Principaux éléments d un bilan de l immunité humorale et cellulaire

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1 Principaux éléments d un bilan de l immunité humorale et cellulaire G. Cozon Octobre 2011 Faculté de Médecine et de Maïeutique Lyon Sud Charles Mérieux

2 Indication d un bilan immunologique Suspicion de déficit immunitaire Bilan d infections à répétition Bilan d infections graves Suspicion d hyperréactivité Hypersensibilité immédiate Hypersensibilité retardée Suspicion de maladies inflammatoires Suspicion de maladies auto-immunes

3 Bilan biologique d un déficit immunitaire NFS, VS, CRP Exploration de l immunité humorale Exploration de l immunité cellulaire Exploration de l immunité innée

4 NFS, VS, Protéine C réactive GR Anémie inflammatoire : deux phases évolutives : L'anémie est initialement normochrome normocytaire arégénérative. L'inflammation persistant, l'anémie peut devenir microcytaire et hypochrome Fer sérique abaissé et capacité totale de fixation (CTF) de la transferrine normale ou abaissée (donc coefficient de saturation (CS) normal ou pas aussi diminué que dans une carence en fer) ; ferritinémie souvent élevée. Thrombocytose et hyperleucocytose à polynucléaires fréquentes. Vitesse de sédimentation augmentée, fibrinogénémie augmentée, hypergamma et hyper -alpha-2- globulinémie, haptoglobinémie élevée, CRP (C

5 Anémie de la grossesse microcytaire (VGM < 80 µ 3 ), mais parfois normocytaire (80 < VGM < 100 µ 3 ) si anémie récente arégénérative (réticulocytes non augmentés, généralement < à 50000/mm3) carence martiale (ferritinémie inférieure à 12 mg/l)

6 Protéines de l inflammation CRP (Protéine Créactive) Procalcitonine plus précoce que la CRP Fibrinogène VS accélérée Oromucoïde, haptoglobuline, sérum amyloïde A Électrophorèse de Pr sérique hypergamma et hyper-alpha-2-globulinémie

7 Plasma concentration (% variation) Cinétique des protéines de l inflammation Phase aigue CRP SAA AAG 1 PI C3 Haptoglobine Céruloplasmine Fibrinogène Albumine Transferrine TTR Jours Adapted from Hachulla

8 Immunité humorale spécifique Électrophorèse des Pr : hypogammaglobulinémie Dosage pondérale des IgG, IgA et IgM Dosage des sous-classes d IgG Dosage des IgE totales Sérologie des antigènes vaccinaux

9 Recherche d auto-anticorps Anti-ADN natif test de Farr Méthode en IF : Ac antinucléaires Techniques ELISA ou Luminex Facteur rhumatoïde, Ac Pep Citru Ac Anti phopholipides anticoagulant circulant dans le syndrome des anti-phospholipides

10 Recherche d IgE dans l allergie Après des tests cutanés RAST IgE spécifiques CLA trophallergènes ou pneumallergènes

11 Immunité humorale innée CH50, C3 et C4 et autres composants du complément en cas d anomalie du CH50. Élévation pdt la grossesse, Kc, Hodgkin Diminution lors de déficit, de poussées de MAI Alpha-1-antitrypsine et alpha-1 antichymotrypsine inhibiteur enzymatique dont le déficit peut donner des emphysème

12 Immunité cellulaire spécifique Phénotypage T, B et NK Autres marqueurs Réponse aux mitogènes : TTL Réponse aux antigènes spécifiques : TTL, TAL Quantiféron et Elispot

13 Phénotypage T, B et NK Principe : incubation des GB avec des anticorps monoclonaux spécifiques couplés avec des fluorochromes, Lecture après élimination des anticorps non fixés au microscope à fluorescence et surtout au cytomètre en flux.

14 Cytomètre en flux

15 Exemple

16 Marqueurs de sous populations Lymphocytes T : CD3 Ly CD3+ CD4+ (CD8-) Ly CD3+ CD8+ (CD4-) Lymphocytes B : CD19, CD20, CD21 Lymphocytes NK : CD16+ CD56+

17 Autres marqueurs Très nbreux surtout pour la recherche Marqueurs d activation : HLADR, CD69, CD25 Marqueur de T régulateurs : CD4+CD25+, Foxp3

18 Réponse aux mitogènes ou Ags Test de transformation lymphoblastique (TTL). Culture de cellules mononucléées + mitogène Incorporation de thymidine tritiée Test d activation lymphocytaire Culture de cellules mononucléées + mitogène Marqueurs d activation CD69, CD25, etc

19 Quantiféron Culture en sang complet 16h avec des antigènes de Mycobacterium tuberculosis Dosage d interféron dans le surnageant de centrifugation par technique ELISA La présence d interféron traduit l activation récente et donc le contact avec le BK

20 TB spot Culture de PBMC en présence d antigène de BK Plaque ELISPOT : Coating anti-ifng Incubation des cellules 24 heures 2eme anticorps pour localiser les cellules sécrétrices Marquage avec un sustrat précipitant

21 ELISPOT

22 Immunité cellulaire non spécifique Numération de polynucléaires Test d activation des Pn Technique NBT Technique cytométrie Test d activation des basophiles Technique cytométrie