ScanGel NEUTRAL Cartes Cartes
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- Fernande Dupont
- il y a 7 ans
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1 ScanGel NEUTRAL Cartes Cartes GEL NEUTRE Epreuve sérique ABO, recherche d anticorps irréguliers, compatibilité IVD Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d assurance qualité de la réception des matières premières jusqu à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l objet d un contrôle de qualité et n est commercialisé que s il est conforme aux critères d acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 11
2 I - UTILISATION ET PRINCIPE DU TEST Cette carte est strictement réservée à des usages professionnels et diagnostiques in vitro. Destiné à la réalisation de l'épreuve sérique du groupage ABO, à la recherche (dépistage et identification) des anticorps irréguliers anti-érythrocytaires et à l épreuve de compatibilité, le test associe les principes d'agglutination et de filtration sur gel. La réaction est obtenue et lue après centrifugation de microtubes spécialement conçus, remplis de gel neutre. La suspension de globules rouges et le sérum ou le plasma à tester sont déposés dans la cupule des microtubes et centrifugés après une période d'incubation. Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du microtube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel en fonction de leur taille. Leur position dans le gel détermine l'intensité de la réaction II - CARACTÉRISTIQUES DES RÉACTIFS Les microtubes de la carte ScanGel NEUTRAL contiennent du gel neutre. Ce réactif contient de l'azide de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. Le code produit et le nombre de cartes par boîte sont mentionnés sur l'étiquette de la boîte. III - CONSERVATION - VALIDITÉ La date limite d utilisation et les conditions de stockage sont indiquées sur la boîte. Les cartes doivent être conservées à température ambiante de +15 C à +25 C. Les cartes doivent être stockées verticalement à l abri de toute source de chaleur dans un local où température et hygrométrie sont peu variables. IV - AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS La fiabilité des résultats dépend de la bonne exécution des Bonnes Pratiques de Laboratoire suivantes : Ne pas utiliser de réactifs au delà de la date de péremption indiquée sur l étiquette. Ne pas utiliser de cartes montrant des signes de dessèchement, des bulles, une languette de scellage endommagée ou partiellement enlevée. 12
3 Il est indispensable de prendre les précautions nécessaires pour ne pas provoquer de contaminations inter-microtubes et ce, particulièrement lors des étapes de distribution. Utiliser un embout de pipette différent pour chaque échantillon et chaque globule rouge test. Vérifier la précision et le bon fonctionnement des pipettes et autres équipements. Porter des gants lors de la manipulation de réactifs et d échantillons. Ne jamais pipeter directement à la bouche. Eviter les éclaboussures. En cas d éclaboussures, nettoyer avec de l eau de javel à 12 Cl diluée au 1/10, et essuyer avec un papier absorbant. Le matériel utilisé pour nettoyer devra être jeté dans un container pour résidus contaminés. Les consommables et produits ayant été en contact avec les échantillons de patients ou des réactifs d origine humaine ne doivent être éliminés qu après décontamination. Les fiches de sécurité sont disponibles sur demande. V - RECUEIL ET TRAITEMENT DES ÉCHANTILLONS Le sang doit être prélevé aseptiquement dans un tube sans ou avec anticoagulant (EDTA, CPD). Le test doit être pratiqué le plus tôt possible après le recueil. Les échantillons qui ne peuvent être analysés rapidement devront être conservés entre +2 C et +8 C et testés dans un délai de 48 heures. En aucun cas une hémolyse ne doit être visible. Ne pas chauffer les échantillons. VI - TECHNIQUES Matériel fourni Cartes ScanGel NEUTRAL Autre matériel nécessaire non fourni Incubateur : ScanGel Incubator Centrifugeuse : ScanGel Centrifuge IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie IH QC 4 x 6 ml Pipettes automatiques ou semi-automatiques Embouts de pipette Tubes à usage unique Récipient pour déchets à risques biologiques Eau de Javel Gants latex Lunettes de sécurité Papier absorbant 13
4 Contrôles Il est recommandé d effectuer en parallèle à chaque test un auto-contrôle (sérum ou plasma et globules rouges du patient) pour le dépistage et l identification d anticorps irréguliers. Témoin positif (sérum ou plasma connu, contenant au moins un anticorps) et témoin négatif (sérum ou plasma connu ne contenant aucun anticorps). IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie. Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation (2000 g x 2 minutes) séparer le sérum ou le plasma des globules rouges de l'échantillon à tester. Lorsque le sang est prélevé sur tube sec, le sérum doit être recentrifugé à 1500 g pendant 10 minutes. 1 - Epreuve sérique du groupage ABO Réactifs nécessaires non fournis ReverScan A1, A2, B et O : globules rouges test prêts à l'emploi pour l'épreuve sérique du groupage ABO ReverScan A1, B x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O x 5 ml Technique Utiliser les globules rouges test prêts à l'emploi ReverScan A1, A2, B ou O. 1. Identifier chaque carte ou partie de carte (suivant le nombre d hématies test utilisées pour chaque échantillon) par le nom ou le numéro d'échantillon correspondant. Identifier pour chaque microtube le globule rouge test à distribuer. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges test dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter 50 µl de sérum ou de plasma à tester dans la cupule de tous les microtubes correspondants à l échantillon testé. 4. Incuber 15 minutes à température ambiante (+15 C C). 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. 14
5 2 - Dépistage et identification d'anticorps irréguliers antiérythrocytaires en technique enzymatique 2 temps Réactifs nécessaires non fournis Papaïne Bio-Rad Papaine 2 ml ScanSol : milieu de suspension des globules rouges ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml ScanCell P, ScanPanel P : globules rouges test prêts à l'emploi prétraités à la papaïne, pour le dépistage et l'identification des anticorps irréguliers antiérythrocytaires en technique enzymatique 2 temps ScanCell P 3 x 10 ml ScanPanel P 10 x 3 ml a) Papaïnisation et préparation de la suspension des globules rouges lorsque ceux-ci ne sont pas prêts à l emploi (autocontrôle) Laver 3 fois en solution saline isotonique les globules rouges. Ajouter volume à volume la papaïne reconstituée et le culot globulaire. Mélanger. Incuber 7 minutes à +37 C au bain-marie. Il est important de respecter strictement ce temps de contact entre les hématies et la papaïne. Laver 3 fois en solution saline isotonique. Distribuer 1 ml de ScanSol dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl de culot globulaire papaïné lavé. Mélanger. La suspension de globules rouges peut être utilisée pendant une semaine. Elle devra être conservée entre +2 C et +8 C. b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte (suivant le nombre de globules rouges test utilisés pour l échantillon) par le nom ou le numéro d'échantillon correspondant; identifier pour chaque microtube le globule rouge test à distribuer. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges tests prêts à l'emploi ScanCell P ou ScanPanel P, ou la suspension de globules rouges préparée en 2-a) dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma à tester dans la cupule de tous les microtubes correspondants à l échantillon testé. En aucun cas le délai entre la distribution des globules rouges test et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 4. Incuber 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 15
6 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. 3 - Epreuve de compatibilité A. Technique enzymatique 2 temps Réactifs nécessaires non fournis Papaïne Bio-Rad Papaine 2 ml ScanSol : milieu de suspension des globules rouges ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml a) Papaïnisation et préparation de la (des) suspension(s) de globules rouges (donneur(s)) Pour chaque donneur : Laver 3 fois en solution saline isotonique les globules rouges à tester. Ajouter volume à volume la papaïne reconstituée et le culot globulaire (globules rouges du donneur). Mélanger. Incuber 7 minutes à +37 C au bain-marie. Il est important de respecter strictement ce temps de contact entre les hématies et la papaïne. Laver 3 fois en solution saline isotonique. Distribuer 1 ml de ScanSol dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl de culot globulaire papaïné lavé. Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte par le nom ou numéro du receveur et le numéro du (des) donneur(s) correspondant(s). Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges préparée en 3-A. a) dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma du receveur dans la cupule des microtubes appropriés. En aucun cas le délai entre la distribution des suspensions de globules rouges et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 4. Incuber 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. 16
7 B. Technique enzymatique 1 temps Réactifs nécessaires non fournis ScanLiss : milieu de suspension des globules rouges ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanBrom : Broméline prête à l emploi ScanBrom 12 ml a) Préparation de la (des) suspension(s) de globules rouges (donneur(s)) Pour chaque donneur : Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl de culot globulaire du donneur. Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte par le nom ou numéro du receveur et le numéro du ou des donneurs correspondants. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges préparée en 3- B. a) dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma du receveur dans la cupule des microtubes appropriés. En aucun cas le délai entre la distribution des suspensions de globules rouges et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 4. Ajouter 25 µl de ScanBrom dans la cupule de chaque microtube. 5. Incuber immédiatement 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 6. Centrifuger immédiatement 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. En aucun cas le délai entre la fin de l incubation et le début de la centrifugation ne doit dépasser 10 minutes. 7. Lire les réactions. VII - RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION La présence d'agglutinats (en surface ou dispersés dans le gel) ou d une hémolyse dans un microtube correspond à un résultat positif indiquant que l'échantillon testé contient au moins un anticorps correspondant aux antigènes présents à la surface des globules rouges testés. Un culot de globules rouges collectés au fond du microtube et l absence d hémolyse correspond à un résultat négatif indiquant que l'échantillon testé ne contient pas d'anticorps, correspondant aux antigènes présents à la surface des globules rouges testés, détectable dans la technique utilisée. Les résultats sont valides uniquement si les témoins positif et négatif donnent les résultats attendus. 17
8 1 - Epreuve sérique du groupage ABO Le groupage ABO comporte obligatoirement 2 épreuves complémentaires : l'épreuve globulaire réalisée avec les réactifs anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) et éventuellement anti-abo3 (AB) et l'épreuve sérique réalisée avec les globules rouges test A1 et B, et éventuellement A2 et O. Les profils des résultats attendus avec les réactifs anti-abo1 (A), anti-abo2 (B), anti-abo3 (AB) et les globules rouges test A1, A2, B et O ainsi que leurs interprétations sont détaillés dans le tableau suivant : GROUPE S ÉPREUVE SÉRIQUE : ÉPREUVE GLOBULAIRE : RÉACTIFS GLOBULES ROUGES TEST Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O L'épreuve globulaire et l'épreuve sérique doivent être concordantes. Toute divergence entre les épreuves globulaires et sériques doit être résolue avant de rendre un résultat. A chaque fois qu'une divergence entre les épreuves globulaire et sérique est observée, des tests complémentaires avec des contrôles appropriés doivent être effectués. 2 - Dépistage et identification d'anticorps irréguliers antiérythrocytaires en technique enzymatique 2 temps Un résultat négatif (absence d'agglutination et d'hémolyse) dans chacun des microtubes utilisés signifie que l échantillon testé ne contient pas d'anticorps, correspondant aux antigènes présents à la surface des globules rouges test, détectable dans la technique utilisée. Un résultat positif (agglutination et/ou hémolyse) dans un des microtubes prouve au contraire la présence d'un ou plusieurs anticorps dans le sérum ou le plasma. Une identification de cet (ces) anticorps doit être alors réalisée. Un résultat positif dans le microtube auto-contrôle peut indiquer la présence d'un auto-anticorps. Si en plus de l'auto-contrôle au moins un des globules rouges test est agglutiné, un mélange auto-anticorps/allo-anticorps doit être envisagé. Seuls les anticorps correspondant aux antigènes présents sur les globules rouges test peuvent être détectés. Dans le cadre d une identification, l analyse comparée entre les réactions positives et les réactions négatives observées avec chacun des globules rouges test du panel utilisé, permet de caractériser, à l aide de la fiche d analyse jointe au panel, la ou les spécificité(s) des anticorps présents dans le sérum (ou plasma) testé. 18
9 3 - Epreuve de compatibilité Un résultat positif (agglutination et/ou hémolyse) dans un des microtubes utilisés démontre l'existence d'une incompatibilité entre le sérum ou le plasma du receveur et les globules rouges du donneur. VIII - PERFORMANCES 1 - Epreuve sérique du groupage ABO Les hématies ReverScan (A1, A2, B, O) ont été évaluées sur un panel de 1132 échantillons. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique plaque, tube, microplaque ou gel filtration. Sur l ensemble des échantillons,1130 ont donné des résultats conformes à ceux attendus et 2 ont présenté des discordances avec une des méthodes utilisées en parallèle, qui ont pu être levées après confrontation avec l épreuve globulaire. Quel que soit l échantillon testé, les hématies ReverScan associées à la carte ScanGel NEUTRAL présentent une bonne reproductibilité aussi bien en intra qu en inter-essais. 2 - Dépistage et identification d'anticorps irréguliers antiérythrocytaires en technique enzymatique 2 temps L évaluation des performances réalisée sur 2517 échantillons (1783 patients et 734 donneurs) a mis en évidence une réactivité équilibrée entre sensibilité et spécificité. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique immunoadhérence ou gel filtration. Le pourcentage de patients tout-venant trouvés positifs en recherche d anticorps irréguliers (dépistages positifs ayant abouti à l identification d un ou plusieurs allo et/ou auto-anticorps) est de 3,8 %. La spécificité sur un échantillonnage de patients tout-venant est de 98,8%. Certains antigènes tels que MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fy a ), FY2(Fy b ) et XG1(Xg a ) étant détruits ou altérés lorsque les globules rouges sont traités avec des enzymes protéolytiques, la technique enzymatique ne peut pas être utilisée comme seule technique pour la recherche d anticorps irréguliers anti-érythrocytaires. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. 3 - Epreuve de compatibilité L évaluation des performances a donné des résultats concordants avec le réactif utilisé comme référentiel. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique gel filtration. 19
10 Quelques incompatibilités n ont pu être mises en évidence par ce seul test mais l ont, par contre, été par le test indirect à l antiglobuline en technique ScanGel. De plus, certains antigènes tels que MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fy a ), FY2(Fy b ) et XG1(Xg a ) sont détruits ou altérés quand les globules rouges test sont traités avec des enzymes protéolytiques. La technique enzymatique ne peut donc pas être utilisée comme seule technique pour l épreuve de compatibilité. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. LIMITES Des résultats anormaux peuvent être provoqués par : une contamination bactérienne ou chimique du sérum, du plasma, des globules rouges ou du matériel. une médication ou un état pathologique du patient donnant une réaction croisée. une préparation des globules rouges différente de celle préconisée. une remise en suspension incomplète des globules rouges. l'utilisation d un milieu de suspension des globules rouges autre que celui préconisé. une hémolyse des échantillons ou des globules rouges test. la présence de fibrine (image d'un culot cellulaire compact au fond d'un microtube accompagné d'une fine bande rosée en haut du gel correspondant aux globules rouges retenus par les résidus de fibrine). une dégradation de l activité enzymatique de la bromeline ou de la papaïne pour les techniques enzymatiques (non respect des consignes de conservation). une contamination inter-microtubes. tout autre usage que celui décrit dans cette notice. Sous licence de DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suisse 20
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12 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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