La leucémie lymphoïde chronique (LLC)
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- Alexandre Charbonneau
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2 La leucémie lymphoïde chronique (LLC) La plus fréquente des hémopathies : 3 nouveaux cas / habitants / an Pas de facteur favorisant connu Adultes âgés (>65 ans), sexratio = 2/1 Accumulation de lymphocytes B clonaux dans le sang, la moelle osseuse, les organes lymphoïdes Lymphocytes B particuliers : CD19+/CD5+ Cellules matures, mémoire ou naïves Avec ou sans mutation des gènes des chaînes lourdes des immunoglobulines
3 Traitements actuels Chez les patients présentant une forme agressive Ciblage des cellules tumorales par anticorps anti-cd20 (Rituximab) associé à la Fludarabineet au Cyclophosphamide Essais de ciblage par anti-cd52 (Campath), toxicités importantes Permettent de réduire considérablement la masse tumorale Réemergence des cellules malignes Recherche de thérapies adjuvantes en fin de première ligne
4 Voies de recherche Basées sur les caractéristiques des cellules B tumorales En prenant en compte le caractère clonal de la prolifération : les cellules présentent un idiotope homogène, «signature» de la tumeur Hypothèse séduisante d une vaccination anti-tumorale Ciblant l idiotope anormal En surmontant le déficit immunitaire associé à la LLC Après élimination de la majorité de la masse tumorale En permettant une accessibilité aux territoiressanctuaires
5 Caractéristiques des lymphocytes B de la LLC
6 Clone de cellules B CD5+ CD23 CD19 + CD5 + CD19 CD5 COOH CD23 + CD20 lo CD22 lo/- CD79 lo/- ITAM CD22 NH2 sig lo/- CD20 or BCR ITIM ITIM ITAM ITIM ITIM
7 Les cellules de la LLC sont proches des lymphocytes B1 CD19/CD5/CD23 +/- /CD43 lo Prédominants à la naissance Persistants dans le péritoine, les amygdales et la rate Chez l adulte : 10 à 25% des cellules B périphériques De 1 à globules blancs Cellules de l immunité innée
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9 Production spontanée d anticorps indépendamment de signaux T IgMde faible affinité, potentiellement autoréactives Implication dans les stigmates autoimmuns des LLC? Fonctions régulatrices identifiées plus récemment Implication dans le déficit immunitaire des LLC?
10 Stimulation T-indépendante Autres stimuli possibles Récepteurs de l immunité innée Pattern recognition receptorsprr : Toll-like Receptors TLR C-type lectine Receptors CLR NOD-Like Receptors NLR Stimulation par les antigènes de l environnement Essentiellement microbiens Pathogen-associated microbial patterns PAMPS
11 Dix TLRs ont été identifiés chez l homme Ils reconnaissent des PAMPs spécifiques Lipopeptide Peptidoglycanes + lipoprotéines + lipopeptides dsarn viral LPS +. Acide lipoteichoique Flagelline ssarn + imidazoquinolines Lipoprotéines ssrna + imidazoquinolines CpG non méthylés (ADN bactérien)?
12 Expression des TLR Sur les monocytes/macrophages Sur les cellules dendritiques Sur les lymphocytes B Lymphocytes B normaux Lymphocytes B1? Lymphocytes B de LLC?
13 TLR et cellules de LLC Identification de l expression d ARNm de TLR Quelques travaux sur l expression protéique en cytométrie de flux Grandjenette SANG AMYGDALES LLC 2 0 TLR-2 TLR-3 TLR-4 TLR-6 TLR-7 TLR-9 TLR-10
14 TLR, immunité innée et immunité adaptative TLRs-PAMPs recognition Activation of naive T-cells/ TH-1 Expressionof costimulation and presentation molecules Effet sur les propriétés de présentation des antigènes des lymphocytes B?
15 Expression de TLR-7 et TLR-9 Ligands synthétiques disponibles Imidazoquinolines Imiquimod Oligonucléotides C poly G : CpG ODN Utilisables pour tester la fonctionnalité des TLR en ciblant les cellules de LLC
16 Pas de différence entre les B CD19+/CD5- Patients Sujets contrôles CD19-PC7 CD19-PC7 CD19+/CD5+ CD5-PC5 CD19+/CD5- CD19+/CD5- CD19+/CD5+ MFI relatives Sujets sains Patients atteints de LLC-B 0 TLR-7 TLR-9 TLR-10 CD5-PC5
17 Différence caractéristique des cellules tumorales CD19+/CD5- CD19+/CD5+ Sujets sains Patients Sujets contrôles CD19-PC7 CD19-PC7 CD5-PC5 CD19+/CD5- CD19+/CD5+ MFI relatives Patients atteints de LLC-B 0 TLR-7 TLR-9 - TLR-10 - CD5-PC5
18 TLR-7 et TLR-9 Pistes pour une thérapie ciblée? Caractéristiques fonctionnelles?
19 Ligands de TLR-7 dans la littérature Imidazoquinolines utilisées en topique (Aldara ) Infections à papilloma virus ou herpès Traitement des carcinomes basocellulaires Un cas rapporté de lymphome cutané Quelques travaux dans la LLC Spaneret al 2006, Hammadiet al 2008, protection contre l apoptose à faibles doses Activité proapoptotiquedans les basocarcinomes, le mélanome ou les tumeurs vasculaires à plus fortes doses (Schon et al, 2007) Spaner2006, 2007 : activation cellulaire, augmentation de la sensibilité des cellules de LLC aux lymphocytes cytotoxiques Spaner2011 : essai thérapeutique de phase I/II, patients agressifs, masse tumorale parfois très importante, probablement sous-dosé
20 LLC, TLR-7 et Imiquimod Mesure de l apoptose par méthode TUNEL Accélération de l apoptose spontanée à partir de 5 µg/ml Contrôle PMA IMQ 2 µg/ml IMQ 5 µg/ml IMQ 10 µg/ml IMQ 20 µg/ml J0 J1 J2 J3 Spaner et al. imidazoquinoline, S PMA
21 LLC, TLR-7 et Imiquimod Activation cellulaire modérée Surtout HLA-DR et CD40 HLA-DR CD40 MFI relative P<0.05 versus Medium J1 J2 J3 Contrôle PMA IMQ 2 µg/ml IMQ 5 µg/ml IMQ 10 µg/ml IMQ 20 µg/ml
22 LLC, TLR-7 et Imiquimod Autres résultats (Cf. Min Chen) Peu de prolifération cellulaire mesurée en CFSE (Min Chen) Production de cytokines proinflammatoires(min Chen) Surtout IL-6 et IL-8 Concordant avec les quelques résultats de la littérature En résumé, au-delà de 5 µg/ml Activation spécifique Production de cytokines Apoptose rapide
23 Ligands de TLR-9 dans la littérature Les CpG ODN miment les interactions naturelles entre de l ADN bactérien et TLR-9 Ils sont utilisés comme adjuvants de vaccins ou en cytogénétique Les ODN CpGde type C combinent les effets des ODN de type B et A : production d IFN de type I par les cellules dendritiques plasmacytoïdes et activation des cellules B Dans la LLC Decker et al. 2000, 2002, proliferation Lianget al., 2010, CpG ODN type B ( µg/ml) : apoptose, production d IL-10
24 LLC, TLR-9 et CpGODN Mesure de l apoptose par méthode TUNEL Protection contre l apoptose spontanée % de cellules en apoptose J0 J1 J2 J3 Contrôle PMA GpC ODN CpG ODN 0.25 μm CpG ODN 0.5 μm CpG ODN 1 μm
25 LLC, TLR-9 et CpGODN Activation cellulaire importante CpG ODN 1 µm CD83 CD86 J1 J2 J3 Contrôle PMA GpC ODN CpG ODN 0.25 µm, P < 0.05 versus Medium;, P < 0.05 versus GpC ODN. CpG ODN 0.5 µm Relative MFI CD80 HLA-DR CD40 J1 J2 J3
26 LLC, TLR-9 et CpGODN Autres résultats (Cf. Min Chen) Prolifération cellulaire mesurée en CFSE Faible production de cytokines (Grandjenette) En résumé: Survie cellulaire Activation importante
27 Au total Imiquimod CpG ODN
28 Cindy Grandjenette Min Chen Marcelo de Carvalho Bittencourt Gilbert Faure Pierre Feugier Aurore Perrot
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