dehydrogenase complex - OGDC-E2 oxo-glutarate dehydrogenase complex

25 3 systèmes enzymatiques M2 (2-oxo-acide dehydrogenase complex) Pyruvate déshydrogénase (PDH) d après RL Humbel, LLIP

26 Complexe de la PDH d après RL Humbel, LLIP

27 Complexe de la PDH d après RL Humbel, LLIP

28 Recomposition antigènique

29 CBP AMA négatives Hepatology 2001;34: Construction de E2 des 3 complexes enzymatiques (origine humaine) 191 CBP : 179 AMA pos (94%) versus 161 (84%) par IF 316 sérum de contrôle, tous négatifs 22/30 (73%) AMA négatif sont testés positifs

30 CBP AMA négatives Hepatology 2001;34: CBP : 53% avec ANA pos / sp100 ds 27% et gp210 ds 16% 6/19 (32%) AMA négatif sont testés positifs par immunodot Muratori P. et al. Am J Gastronterol (2003) 98:431-70

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32 13/27 (48.2%) AMA négatifs sont testés positifs

33 PBCScreen ELISA Sensibilité: AMA 61% PBCScr. 76.5% Spécificité: AMA 98.2% PBCScr. 98.2% Bizzaro N. et al. 2008

34 Evaluation de différents dots «M2»

35 Marqueurs et techniques utilisés Immunofluorescence AMA (Hep-2/MSK/KLS) Dot nucléaires (Hep-2) Membrane nucléaire (Hep-2) ELISA MIT3 PBCscreen sp100 Dots M2 refolded / OGDC / BCOADC / PDC PDC native (RLH)

36 Evaluation rétrospective CHUV N=72 14 ANA homogène et cytoplasme 7 AMA (MSK) pos. 14 dots nucléaires (Hep-2) 37 CBP connues Dot D-Tek (alphadia) IgG M2 refolded / OGDC / BCOADC / PDC Sérum (10 l ds 1,5 ml diluant) Test sandwich IgG-PA 2x 30 min.

37 Exemples de lecture de résultats ( <= 5 NEG ; >10 POS)

38 Discordances observées groupes n IF (AMA) ELISA (Mit3) Dot 14 ANA hom/cyto 2 nég nég pos 7 AMA (MSK) 4 pos nég pos 1 pos nég nég 14 dots nucléaires 2 nég nég pos 1 nég pos pos 37 CBP 2 pos nég pos 2 nég nég pos 14/72 (19.4 %) 7 discordances (1 pos et 3 nég) internes aux 4 dots

39 Représentation des dots par groupe M2 refolded 14 Hom /cyto 0 1 OGDC BCOADC PDC M2 refolded 14 dots nucléaires 0 2 OGDC BCOADC PDC M2 refolded 7 AMA OGDC BCOADC PDC M2 refolded 37 PBC OGDC BCOADC PDC

40 Représentation des profils de dot par groupe M2 refolded OGDC BCOADC PDC Hom/cyto AMA Dot nucl. CBP

41 M2 refolded versus PDC native groupes n M2 refolded PDC native commentaires ANA hom/cyto 1 1 nég pos nég pos AMA (MSK) 4 pos nég Mit3 et PBCscreen nég; 3 avec les 3 dots nég; pas de notion de CBP confirmée 1 nég nég Dots nucléaires 2 pos pos 1 pos nég Mit3 nég et PBCscreen pos (cf. IF) CBP 3 pos nég 1 CBP avec M2 refolded pos uniquement 1 CBP avec Mit3 et PBCscreen nég 1 CBP avec Mit3 nég et PBCscreen pos 1 pos pos CBP avec AMA, Mit3 et PBCscreen nég

42 Evaluation CHUV Sensibilité spécificité MIT3 32/37 (86%) 31/35 (88%) M2 refolded 36/37 (97%) 24/35 (68%) PBCscreen 34/37 (92%) 27/35 (77%) Invernizzi P. et al. Hepatology (1997) 25: Muratori P. et al. Am J Gastronterol (2003) 98: Moteki S. et al. Hepatology (1996) 23: Gabeta S. et al. J of Clin Immunol. (2007) 27:378-87

43 Aspect d une CBP sur KLS et Hep-2 KSL 1:40 NEG HEP-2 1:80 Moucheté, dot nucléaire, cytoplasme positif filamenteux 4 dots nég Mit3 ELISA nég PBCscreen pos AMA MSK pos Dot PDC native RLH pas réalisé

44 Aspect sur KLS et Hep-2 KSL 1:40 ANA pos M2 refolded dot pos PDC native dot RLH pos Mit3 ELISA nég PBCscreen nég AMA MSK nég HEP-2 1:80 Homogène, cytoplasme positif M2? Anamnèse d accident vasculaire M5?

45 ANA avec dots nucléaires KSL 1:40 ANA nég (quelques points fluorescents) M2 refolded dot pos PDC native RLH nég Mit3 ELISA nég PBCscreen pos AMA MSK nég HEP-2 1:80 Dots nucléaires, cytoplasme nég Hodgkin

46 Conclusions 14 /72 (19%) de discordances M2 refolded plus sensible et moins spécifique PDC native (RLH) meilleure spécificité que M2 refolded OGDC trop peu sensible (pas utile) Pas de «gold standard» MIT3 ou PBCscreen pourrait être proposés comme test de dépistage