Groupes oncogéniques définis par altérations «classantes» Epidémiologie (fréquence, âge) et pronostic des principaux groupes oncogéniques
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- Raymonde Guertin
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1 Oncogénétique des LAL-B Emmanuelle Clappier Laboratoire d Hématologie, hôpital Saint-Louis et Département de Génétique, hôpital Robert Debré Faculté de Médecine, Université Paris-Diderot
2 Contenu du cours Notion d oncogenèse muti-étape Groupes oncogéniques définis par altérations «classantes» Epidémiologie (fréquence, âge) et pronostic des principaux groupes oncogéniques Actualités: - nouveaux groupes oncogéniques: ERGdel, BCR-ABL1-like - anomalies additionnelles et nouveaux marqueurs pronostiques: IKZF1del, CRLF2, JAK2, PDGFRB Projet biologique dans le cadre du GRAALL 2013
3 Genome-wide analysis of genetic alterations in ALL 1960: chromosome Philadelphia 2007: CGH/SNP-array analysis 2012: Massive parallel sequencing Nowell, 1960 Mullighan and Downing, Nature 2007 Mullighan, Nature 2012 Multiplicité des lésions oncogéniques additionnelles: fin du schéma 1 leucémie = 1 translocation
4 Multi-step oncogenesis Normal hematopoiesis Homeostasis
5 Multi-step oncogenesis Normal hematopoiesis Homeostasis
6 Multi-step oncogenesis
7 Multi-step oncogenesis From 1 to more than 10 driver lesions are necessary to lead to overt leukemia
8 Multi-step oncogenesis «Neo-Darwinian» tumoral development Greaves, 2009
9 Multi-step oncogenesis From 1 to more than 10 driver lesions are necessary to lead to overt leukemia Leukemia at diagnosis
10 Conséquences cellulaires des anomalies génétiques: acquisition du phénotype tumoral Non différenciation Prolifération (accumulation) Autorenouvellement Non apoptose Non sénéscence D après Hanahan et Weinberg, Cell 2000
11 Que peut-on attendre de la caractérisation génomique des leucémies? Comprendre les mécanismes de leucémogenèse Aider à prédire la réponse au traitement et la rechute Guider la stratification thérapeutique Mettre au point des thérapies ciblées et/ou personnalisées
12 LAL avec t(9;22)(q34;q11) / Ph+ / BCR-ABL1 ~ 30-40% LAL-B adultes, <5% chez l enfant Imatinib ib (Glivec) Yanada, JCO 2006
13 Genetic subtypes in BCP ALL in children EORTC-CLG N= 1253 BCP-ALL from children aged Hyperdiploidy 30 35% «B other» 25 30% Hypo/haploidy MLLt ETV6 RUNX % BCR ABL1 TCF3 PBX1 < 5% each
14 Analysis of gene-expression profiling Yeoh, Cancer Cell 2002
15 Hyperdiploïdie standard High Hyperdiploidy: 51 à 60 chr environ avec gains chromosomiques non aléatoire: classiquement, +4, +10, +17, +18, +21, % LAL-B chez enfants pic 2-5 ans, F>M < 10% adultes Très bon pronostic Détection: - Caryotype - Index ADN CGH-array X Y
16 t(12;21)(p12;q22) / TEL-AML1 (ETV6-RUNX1) ~ 20-25% LAL-B enfants Pic 2-5 ans Très bon pronostic (parfois rechutes tardives) Détection: - FISH (cryptique au caryotype) - Bio mol: RQ-PCR transcrit de fusion TEL TEL fusion Split AML1 AML1 AML Fusion + sonde AML1 splitée +/- délétion 2 éme allèle de TEL
17 Incidence by age of BCP ALL genetic subtypes in children 250 Other 200 Low hypo/near haploidy MLLt 150 iamp21 BCR ABL1 ERGdel 100 TCF3 PBX1 ETV6 RUNX1 50 High hyperdiploidy
18 t(1;19)(q23;p13) / E2A-PBX1 (TCF3-PBX1) ~ 4% LAL enfant et jeune adulte, M > F Pronostic plutôt bon chez l enfant (bon dans EORTC 58951, variable selon protocoles) Pré-B cig+ sig- typiquement (20-30% des LAL pré-b) Souvent translocation déséquilibrée avec tri1q et 19pter- Fusion E2A-PBX1 tri1q Détection: - Caryotype - Bio mol (RQ-PCR)
19 t(4;11)(q21;q23) / MLL-AF4 et autres translocations MLL MLL-AF4: ~ 60% LAL nourrisson ~ 2% enfant, 5-10% adulte LAL typiquement pro-b CD10-, souvent My+ Mauvais pronostic Autre partenaires fréquents dans les LAL: AF9, ENL, AF10 Au total ~ 80% LAL-B < 1an (rare après 1 an) Détection: - Caryotype + FISH MLL - Bio mol (RQ-PCR) principaux transcrits de fusion Chromosome 11 normal MLL réarrangé
20 Analysis of gene-expression profiling Yeoh, Cancer Cell 2002
21 Genetic subtypes in BCP ALL in children EORTC-CLG N= 1253 BCP-ALL from children aged 1-17 «B other» 25 30% Hyperdiploidy 30 35% Hypo/haploidy MLLt iamp21 ERGdel BCR ABL1 TCF3 PBX1 ETV6 RUNX % < 5% each
22 Amplification en tandem de la région 21q22 : iamp21 Enfants et adolescent :âge median 11 ans Pauciblastiques Mauvais pronostic Détection: - FISH (avec sonde AML1) - CGH-array TEL AML1 AML TEL Soulier, Leukemia 2003 Harewood, Leukemia 2003
23 Genetic landscape of hypodiploid ALL Near-haploid ALL Low-hypodiploid ALL chromosomes chromosomes RTK and and Ras signaling (71%) IKZF3 (13%) TP53 (91%), commonly present in nontumor cells in children IKZF2 (53%) RB1 (41%) Activation of Ras and PI3K-signaling g -> therapeutic strategies to be explored Holmfeldt, Nat Genetics 2013
24 Un nouveau groupe caractérisé par une délétion intragénique de ERG Sls #01 Sls #02 Sls #03 Identification par CGH-array d une microdélétion récurrente ERG del No ERG del kda ERG 50 kb ERG normal isoforms ERG short form Vinculin 25 Chr. 21 1M Agilent Expression d une protéine ERG tronqué - Expression aberrante du CD2, CD56 - morphologie particulière - ~3% des LAL-B pédiatriques - 40% de délétions d IKZF1 (4-7) Clappier, Leukemia 2013
25 (%) -free survival Event Un nouveau groupe caractérisé par une délétion intragénique de ERG n = 876 patients (LAL BCR ABL1 exclues) n=46 patients avec IKZF1 4 7 Good risk genetic subtypes (hyperdiploidy et ETV6 RUNX1) Poor risk risk genetic subtypes (MLL translocation, hypo/near haploidy) haploidy) ERGdel (n=11) Autres No ERGdel (n=35) ERGdel EFS EFS years O N No. of patients at risk : Good-risk Poor-risk Other ERGdel t-free surviva al (%) Event HR 0.16 (95% CI ) p= % 51.3% 0 years O N No. of patients at risk : No ERGdel ERGdel Bon pronostic, sans impact péjoratif des délétions d IKZF1 Clappier, Leukemia 2013
26 BCR ABL+ALL IKZF1 genomic alterations 75% of IKZF1 deletions in children (Mullighan et al, 2008) and adults (Iacobucci et al, 2009) Poor prognosis in adult Ph+ ALL (Martinelli etal al, 2009) Other BCP ALL 10% of IKZF1 dlti deletions in pediatric i BCP ALL poor prognosis (Mullighan et al., NEJM 2008; Kuiper et al., Leukemia 2010, etc ) Medium risk ALL
27 Frequency of IKZF1 deletions in distinct BCP ALL subtypes in children EORTC CLG n=1253 BCR ABL1 negative BCP ALL IKZF1 15% % of IKZF1 del in each genetic subtype BCR-ABL1 MLL / 11q23 low hypo / iamp21 TCF3-PBX1 ERGdel ETV6-RUNX1 High B-other abn. near-haploidy hyperdiploidy
28 Prognostic impact of IKZF1 deletions in BCR-ABL1-negative BCP-ALL in children EORTC-CLG n = 1223 patients EFS OS % % 86.7% % 7% HR = 2.41 (1.75, 3.32) p< HR = 1.67 (1.03, 2.72) p< (years) (years) O N Number of patients at risk : IKZF1 deletion O N Number of patients at risk : IKZF1 deletion Negative Negative Positive Positive
29 Prognostic impact of IKZF1 deletions according to genetic subtypes
30 Prognostic impact of IKZF1 deletions in BCR ABL1 negative BCP ALL in adults GRAALL 2005
31 Distribution by age of BCP ALL genetic subtypes 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% to be explored in adult 10% 0% ERGdel TCF3 PBX1 ETV6 RUNX1 High hyperdiploidy Other Low hypo/near haploidy MLLt iamp21 BCR ABL1 to be explored in adult
32 Un nouveau groupe de LAL B de mauvais pronostic: «BCR ABL1 like» or «Ph like» ProB signature Frequent IKZF1 deletions (40 90%) Den Boer, Lancet Oncology 2009 Harvey, Blood 2010
33 CRLF2 deregulation Incidence ~7% (50% in Down syndrome associated ALL) Translocation involving the locus : t(x;14)(p22;q32) or t(y;14)(p11;q32) Interstitial (PAR1) deletion centromeric to CRLF2 juxtaposing CRLF2 with the P2RY8 promoter FISH P2RY8 CRLF2 chimeric transcript Point mutation in the CRLF2 gene Sequence Prognosis: rather poor, but depends on series RT PCR MLPA Russel, Blood 2009 Mullighan, Nat Genet 2009
34 JAK mutations (mostly JAK2 R683, rarely JAK1, JAK3) Incidence ~5%, nearlyalwaysassociatedalways associated with CRLF2 deregulation JAK mutation + CRLF2 deregulation + IKZF1 deletion > «Ph like» profile (in US pediatric series) Mullighan, PNAS 2009
35 RNA seq in Ph like ALL cases identifies multiple gene fusions involving kinases (ABL1, PDGFRB, JAK2, ) > in vitro response to inhibitors Roberts, Cancer Cell 2012
36 Case report: successful TKI therapy in a refractory BCP ALL with EBF1 PDGFRB rearrangement 16 y old male diagnosed with ALL at AYA unit, Saint Louis hospital, Paris, with: hyperleukocytosis (167 G/L) Lymph nodes, liver and spleen enlargement No CNS involvement Biology: Immunophenotype: EGIL II BCP ALL with aberrant CD33+ et CD36+ Normal karyotype, yp DNA index=1, common fusion transcripts negative Treatment and repsonse: Induction according to FRALLE 2000 group B (aged >10 years, >50G/L) Resistance to prephase at day 8 ( blastes/µl) Persistent blasts in peripheral blood at day 21 > pursuing induction according to FRALLE 2000 group B2 BM aspiration at day 43: cytologic remission but MRD Ig/TCR >> 10 2 (1, ) Lengline, Haematologica 2013
37 Case report: successful TKI therapy in a refractory BCP ALL with EBF1 PDGFRB rearrangement A B RT PCR 300 bp 100 bp EBF1-PDGFRB fusion transcript 174 bp C EBF1 exon 15 PDGFRB exon Mb deletion Sequence Array CGH Lengline, Haematologica 2013
38 Case report: successful TKI therapy in a refractory BCP ALL with EBF1 PDGFRB rearrangement MRD follow up al disease Minimal residu induction consolidation imatinib BMT Imatinib introduced in combination with GRAAPH consolidation blocks 10-0 BMT with HLA identical sibling donor Time from diagnosis (days) Lengline, Haematologica 2013 Second similar case: 17 year old male with induction failure: ~80% blasts in BM after FRALLE 2000 B2 induction and 1st consolidation block > same EBF1 PDGFRB fusion > after 1 month imatinib treatment with EsPhALL consolidation block: MRD =
39 Plan for GRAAL 2013: genomic landscape of adult BCP ALL BCR-ABL % «B-other» ~40% MLL translocations ~8% Hyperdiploidy ~6% ETV6-RUNX1 ERGdel? TCF3-PBX1 iamp21 Hypo/haploidy <5% each Prospectively identify druggable, BCR-ABL1-like cases for TKI treatment implementation: Evaluate prognostic significance of various oncogenic alterations Investigate the B-other group -> systematic search for alterations in ABL1, PDGFR, CRLF2, JAK2 -> RNA-seq, exome sequencing, GEP
40
41 t(12;21)(p12;q22) / TEL-AML1 (ETV6-RUNX1) Protéine chimérique avec activité de répresseur transcriptionnel constitutif
42 Prognosis associated with genetic subtypes in EORTC-CLG n = 1223 BCP-ALL EFS BCR-ABL1-negative 1-17 years years OS O N Number of patients at risk : O N Number of patients at risk :
43 Prognostic impact of IKZF1 deletions in BCR-ABL1-negative BCP-ALL in children EORTC-CLG n = 1223 patients EFS 30 Aug : % % HR = 2.41 (1.75, 3.32) p< p< HR = 1.67 (1.03, 2.72) 0 (years) O N Number of patients at risk : IKZF1 deletion Negative Positive O N Number of patients at risk :
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