Chromosome 6: Région HLA
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- Matthieu Larivière
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1 Transplantation rénale Bilan d Histocompatibilité C Suberbielle Boissel Laboratoire Régional d Histocompatibilité PARIS Chromosome 6: Région HLA DP DQ DR 21oh C4 Bf C2 hsp TNF B C A HLA Classe II 32 gènes HLA classe III HLA classe I 17 gènes B1 B3 B4 B5 A DR 3,5,6 DR 4,7,9 DR 2 DR 1,8, Kb 6p21.3 Polymorphisme Liaison étroite Codominance 1
2 Nomenclature HLA générique A1 A43 B5 B42 B62(15) DR1 DQ1 A2 A66(10) B7 B44(12) B63(15) DR2 DQ2 A3 A68(28) B8 B45(12) B64(14) DR3 DQ3 A9 A69(28) B12 B46 B65(14) DR4 DQ4 A10 A74 B13 B47 B67 DR5 DQ5(1) A11 A80 B14 B48 B70 DR6 DQ6(1) A19 B15 B49(21) B71(70) DR7 DQ7(3) A23(9) B16 B50(21) B72(70) DR8 DQ8(3) A24(9) B17 B51(5) B73 DR9 DQ9(3) A25(10) B18 B52(5) B75(15) DR10 A26(10) B21 B53 B76(15) DR11(5) A28 B22 B54(22) B77(15) DR12(5) A29 B27 B55(22) B78 DR13(6) A30(19) B35 B56(22) B81 DR14(6) A31(19) B37 B56(17) B82 DR15(2) A32 B38(16) B58(17) B83 DR16(2) A33 B39(16) B59 DR17(3) A34(10) B40 B60(40) DR18(3) A36 B41 B61(40) HLA C: 1 à 18, 10 définis par sérologie, nombreux sous types HLA DP: 9 définis par sérologie, nombreux allèles MIC A Définitions Patient «non immunisé» Patient sans événement immunisant. Homme ou enfant jamais greffé ni transfusé? Patient non répondeur Absence de détection d Ac anti HLA Vérifier la spécificité et la sensibilité de la technique Vérifier que des sérums informatifs ont été testés Patient immunisé Détection d Ac identifiés comme anti HLA par le biologiste Dans au moins un sérum Quelque soit la technique Ac anti HLA/ Réactivité anti HLA faible/ Ag permis 2
3 Bilan d histocompatibilité Bilan Receveur: Routine Bilan Donneur: Urgence Typage HLA A,B, DR, DQ Ac anti-hla Ag permis Suivi de désensibilisation Typage HLA A, B, DR DQ Vérifier l absence d Ac anti HLA anti donneur (DSA) Cross-match Suivi Prélèvements tous les 3 mois +J14 J30 post transfusion GREFFE Suivi post greffe 1 par an Crossmatch Rejet? DSA? EP? Suivi DSA: 6 sérums A adapter aux cas particuliers: désensibilisations, assistance circulatoire 3
4 Confrontation des typages donneur / receveur Détermination du nombre d incompatibilités R: A01 A02 B08 B44 DR03 DR04 D1: A01 A02 B08 B44 DR03 DR04 6 Id 0 MM D2: A01 A29 B08 B44 DR03 DR04 5 Id 1 MM D3: A01 A - B08 B44 DR03 DR04 5 Id 0 MM Ces incompatibilités sont t-elles des Ag permis ou interdits? Ac anti HLA :Différents cas de figure Cible: HLA I (ABC), HLA II (DR DQ DP), Non HLA( auto Ac MICA AECA) Temps: Pré transplantation (historique, récent, du jour) Post transplantation Isotype: IgG, IgM, IgA Techniques: LCT ELISA Micro array Luminex FACS Affinité Quantification : Titre (LCT), DO (ELISA), MFI (Luminex) Stratégie fréquente: Dépistage: ELISA/Luminex Identification: LCT +/- ELISA/Luminex CXM: LCT Cytométrie 4
5 Identification des Ac Anti HLA Sérum du patient testé contre un panel d antigènes HLA LCT: Panel de lymphocytes Deux types d information PRA: % de cellules positives dans le panel Ac identifiés calculés par corrélation statistique Techniques utilisant des Ag HLA purifiés ELISA: Ag fixés dans des puits Luminex: Ag fixés sur des billes Identification d Ac anti HLA de classe I et II Techniques Haute Définition: 1 Ag par puits ou bille Micro array ELISA SOLID PHASE ASSAY Purified single donor HLA antigens are immobilized on chips One chip in one well in a 96-wells microplate DONORS PANELS HLA Class I 90 Single Donor Antigens HLA Class II 37 Single Donor Antigens 5
6 Ac anti HLA de classe I par Luminex Single Antigen MFI 1000 Nouveaux problèmes: Seuil de positivité HLA C Sous types HLA MFI 300 6
7 Hyperimmunisé MFI 5000 MFI 1000 Ac anti HLA de classe II par Luminex Single Antigen
8 Les problèmes: Ac positifs faibles, Ac anti DP Stratégie d étude des patients immunisés en Ac anti HLA Récapituler HLA premières greffes Ac anti HLA de classe I identifiés par LCT Ac anti HLA de classe II Antigènes permis I et II par technique SA sur pics et dernier sérum +/- Ag permis par LCT sur panel élargi Réunion clinico biologique: modalités de greffe : Ag permis, CXM historique positif, désensibilisation Quel suivi HLA en attendant la greffe Risque acceptable lors de l urgence Noter les décisions dans le dossier clinique et au labo HLA de façon précise Intérêt de Cristal pour une saisie d Ag permis et interdits 8
9 Gradation des risques Patient non greffé non transfusé homme ou enfant Patient sans Ac détectés bien suivi technique sensible Patient immunisé bien suivi sans Ac contre le greffon (LCT ELISA Luminex) Patient immunisé sans DSA détecté mais suivi insuffisant ou de sensibilité insuffisante Patient avec DSA: prises de risque volontaires à DISCUTER Date à laquelle on identifie l Ac : historique ou sérum du jour Type d Ac réaction LCT/ Luminex MFI Degré de mismatch donneur receveur A part : apparition de DSA en post greffe Smith, J. D., Hamour, I. M., Banner, N. R. & Rose, M. L. C4d Fixing, Luminex Binding Antibodies A New Tool for Prediction of Graft Failure After Heart Transplantation. American Journal of Transplantation 7 (12), DSA- DSA - DSA+ C4d - DSA+ DSA+ C4d + 9
10 Hypothèse d évolution des rejets médiés par Ac Stages I to II : Stage III : Stage IV : Accommodation, (reversible) Subclinical humoral rejection CHR. At any stage, the antibody/c4d may become negative (process inactive) Colvin Am J Soc Nephrol 2007 Conclusion: En pratique Typage HLA et recherches d Ac selon recommandations Greffe en l absence d Ac /Ag permis En cas de nécessité : prise de risque LES PRISES DE RISQUE NE SONT PAS EQUIVALENTES, A DISCUTER AVEC LE LABORATOIRE Cross-match indispensable Suivi post greffe 10
www.gbo.com/bioscience 1 Culture Cellulaire Microplaques 2 HTS- 3 Immunologie/ HLA 4 Microbiologie/ Bactériologie Containers 5 Tubes/ 6 Pipetage
2 HTS 3 Immunologie / Immunologie Informations Techniques 3 I 2 ELISA 96 Puits 3 I 4 ELISA 96 Puits en Barrettes 3 I 6 en Barrettes de 8 Puits 3 I 7 en Barrettes de 12 Puits 3 I 8 en Barrettes de 16 Puits
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