Oncogène HER2 et cancer du sein
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- Jean-Luc Leclerc
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1 Oncogène HER2 et cancer du sein Traitement et Détection Gaëtan MacGrogan Gaëlle Pérot-Frédéric Chibon Département de Biopathologie Institut Bergonié Bordeaux
2 ERBB2/ Neu/HER2 Gène: proto-oncogène, situé en 17q12 Amplifié dans 10-15% des carcinomes mammaires Protéine = récepteur tyrosine-kinase trans-membranaire 2 4
3 ACTIVATION de HER 2 dans les cancers du sein = amplification élevée surexpression forte dans la tumeur 3
4 Tumeurs HER2 (+++) Lobulaires < 5% Canalaires < 2 cm 10 à15% > 2 cm 20 à25% grade I 0% grade II 11% grade III 27% Cancers inflammatoires 30% Cancers de la femme jeune
5 Classification immunophénotypique des cancers du sein et traitements systémiques RE + RE - Her2 Her2 Her2 + Her2 + Her2 - Ki-67 low Ki-67 high Ki-67 high Ki-67 low Luminal A Luminal B Her2- Luminal B Her2+ Her2 enrichi Apocrine moléc Her2 + CCI Basal C.A.K HormonoT HormonoT + ChimioT HormonoT + ChimioT + ChimioT + Trastuzumab ChimioT + antiparp? Pas de TT systémique Trastuzumab G. MacGroganJFR
6 C. InfiltrantGrade II ouiii RE 10% RP 10% ourp < 10% Luminal B Her2 IHC Score 3+ ou2+ ampl Her2 + Her2 FISH amplifié Quelque soit Ki-67 RE PR HER2 Ki-67 G. MacGrogan JFR
7 Her2 enrichi C. InfiltrantGrade II ouiii RE <10% RP <10% Her2 IHC Score 3+ ou 2+ ampl Her2 FISH amplifié R Androgène 10% Quelque soit Ki-67 RE RP HER2 Ki-67 G. MacGrogan JFR
8 Classification Génomique et transcriptomique des cancers du sein Analyse intégrée du génome somatique et du transcriptome de 2000 Kc du sein Les variations en nombre de copies du génome entrainent des modifications de l expression des gènes en CIS ou en TRANS Identification de 45 régions dans le génome somatique des Kcdu sein dont les variations en nombre de copies vont moduler l expression des gènes dont les loci se trouvent à proximité(action en cis) Régions amplifiées comportant des drivers gènes connus surexprimés : ZNF703 en 8p, MYC en 8q, CCND1 en 11q, MDM2 en 12q, ERBB2 en 17q, CCNE1 en 19q Curtis et al. Nature 2012, 486,
9 Pronostic des Carcinomes HER2 selon la classification intégrée de Curtis Les cancers du sein avec amplification de HER2 ont le plus mauvais pronostic IntClust5:HER2E et Lum B 17q12 : ERBB2 Curtis et al. Nature 2012, 486,
10 Rechutes métastatiques dans le cancer du sein en fonction du statut Her2 en IHC 1,0 Her2 :0,1+,2+, n=936, métas=241 0,8 Survie cumulée 0,6 0,4 0,2 X 2 =15.4 P= Her2 :3+, n=1o6, métas=43 0,0 0,000 24,000 48,000 72,000 96, ,000 TMETA 144, , , , ,000
11 Profil mutationnel des cancers du sein HER2 positives RE négatives HER2E :TP53(72%) suivies de PIK3CA(39%), MLL3 (7%), CDH1 (5%), PIK3R1 (4%) Kobolt et al. Nature 2012, 490, 61-70
12 Comparaison des cancers du sein HER2E avec les Luminaux Her2+ Luminal HER2+ HER2E RE,RP,HER2 HER2,PTEN,INPP4 PIK3CA,P53,GATA 3 MAP3K1,MAP2K4 prolifération Bcl2,GATA3, ESR1 FGFR4,EGFR, ERBB2,GRB7 IHC CNA Mutations Expression mrna Ce qui distingue HER2E de LumHer2+: Expression des gènes liés à ESR1 (GATA3, BCL2) dans les Lum Her2+ Surexpression de FGFR4, EGFR, HER2,GRB7 dans les HER2E Mutations de TP53 plus fréquentes dans les HER2E alors que mutations de GATA3 solo observés dans les LumB Her2+ Expression protéines Kobolt et al. Nature 2012, 490, 61-70
13 Tumeurs Her2 3+ ou FISH HER2 amplifié Le trastuzumab(herceptin ) en métastatique Étude M77001 M+ 1ère ligne y Her2 IHC 3+ or FISH + Response rate (%) Response duration (med) Docetaxel (n=94) Docetaxel + trastuzumab (n=92) 34 % 61 % m 11.2 m Med TTP 6.1 m 11.7 m Median OS 22.7 m 31.2 m p Docetaxel 100 mg/m² x 6 Docetaxel + w trastuzumab Objectif principal : Taux de réponse 25 % 40 % Marty M. J ClinOncol2005; 23 :
14 Tumeurs Her2 3+ ou FISH HER2 amplifié Le trastuzumab(herceptin ) en adjuvant Survie sans récidive B-31 N9831 HERA % 85% 90 87% 86% 90 85,8% 80 74% 80 78% 80 77,4% 70 66% 70 68% HR = 0,45-2P = 1x10-9 HR = 0,55-2P = 0,0005 HR = 0,54 p < 0,0001
15 Herceptin/Trastuzumab Coût ~ euros/ an / patiente Durée du traitement adjuvant : 1 an Nécessitéde bien sélectionner les patientes
16 Détermination du statut de HER2/neu Hybridation in situ en fluorescence (FISH) Chromogenic in situ hybridization(cish) Silverin situ hybridization(sish) amplification du gène Immunohistochimie(IHC) expression de la protéine
17 Qu est-ce qu une amplification? Duplications localisées d'un gène ou groupe de gènes (amplicon) en de multiples copies
18 Principe de la FISH Hybridation de l ADN tumoral en une étape, avec une sonde fluorescente dont la séquence est complémentaire de celle du gène HER-2. C est une méthode directe de détection du statut HER-2. Détection de l amplification du gène et non de sa surexpression. Une deuxième sonde, dont la séquence est complémentaire de celle du centromère du chromosome 17 (CEPT17), peut être couplée àla première ou être réalisée dans un second temps.
19 Chromosome 17 CEP17 HER2 Contre-coloration des noyaux (DAPI)
20 Seuils définissant l'amplification et l éligibilitéàun traitement par Trastuzumab Nbre HER2 HER2/CEN17 Statut HER2 6 copies 2 Amplifié Oui 6 copies <2 Co-amplification HER2 et CEN17 Polysomie CEN17 Eligibilité Trastuzumab Oui Oui < 4 copies <2 Non amplifié Non < 4 copies 2 Monosomie CEN17 Discuté 4 et <6 2 Amplifié Oui 4 et <6 <2 Ambigu (non amplifié) Discuté On compte le nombre moyen de copies de HER2 et de CEN17 par noyau de cellule tumorale sur 40 noyaux
21 Pas d amplification de HER2 (R< 2, HER2 <4) F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
22 Amplification forte HER2 (>10 copies en cluster) F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
23 Amplification modérée HER2 (>6 copies) F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
24 Her2 considéré comme faiblement amplifié malgré un Rapport < 2 Cen17 : 3.77 Her2 : 6.8 rapport :1.8 F. Chibonet G Pérot Institut Bergonié
25 Marquage SISH bicolore: Présence d une amplification de Her2
26 Cas d interprétation problématique de la FISH HER2 Statut Hétérogène Définition (CAP) : the presence of between 5% and fewer than 50% of cells with an HER2/CEP17 ratio more than 2.20 Ex A : Présence de 2 populations cellulaires séparées, une HER2 amplifiée, l autre pas Compte rendu : Statut HER2 hétérogène avec un contingent de cellules HER2 amplifiées (%) et un contingent de cellules HER2 non amplifiées Starczynski Am J Clin Pathol 2012, 137,
27 Cas d interprétation problématique de la FISH HER2 Statut Hétérogène Ex B : Cellules tumorales amplifiées et non amplifiées mélangées. Compte rendu : Préciser le nombre moyen de signaux HER2 et de CEN17 sur l ensemble de la population tumorale. Préciser également le pourcentage de cellules tumorales avec un ratio>2. Une étude a montréque tant qu il y avait moins de 30% de cellules amplifiées il n y avait pas d impact pronostic. Bartlett, Am J Clin Pathol 2011;136: Starczynski Am J Clin Pathol 2012, 137,
28 Cas d interprétation problématique de la FISH HER2 Statut Hétérogène Ex C : Présence de rares cellules tumorales amplifiées au sein d une population de cellules non amplifiées Compte rendu : Noter la présence de cellules HER2 amplifiées en précisant qu elles sont isolées et que l on ne connait pas bien leur signification sur le plan pronostic. Une étude a montréque tant qu il y avait moins de 30% de cellules amplifiées il n y avait pas d impact pronostic Bartlett, Am J Clin Pathol 2011;136: Starczynski Am J Clin Pathol 2012, 137,
29 Statut équivoque de HER2 en FISH Monosomie du chromosome 17 Définition : moins de 1,4 copies de CEP17 par cellule Monosomie Chr17: HER2<4 mais R>2 Compte rendu : Dans ce cas de figure la tumeur est considérée comme non amplifiée, mais pour certains la patiente est éligible àun TT par trastuzumab F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
30 Statut équivoque de HER2 en FISH Monosomie du chromosome 17 HER2=5.75 et CEP17=1 R=5.75 Compte rendu : dans ce cas de figure, la tumeur est considérée comme amplifiée et éligible à un traitement par Trastuzumab Starczynski Am J Clin Pathol 2012, 137,
31 Statut équivoque de HER2 en FISH Coamplification de HER2 et CEP17 HER2>20 et CEP17>20, R 1 il y a une co-localisation des signaux de HER2 et CEP17 donnant un signal jaune Compte rendu : dans ce cas de figure, la tumeur est considérée comme amplifiée Starczynski Am J Clin Pathol 2012, 137,
32 Statut équivoque de HER2 en FISH Polysomie du chromosome 17 HER2=5.72, Chr17=4.52, R = 1.26 Compte rendu : dans ce cas de figure, la tumeur est considérée comme ambigue F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
33 Statut équivoque de HER2 en FISH 4< HER2 6 copies HER2=5.45 R=2.09 Compte rendu : dans ce cas de figure, la tumeur est considérée comme faiblement amplifiée F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
34 Statut équivoque de HER2 en FISH Polysomie du chromosome 17 ou co-amplification de la région péricentromériquedu Ch17 et de HER2 HER2=6.8 R=1.8 Compte rendu : dans ce cas de figure, la tumeur est considérée éligible àun TT par Trastuzumab F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
35 HER2 ~ 30, R~1 CAS 5 Cas d'interprétation délicate en raison de la présence d'une amplification du gène HER2 et du centromère 17. Le nombre de copies et leur présentation colocalisées en "cluster" indiquent que ceci correspond bien à une amplification et non à une polysomie. Par prudence nous souhaitons réaliser une CGH afin de confirmer ce résultat. Le profil génomique confirme pleinement les données de FISH. En effet on observe bien une amplification du locus HER2 associée à une amplification de la région 17q11 correspondant à la région subcentromérique reconnue par la sonde FISH. F. Chibon et G Pérot Institut Bergonié
36 Détection immunohistochimique de Her2 Système de révélation MILIEU EXTRACELLULAIRE Amplification +chromogène Anticorps secondaire Anticorps primaire HER2: glycoprotéine transmembranaire CYTOPLASME
37 DetectionIHC de erbb2: absence de surexpression: marquage négatif
38 Détection IHC de c-erbb2. Mise en évidence d une surexpression protéique. Marquage membranaire positif «en filet de poisson»
39 Le score 3+est évident dès le faible X Score 3+ X 5 X 10
40 Si l on doit grossir au delà du 10x pour vérifier l intégrité membranaire, c est un score 2+ ou 1+ Score 2+ X10 Membranaire complet modéré X40
41 Si l on doit grossir au delà du 10x pour vérifier l intégrité membranaire, c est un score 2+ ou 1+ faible Score 1+ X10 X40
42 Le score IHC Score Marquage Indication Herceptin 0 Absence de marquage ou< 10% des cellules + Marquage faible et incompletde 10% de cellules ++ Marquage faible ou modéréet complet de 10% de cellules +++ Marquage fort et complet de 10% des cellules non non Oui seulement si amplification prouvée par FISH oui
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