Les ANCA au laboratoire
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- Germain Bernard
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1 Les ANCA au laboratoire Yves Renaudineau, PU-PH Laboratoire d Immunologie et Immunothérapie EA2216 Immunologie, Pathologie et Immunothérapie CHU Morvan, Brest Club des jeunes néphrologues, 15 mars 2013
2 Découverte Foie de rat PNN humains AAN AAN ANCA Davies et al, 1982 Van der Woode et al, 1985
3 I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
4 Technique Antigène 1- PNN humains Fixation (éthanol, formol ) Conservation Ac sérique Antiglobuline Fluorescente 2-Sérum/Plasma Seuil de positivité 1/20 ème Phénomène de pro-zone 3-Antiglobuline (IgG+++) 4-Contrôles de qualité internes
5 ANCA 13,6% positifs - 46% vascularites à ANCA - 54% autres pathologies ANCA PNN/éthanol Fluorescence cytoplasmique Fluorescence périnucléaire c-anca 5,8% positifs - 37% vascularites - 63% autres pathologies Fluorescence cytoplasmique PNN/formol-acetone Fluorescence (péri)nucléaire p-anca 7,8% positifs - 54% vascularites - 46% autres pathologies NANA (nuclear associated neutrophil Ab) Deguillaume, IBS, 2006
6 HOUSTON... WE HAVE A PROBLEM
7 formes atypiques (>25% des ANCA positifs) canca atypiques canca atypiques AAN+ Fluorescence nucléaire? HEp-2 Monocytes
8 I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
9 1-Repos 2-Facteur déclenchant 5-Lésions Endothéliales Infection, génétique, envirronnement Cytokines (IL8) C 2-Adhésion 4-Dégranulation par les ANCA et complément 3-Activation des PNN Récepteurs pour antigènes du PNN
10 Granules I II gélatinase Surface PR3 MPO Lamp1 PR3 PR3 NB1+Mac1??? Lamp1 BPI Elastase Cat. G Lysozyme Lys. Lysozyme Lactoferrine Etc...
11 Cas particulier des anti-pr3 Discordance IFI/ELISA: quantitative et qualitative Sensibilité c-anca (85%) > anti-pr3 (60-65%) > deux (55-60%) Structure 3D Deux formes Epitopes masqués
12 ANCA PNN/éthanol Fluorescence cytoplasmique Fluorescence périnucléaire c-anca+ p-anca PNN/formol-acetone Fluorescence (péri)nucléaire +/- anti-pr3 anti-mpo NANA (titration sur PNN/Ethanol) Si négatif anti-lf, -BPI, -elastase, cathepsine G, etc Si AAN (HEp-2) négatifs
13 C-ANCA+ PR3+ 33% Granulomatose avec polyangéite MPO+ 0 BPI+ 22% infections (pneumopathies à Pyo) cholangites sclérosantes GAP (qq cas) Divers* 15% P-ANCA+ PR3+ 6% GAP, (MICI qq cas) MPO+ 65% G. éosinophilique avec polyangéite GN pauci-immunes, Goodpasture BPI+ 5% rhumatismes, lymphome B, Divers* 13% rhumatismes, infections NANA Aucune spécificité Colite ulcérative, Crohn, RCH *Cathepsine G, élastase, lactoferrine
14 I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
15 Importance du contexte clinique+++ Granulomatose avec polyangéite G. éosinophilique avec polyangéite Polyangéite microscopique Glomérulonéphrite nécrosante focale Sensibilité 85% 40-66% 81% 82% ANCA Spécificité 95% 75% Horton Takayasu Témoins normaux Témoins malades <5% <5% 2% 23% Hagen, Kidney Int, 1998
16 Suivi des patients c-anca GAP - Corrélation imparfaite taux ANCA(PR3)/clinique - > Anapath p-anca SCS - Si ANCA+ risque rechute 20% à 5ans - Favoriser l ELISA pour le suivi
17 Syndrome pneumorénale de Goodpasture Anti-GBM antibodies Syndrome des Ac anti-gbm ANCA/MPO retrouvés 1/3 des cas Formes plus sévères Evolution favorable après traitement MBG panca/mpo Anti-GBM Luque-Paz, Autoantibodies, 2013 Serratrice, AJKD, 2004
18 ANCA et autres pathologies Maladies inflammatoires chroniques du TD (rectocolite hemorragique, Crohn) NANA (PR3+) Hépatites auto-immunes panca/ NANA Infections P.aeruginosae dans mucoviscidose canca atypiques (BPI+)
19 take home messages - Faible prévalence des ANCA/PR3/MPO en pratique (<15%) - De nombreuses interférences (<50% vascularites à ANCA) - Nécessiter d avoir des techniques de confirmation malgré les limites (anti-pr3) - Importance du contexte clinique - Faible relation entre le titre des ANCA et l évolution de la maladie - Importance du dialogue (biologistes/cliniciens/anatomopathologistes/industriels)
20 Remerciements CHU de Brest - Laboratoire d immunologie/ea2216 Immunologie Pathologie - Service de Néphrologie - Service de Rhumatologie CHG St Malo - Service de Néphrologie Conflits d intérets: non
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