Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie) Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie) Réaction antigène/anticorps

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1 DES de Biologie Médicale Enseignement d Immunologie ET01 & ET02 Adrien Six (adrien.six@upmc.fr) Phnom Penh Université Pierre et Marie Curie septembre Réaction antigène/anticorps 3 4 Adrien Six septembre

2 Réaction antigène/anticorps Production d anticorps monoclonaux 5 6 Précipitation en milieu liquide 7 8 Adrien Six septembre

3 Précipitation interfaciale Diffusion unidimensionnelle Technique du ring test (test qualitatif) 9 10 Diffusion simple bidimensionnelle Précipitation en milieu solide Technique de Mancini Technique d Ouchterlony Immunodiffusion radiale Immunodiffusion double Adrien Six septembre

4 Immunoélectrophorèse (Grabar/Williams) Combine électrophorèse et immunodiffusion double: 1. Séparation électrophorétique d une source d antigènes selon leur charge 2. Immunodiffusion radiale des antigènes séparés 3. Immunodiffusion d une source d anticorps déposée dans une gouttière sur l un ou l autre des côtés des antigènes séparés 4. Formation éventuelle d arcs de précipitation Analyse qualitative Immunoélectrophorèse en fusée Technique de Laurell: - Analyse quantitative - Nécessité que l Ag soit chargé négativement Immunoélectrophorèse bidimensionnelle Analyse qualitative & quantitative Adrien Six septembre

5 Réaction d agglutination Test de Coombs direct Recherche d anticorps anti-rhésus chez le nouveau-né Qualitatif: très sensible; Quantitatif: peu précis Test de Coombs indirect Recherche d anticorps anti-rhésus chez la mère Adrien Six septembre

6 RIA/ELISA ELISA indirect RadioImmunoAssay/Enzyme-linked ImmunoSorbentAssay ELISA sandwich ELISA compétitif Adrien Six septembre

7 ELISpot Immunoprécipitation 1 Western blot Adrien Six septembre

8 Immunofluorescence - principe Immunofluorescence - exemple Cytométrie de flux (1) Coupe de pancréas: Anticorps «vert» dirigé contre GAD (glutamic acid decarboxylase) marque les cellules β des îlots de Langerhans Anticorps «orange» dirigé contre l hormone glucagon marque les cellules α Adrien Six septembre

9 Cytométrie de flux (2) Cytométrie de flux (3) Tri cellulaire par «panning» Adrien Six septembre

10 Tri cellulaire par cytométrie Tri cellulaire magnétique Sensibilité des techniques de détection Adrien Six septembre

11 PCR-ELISA Immuno-PCR A. VanderBorght et al. (1999) J.Immunol.Methods 223: M. C. Case et al. (1999) J.Immunol.Methods 223: Panama-blot Immunoproteomics D. Stahl et al. (2000) J.Immunol.Methods 240:1. 43 Francisco J. Quintana, Peter H. Hagedorn, Gad Elizur, Yifat Merbl, Eytan Domany, and Irun R. Cohen. Functional immunomics: Microarray analysis of IgG autoantibody repertoires predicts the future response of mice to induced diabetes. PNAS 101: , Adrien Six septembre