Une gamme de services dédiés à la qualité cellulaire

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1 Une gamme de services dédiés à la qualité cellulaire Autres services Clean Cells met également en œuvre son expertise dans des programmes : d'ingénierie pour la conception de laboratoires, d'accompagnement en management de la qualité, d'audit sur site, de formation aux «Bonnes Pratiques de Culture Cellulaire». En fonction de vos besoins et applications, les références des fiches techniques décrites ci-après seront toujours prémunies d une des mentions suivantes sur tous nos devis : 2. : réalisation en routine en confinement biologique L2, 3. : réalisation en routine en confinement biologique L3, B2. : réalisation selon les BPL en confinement biologique L2, B3. : réalisation selon les BPL en confinement biologique L3. L engagement de Clean Cells pour vous fournir une assistance de qualité est reconnu au travers de notre certification ISO 9001:2000 "Prestations de Service en Culture Cellulaire et Recherche de Contaminants" (AFAQ N QUAL/2002/19363). Page 1 sur 20

2 ENVOI D'ECHANTILLONS Pour tout envoi, merci de bien vouloir compléter et joindre la fiche de renseignements, premier maillon de la chaîne de traçabilité. De plus, n'hésitez pas à nous fournir des protocoles détaillés afin d'optimiser la culture de vos cellules. Pour un envoi de cellules en culture : Les cultures doivent être subconfluentes. Nous recommandons d envoyer les cellules 3-4 jours suivant le dernier repiquage, en fonction des caractéristiques cellulaires. Les cellules adhérentes à tester peuvent être envoyées sous la forme d un flacon (25 ou 75cm²) rempli de milieu. Les cellules non adhérentes peuvent être envoyées dans un tube (15 ou 50ml) rempli de milieu. A leur arrivée, l excès de milieu est retiré, pour permettre aux cellules de reconditionner leur environnement et la viabilité est vérifiée. Le bouchon doit être recouvert de Parafilm. Les flacons ou tubes sont placés dans un sac ou un container étanche, avec suffisamment d absorbant pour éviter toute fuite. Pour les envois d échantillons congelés, les flacons ou tubes sont placés dans un sac ou un container étanche, avec suffisamment d absorbant pour éviter toute fuite en cas de décongélation accidentelle. Merci de veiller à indiquer la température de stockage sur le colis. Si les cellules sont généralement cultivées en présence d antibiotiques, nous recommandons d effectuer au minimum 2 passages sans antibiotique avant l envoi des cellules à notre laboratoire. Les résultats sont envoyés sous la forme d un Rapport d Essai établi conformément à la norme NF EN ISO/CEI Page 2 sur 20

3 DETECTION DES MYCOPLASMES VSV Détection par épifluorescence sur cellules indicatrices 1 semaine Ce test est utilisé pour détecter par co-culture la présence de mycoplasmes dans les échantillons biologiques d origine animale ou humaine. L échantillon (milieu, suspension cellulaire ) à tester est incubé en présence de cellules indicatrices sensibles (ex. cellules de rein de singe). Après 2 passages, les cellules sont marquées par un agent intercalant de l ADN fluorescent (Hoechst), puis analysées sous microscope à épifluorescence contre la présence de mycoplasmes. Pour chaque test, des contrôles internes sont réalisés : un contrôle négatif de cellules non contaminées et un contrôle positif de cellules contaminées par une quantité de mycoplasmes de référence. forme congelée, 1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks d échantillons génomiques, viraux... VSP Détection par PCR 48 heures Cet essai est basé sur l amplification spécifique d une région d ADN des mycoplasmes. A sa réception, l ADN total de l échantillon est extrait. Les extraits d ADN totaux rentrent ensuite dans un cycle de PCR. L amplification d ADN est réalisée en présence d amorces complémentaires et spécifiques du génome des mycoplasmes. En fin de PCR, le produit obtenu est séparé sur gel d agarose. La présence d une bande spécifique des mycoplasmes révèle une contamination dans l échantillon cellulaire testé. En parallèle à l amplification de l ADN de l échantillon test, deux types de témoins sont réalisés : un positif (ADN extrait de cellules volontairement contaminées par des mycoplasmes) et un négatif (ADN extrait de cellules exemptes de tout mycoplasme) forme congelée, 1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks d échantillons génomiques, viraux... Page 3 sur 20

4 DETECTION DES MYCOPLASMES VDHP Détection croisée par PCR-épifluorescence directe 48 heures Ce test est utilisé pour détecter rapidement et directement la présence de mycoplasmes dans les échantillons cellulaires d origine animale ou humaine. Après vérification de la viabilité, les cellules sont repiquées, un aliquote de celles-ci étant incubé sur lamelle de verre (pour les cellules adhérentes). Les cellules sont marquées par un agent fluorescent intercalant de l ADN (Hoechst) et analysées sous microscope à épifluorescence pour déterminer la présence de mycoplasmes. Parallèlement au marquage direct des cellules, l ADN d un échantillon de cellules et de milieu est extrait et analysé par PCR (cf. : référence VSP ci-dessus). En fin de double détection, un échantillon est considéré comme négatif si les deux tests réalisés le sont. forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture de 7 jours est à prévoir, réf. : DMC.05.01). VDVP Détection croisée par PCR et épifluorescence sur cellules indicatrices 1 semaine Cet essai est utilisé pour détecter la présence de mycoplasmes dans les échantillons biologiques d origine animale ou humaine. Dans ce test l échantillon est co-cultivé avec des cellules indicatrices, capables de promouvoir l expansion des mycoplasmes. Outre l échantillon-test, cet essai inclus des contrôles positif (contaminé par une espèce de mycoplasmes de référence) et négatif (cellules cultivées dans des conditions normales). A la fin de la co-culture, les cellules sont repiquées, un aliquote étant incubé sur lamelle de verre pendant une nuit, marquées au Hoechst, puis observées au microscope à épifluorescence. En parallèle, l ADN des cellules indicatrices va servir de substrat pour la recherche par PCR de la présence d ADN mycoplasmique dans l échantillon biologique. En fin de double détection, un échantillon est considéré comme négatif si les deux tests réalisés le sont. forme congelée, 1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks d échantillons génomiques, viraux... Page 4 sur 20

5 IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES VSVR Détection par épifluorescence sur cellules indicatrices selon les recommandations réglementaires Sensibilité : CFU 2 semaines Ce test est utilisé pour détecter par co-culture la présence de mycoplasmes dans les échantillons biologiques d origine animale ou humaine, utilisés dans des applications thérapeutiques humaines. Le test est réalisé dans les conditions décrites par les autorités réglementaires (Ph.EU, sup.98, ; PTC, CBER, FDA, 1993) 2 prises d essai de l échantillon à tester (milieu, suspension cellulaire ) sont incubées dans 2 flacons de 25 cm² en présence de cellules indicatrices pendant 3 passages. Le dernier jour, les cellules sont marquées par un agent intercalant de l ADN fluorescent (Hoechst), puis analysées sous microscope à épifluorescence pour détecter la présence de mycoplasmes. Pour chaque test, deux types de contrôles sont réalisés : un contrôle négatif de cellules non contaminées et au moins deux contrôles positifs de cellules contaminées par des espèces de mycoplasmes de référence. forme congelée. Notes : Ces essais peuvent être réalisés directement à partir de milieu de culture conditionné, mais nous conseillons de le faire sur un milieu contenant des cellules. Conformément aux recommandations réglementaires (PTC, CBER, FDA, 1993), les prises d'essai peuvent être conservées entre 2 et 8 C 24 heures avant le test, pour des périodes plus longues, le stockage est à 60 C maximum. Page 5 sur 20

6 IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES CDPHE Détection par culture directe selon : Ph.EU, sup98, Sensibilité : 100 CFU Durée de l essai : 6 semaines Cette technique par culture directe est utilisée pour détecter les mycoplasmes présents dans les préparations vaccinales pour usage humain. Nous utilisons un milieu de culture solide et un milieu de culture liquide qui permettent la pousse des mycoplasmes de référence (Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma orale et Mycoplasma pneumoniae). La recherche de mycoplasme est réalisée sur milieu solide en aéro et anaérobiose. Chaque nouveau lot de milieu solide est testé pour sa capacité à permettre la pousse des souches de référence (Test dit des propriétés nutritives). Ces mêmes tests sont réalisés lors d un essai en présence du produit à analyser afin de déterminer si ce dernier peut être inhibiteur et donc nuire à la croissance des mycoplasmes (Test dit de Substances inhibitrices). A J0, on réalise un ensemencement en milieu liquide et en milieu solide. Des sous-cultures sont réalisées à partir du milieu liquide à J3, J7 et J14. Les lectures sont réalisées à J7, J14, J21, J23, J28 et J35. Un premier résultat est envoyé à J14 mais le résultat final est celui du 35 ème jour. PTC Détection croisée selon : «Point To Consider, CBER, FDA, 1993» Sensibilité : CFU 5 semaines Cet essai est utilisé pour détecter la présence de mycoplasmes par deux types de techniques : la culture directe (sur milieu solide et liquide) et la culture sur cellules indicatrices. L échantillon à tester est incubé pendant 3 passages avec des cellules indicatrices dans 2 flacons de 25 cm². Les cellules seront ensuite fixées, marquées à l aide d un agent intercalant de l ADN (Hoechst 33258) et observées au microscope à fluorescence pour détecter la présence de mycoplasmes. En parallèle des boîtes de Pétri et un tube de milieu liquide sont inoculés avec l échantillon test et sont incubés en conditions aérobie et anaérobie. 3 sous-cultures des tubes de milieu liquide sont réalisées en milieu solide (J3, J7 et J14). Puis toutes les boîtes sont examinées après au minimum 14 jours de culture. Au moins deux espèces de mycoplasmes sont utilisées comme contrôles positifs et sont incubées dans les mêmes conditions que l essai. Page 6 sur 20

7 IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES ID Identification des mycoplasmes une semaine En cas de contamination des échantillons biologiques, une identification des mycoplasmes peut être proposée afin de déterminer l origine de celle-ci. Cet essai est réalisé à partir d une amplification des fragments d ADN mycoplasmique (PCR). Ces fragments sont ensuite découpés par des enzymes de restriction. Les variations de taille des fragments obtenus sont spécifiques de chaque espèce de mycoplasmes. Ce test permet d identifier les principales espèces de mycoplasmes impliquées dans plus de 95 % des contaminations observées en culture cellulaire dont M.fermentans, M.hyorhinis, M.arginini, M.orale et A.laidlawii forme congelée, 1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks d échantillons génomiques, viraux... Page 7 sur 20

8 DECONTAMINATION CELLULAIRE ED Entrée en décontamination SD Sortie de décontamination 3-4 semaines (incl. période de quarantaine) Cette procédure est destinée à mettre en œuvre l ensemble des procédés à disposition afin de décontaminer les cellules, animales ou humaines, de toute trace de mycoplasmes. Ce système convient pour toutes cellules destinées à la recherche ou à la production. A leur entrée en traitement, une première détection directe des mycoplasmes est réalisée afin d évaluer le degré de contamination. Après expertise, les cellules entrent simultanément dans différents cycles d antibiothérapie de 7 jours. Au bout de ces 7 jours, les cellules sont repiquées et à nouveau testées contre la présence de mycoplasmes. Les cellules repartent dans un nouveau cycle de 7 jours. En fin de traitement, la présence ou non de mycoplasmes est évaluée par PCR et épifluorescence directe. Si les cellules sont décontaminées, elles peuvent alors être renvoyées directement au client sous la forme d un flacon de 25 cm² ou sous la forme d ampoules congelées (congélation en plus). Compte tenu des phénomènes de résistances possibles des mycoplasmes aux antibiotiques utilisés, si les cellules ne sont pas décontaminées en fin de traitement Clean Cells, elles peuvent entrer soit dans un nouveau cycle de décontamination, soit dans un cycle de traitement alternatif (défini avec le laboratoire). forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est à prévoir, réf. : DMC.05.01). Notes : La faible concentration du mélange d antibiotiques utilisés lors du traitement Clean Cells, n entraîne aucune conséquence sur les cellules traitées : pas de ralentissement de la croissance, pas de variation phénotypique, pas de variation métabolique (tests réalisés sur des cellules T murines). Page 8 sur 20

9 TEST DE STERILITE TS TS Test de stérilité Sensibilité : CFU Durée de l essai : 7 jours ou 14 jours Cet essai est utilisé pour rechercher la présence éventuelle d une contamination bactérienne ou fongique. Elle est utilisée essentiellement pour les cellules ou produits ancillaires utilisés dans un contexte de R&D utilisant des cellules à forte valeur ajoutée. Les échantillons sont ensemencés dans deux types de milieu liquide pendant 7 ou 14 jours. Tous les jours, les milieux sont observés pour vérifier s il y a apparition d un trouble traduisant une contamination. Dès l apparition d une contamination, nous vous contactons pour vous en informer. forme congelée. TSRE Test de stérilité selon la Ph. Eu : Ph. Eu, Sup CFR Sensibilité : CFU 14 jours Cette technique est utilisée pour rechercher la présence éventuelle d une contamination bactérienne ou fongique. Elle est réalisée pour les produits de thérapie cellulaire et génique ainsi que pour les anticorps à usage thérapeutique qui doivent être stériles. Les échantillons sont ensemencés sur deux types de milieux : Le milieu liquide au thioglycolate pour les bactéries anaérobies, et également pour les bactéries aérobies. Le milieu aux peptones de caséine et de soja (bouillon trypticase soja) pour les bactéries aérobies, mais aussi pour les champignons. Ce test comporte trois étapes : La validation qui consiste à observer la croissance des souches de références* sur les milieux utilisés ; le test «propriétés inhibitrices» qui permet de valider si l échantillon à tester n a pas d effet inhibiteur sur la croissance de ces germes ; et le test de stérilité proprement dit qui consiste à mettre en culture l échantillon dans les deux milieux décris. Un contrôle négatif est réalisé, ainsi que la validation technique par la réalisation d un «Touch Gants» (gélose contact avec les gants du technicien) et de l analyse microbienne du flux de la hotte à flux laminaire. Nous vous communiquons un résultat intermédiaire à J7 et résultat définitif à J14. En cas de contamination, nous vous informons sans attendre la fin du test. A définir avec notre laboratoire en fonction de vos contraintes et des recommandations des instances réglementaires (AFSSAPS ). Page 9 sur 20

10 TEST DE STERILITE TSRU Test de stérilité selon la Ph US : Ph US 21 CFR Sensibilité : CFU Durée de l essai : 14 jours Cette technique est utilisée pour rechercher la présence éventuelle d une contamination bactérienne ou fongique. Elle est réalisée pour les produits de thérapie cellulaire et génique ainsi que pour les anticorps à usage thérapeutique qui doivent être stériles. La technique est identique à la référence TSRE avec deux souches contrôles supplémentaires que sont : - Clostridium sporogenes ATCC Bacillus subtilis ATCC 6633 en bouillon Trypticase Soja A définir avec notre laboratoire en fonction de vos contraintes et des recommandations des instances réglementaires (AFSSAPS ). * Souches de références utilisées : Bactéries aérobies - S. aureus, ATCC P. aeruginosa, ATCC B. subtilis, ATCC 6633 Bactéries anaérobies - C. sporogenes(1), ATCC Ph Eu et Ph US - C. sporogenes(2), ATCC Ph US seulement Levures et moisissures - C. albicans, ATCC A.niger, ATCC Page 10 sur 20

11 ENDOTOXINES BACTERIENNES REC Détection des endotoxines bactériennes (Test LAL) 96 heures Le test LAL chromogénique cinétique est utilisé pour détecter les endotoxines (lipopolysaccharides) des bactéries GRAM négatif. En présence d endotoxines, un substrat chromogène présent dans le réactif «LAL-substrat» libère un chromophore jaune (paranitroanilide ou pna) qui absorbe à 405 nm. Le spectrophotomètre réalise des lectures en continu. Le temps nécessaire pour obtenir une intensité de couleur jaune prédéfinie est inversement proportionnel au taux d endotoxines dans l échantillon. La quantité d endotoxines présente est déterminée par une courbe étalon. La recherche d endotoxines bactériennes vient en complément de la bactériologie puisque ces substances pyrogènes (qui provoquent de la fièvre) proviennent aussi bien de bactéries vivantes que de bactéries mortes. Ce test constitue donc un excellent traceur d une contamination bactérienne même antérieure. Ce test est agréé par la FDA (licence FDA 709) et reconnu par la Pharmacopée Européenne. Minimum 500 µl de milieux, de produit, de sérum, d extraits congelés. Page 11 sur 20

12 ADN RESIDUEL RDNT Quantification d ADN résiduel par le «Threshold Total DNA Assay» RDNT Analyse de routine QDNT Qualification initiale Qualification Initiale Qualification Initiale Sensibilité : pg/test PPK Digestion protéinase K/SDS PEW Extraction d ADN par le kit Wako 10 jours pour une analyse de routine Les autorités réglementaires recommandent de quantifier l ADN résiduel présent dans les produits biologiques dérivés de lignées cellulaires à usage humain (par ex. vaccins, protéines recombinantes, anticorps monoclonaux). Le taux admissible d ADN contaminant est très discuté et diverge selon le Comité de l OMS et de la FDA. Généralement, cette quantité doit être inférieure à 100 pg par dose unique destinée à l homme. Le test «Threshold Total DNA Assay» permet de doser des quantités d ADN total, de manière non spécifique, de l ordre du picogramme. Ce test enzymatique de type sandwich se déroule en plusieurs étapes. Après la dénaturation de l ADN de l échantillon, l ADN simple brin est marqué par une protéine biotinylée, la SSB (Single-Stranded Binding protein) de E. Coli, qui a une forte affinité pour l ADN simple brin, et un anticorps monoclonal anti-adn conjugué à l uréase. Le complexe protéique ainsi formé est capturé sur une membrane de nitrocellulose biotinylée via la streptavidine. L activité de l uréase est mesurée par la dégradation de l urée qui se traduit par des variations de ph, proportionnels à la quantité d ADN présente dans l échantillon. Cette quantité est déterminée à partir d une courbe standard de 2 pg à 200 pg d ADN. La sensibilité de ce test (2 pg/test) répond aux exigences de la FDA. Avant l analyse d un échantillon en routine, une phase de qualification initiale est nécessaire pour rechercher, d après les renseignements fournis sur l échantillon (voir fiche de renseignements de l échantillon), la dilution de travail idéale et, si besoin, le type de prétraitement (digestion protéinase K/SDS ou/et extraction d ADN) à réaliser avant son dosage. En effet, dans certains cas, les protéines ou les constituants du tampon de l échantillon peuvent interférer et inhiber le test. Une surcharge en ADN de l échantillon permettra de définir ce prétraitement. Par la suite, une étude de validation de l échantillon selon les textes réglementaires de l ICH (exactitude, précision, limite de détection, limite de quantification, spécificité) peut être proposée. Les critères à évaluer seront alors à définir avec notre laboratoire en fonction de vos exigences. Echantillon sous forme liquide ou lyophilisée. Volume à définir avec notre laboratoire en fonction du type d analyse demandée (qualification initiale, validation ou routine). A titre indicatif, 500 µl d échantillon est nécessaire pour une réaction. Page 12 sur 20

13 DETECTION DE VIRUS HUMAINS Détection de virus humains par technique qpcr et RT-PCR 72 heures Les techniques de PCR jouent un rôle croissant dans la détection, la quantification et/ou l'identification d'agents contaminants, notamment viraux. En effet, l'amplification de séquences nucléiques par PCR et la détection avec des sondes spécifiques permet de satisfaire aux exigences de sensibilité et de spécificité élevées. Le suivi de l'amplification en temps réel permet la quantification précise de l'acide nucléique recherché dans l'échantillon sur une vaste gamme de concentrations (7 à 8 Log). Nous développons également des tests à façon pour mesurer l'expression d'arn messagers d'intérêt. ECLC HAD ART ART MET HAV HBV HCV EBV CMV HSV HSV VZV HHV6A HHV6B HHV HHV HIV HIV HIV HIV HTLV HTLV HTLV HTLV PB Recherche d effets cytopathiques sur lignées cellulaires Hep-2, MRC-5 et VERO Recherche de virus hemadsorbants Recherche d'activité RT (Q-PERT) Recherche d'activité RT (Q-PERT) et test de transmissibilité sur cellules cibles Recherche virale par microscopie électronique RT-PCR HAV (PCR temps réel) PCR HBV (PCR temps réel) RT-PCR HCV (PCR temps réel) PCR EBV (HHV-4) (PCR temps réel) PCR CMV (HHV-5) (PCR temps réel) PCR HSV1(PCR temps réel) PCRHSV2 (PCR temps réel) PCRVZV (PCR temps réel) PCR HHV-6A (PCR temps réel) PCR HHV-6B (PCR temps réel) PCR HHV-7 (PCR temps réel) PCR HHV-8 (PCR temps réel) PCR HIV-1 (PCR temps réel) RT-PCR HIV-1 (PCR temps réel) PCR HIV-2 (PCR temps réel) RT-PCR HIV-2 (PCR temps réel) PCR HTLV-1 (PCR temps réel) RT-PCR HTLV-1 (PCR temps réel) PCR HTLV-2 (PCR temps réel) RT-PCR HTLV-2 (PCR temps réel) PCR Erythrovirus B19 (PCR temps réel) Différents types d'échantillons peuvent être pris en charge : cellules, extraits ou produits dérivés de cellules (anticorps, protéines, ADN), suspensions virales... Page 13 sur 20

14 DETECTION DE VIRUS ANIMAUX Détection de virus animaux par technique qpcr et RT-PCR 72 heures Les techniques de PCR jouent un rôle croissant dans la détection, la quantification et/ou l'identification d'agents contaminants, notamment viraux. En effet, l'amplification de séquences nucléiques par PCR et la détection avec des sondes spécifiques permet de satisfaire aux exigences de sensibilité et de spécificité élevées. Le suivi de l'amplification en temps réel permet la quantification précise de l'acide nucléique recherché dans l'échantillon sur une vaste gamme de concentrations (7 à 8 Log). Nous développons également des tests à façon pour mesurer l'expression d'arn messagers d'intérêt. ECB ECS BVDV IBR BAV PI SV Recherche d'effets cytopathiques sur cellules BT Recherche d'effets cytopathiques sur cellules ST RT-PCR BVDV (PCR temps réel) PCR Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus (PCR temps réel) PCR bovine adenovirus (PCR temps réel) RT-PCR Parainfluenza 3 (PCR temps réel) PCR SV40 (PCR temps réel) Les autres tests virologiques in vitro sont en cours de développement ou en validation. Veuillez nous consulter pour de plus amples informations sur leur état d avancement. Différents types d'échantillons peuvent être pris en charge : cellules, extraits ou produits dérivés de cellules (anticorps, protéines, ADN), suspensions virales... Page 14 sur 20

15 QUARANTAINE CELLULAIRE QD Quarantaine Cellulaire et détection mycoplasmes 3-4 semaines Ce dispositif consiste à cultiver les cellules, animales ou humaines, en absence de tout antibiotique pendant 10 passages. A leur entrée en quarantaine, une première détection croisée des mycoplasmes est réalisée. Si les cellules sont «propres», elles entrent alors dans un premier cycle de 7 jours de quarantaine. Chaque cycle comporte 3 passages des cellules avec, en fin de cycle, un test direct de détection contre une contamination mycoplasmique. A la fin du troisième cycle, les cellules sont testées par PCR et épifluorescence indirecte. Si ce dernier test est négatif, les cellules sont considérées comme exemptes de toute contamination mycoplasmique et sont renvoyées à leur laboratoire d origine sous la forme d un flacon 25 cm². forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est à prévoir, réf. : DMC.05.01). Notes : Pour des quantités plus importantes de cellules ou pour un envoi sous forme congelée, adressez-vous directement à notre laboratoire qui vous précisera le coût et le temps nécessaire pour ces différentes opérations. Page 15 sur 20

16 BANQUE CELLULAIRE - CRYOCONSERVATION PC Production de cellules à façon Variable Ce service est destiné aux laboratoires et sociétés désireux d obtenir une production cellulaire externalisée. Clean Cells met en place des cycles d amplification de cellules à façon conformément aux BPL, notamment en ce qui concerne les tests anti-mycoplasme, de stérilité et de recherche d'endotoxines. Cette solution peut être utilisée pour réaliser des banques cellulaires de travail amplifiées à partir de cellules envoyées directement à nos laboratoires ou d un stock conservé dans nos locaux sous la forme d une banque sécurisée. Cette production cellulaire peut aussi convenir à la préparation d extraits protéiques, d ADN génomique ou d ARN totaux à partir d échantillons cellulaires animaux ou humains. forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est à prévoir, réf. : DMC.05.01). Note : Les cellules sont renvoyées au laboratoire soit sous la forme de flacons de culture subconfluents directement utilisables par nos clients, soit sous la forme d ampoules congelées ou encore d extraits. Page 16 sur 20

17 PRODUCTION CELLULAIRE BC Banque Cellulaire : Cryoconservation Location annuelle Ce service est destiné à permettre la conservation des cellules, animales ou humaines, en absence de tout antibiotique, sous la forme d ampoules stockées dans l azote liquide. Toutes les ampoules admises à entrer dans ce système de stockage sécurisé ont été testées et certifiées sans mycoplasme. A leur arrivée, les cellules sont testées contre toute contamination mycoplasmique par une double détection, puis congelées par abaissement progressif de leur température en présence d un agent cryoprotecteur. En parallèle à ces tests directs sur les cellules entrant dans notre système de banque, des tests de décongélation et de détection sur des lignées internes contrôles sont pratiquées régulièrement. forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est à prévoir, réf. : DMC.05.01). Note : Un minimum de 3 ampoules est nécessaire pour entrer dans la banque Clean Cells Page 17 sur 20

18 R&D : CARACTERISATION CELLULAIRE RD R&D : Caractérisation cellulaire Défini dans le cadre d une relation laboratoire Clean Cells laboratoire «partenaire», ce service permet aux sociétés qui le désirent d étudier certaines caractéristiques cellulaires comme l expression phénotypique, la prolifération en réponse à différents stimuli, le cycle cellulaire ou encore l apoptose. Suivant un cahier des charges établi en commun, Clean Cells met en œuvre les techniques nécessaires parmi une gamme performante d'analyse cellulaire : depuis le simple marquage en immuno-fluorescence jusqu à la microscopie confocale, en passant par la cytométrie en flux et la fluorimétrie. Les techniques de biologie moléculaire (Northern Blot, PCR, RT- PCR ) ou d'analyse biochimique (Western Blot, activité enzymatique, développement d'elisa ) sont également disponibles. Afin de définir le programme à mettre en œuvre, veuillez contacter le laboratoire. Page 18 sur 20

19 INGENIERIE DES LABORATOIRES CQ Ce service proposé aux laboratoires est dédié aux structures physiques et à la mise en place de Systèmes d Assurance de la Qualité adaptés à vos systèmes de travail. Clean Cells vous offre ainsi une solution modulable qui s articule autour de 3 grands axes respectant les spécificités et les exigences de votre laboratoire : Bases de données Réalisation de progiciels de gestion de laboratoire : conception de base de données paramétrées en fonction de votre organisation Progiciel : pour la gestion dédiée d une activité spécifique (matériel & maintenance, documentation qualité ) LIMS : (laboratory informatic management system) pour la gestion globale des activités du laboratoire Etudes d ingénierie Etudes techniques d ingénierie : Audits : Audit de l organisation de votre laboratoire dans son ensemble ou par zones techniques Etudes de flux : Etudes de flux concernant les échantillons, les personnes, les matériels, les stocks, les énergies, les déchets Pré-programmation & Programmation : Etudes de préprogrammation et de programmation de bâtiment de biotechnologie. Management de la Qualité Accompagnement Mise en place de Système d Assurance de la Qualité conforme à votre organisation et selon le ou les référentiels de votre choix ; une nouvelle fois, cette étude est dédiée à la mise aux normes de votre laboratoire en fonction des textes réglementaires en vigueur ou des reconnaissances que vous souhaitez obtenir. Accréditation Certification BPF BPL FDA Page 19 sur 20

20 FORMATION AUX BPCC FC FORMATION AUX BONNES PRATIQUES DE CULTURE CELLULAIRE OBJECTIFS Définir le terme de culture cellulaire Apprendre les règles pour une bonne pratique de la culture cellulaire (BPCC) Eviter les problèmes de contamination Déterminer les risques Identifier les aspects normatifs PERSONNES CONCERNEES Personnel d encadrement Techniciens de laboratoires, Ingénieur, Etudiants CONTENU Une Partie axée sur la théorie Introduction générale à la culture cellulaire : Une description précise des locaux et du matériel utilisé Une revue des techniques de culture cellulaire Expansion cellulaire Sélection cellulaire (cytométrie en flux, tri de cellules) Cryoconservation Une définition complète des gestes de BPCC Des notions d hygiène et sécurité, ainsi que des normes et d assurance qualité Partie axée sur la pratique : Le Comportement en salle de culture La Décongélation de cellules La Culture de cellules adhérentes La Culture de cellules en suspension La Congélation de cellules La mise en évidence des problèmes liées à de mauvaises manipulations PEDAGOGIE Cette formation présente des aspects théoriques et des aspects pratiques. Elle met en application directe la théorie exposée. Elle utilise une pédagogie active qui fait appel à la création de binômes pour chaque cycle de formation. Une démonstration est réalisée par l intervenant et est suivie par la mise en situation successive de chacun des membres du binôme. Le nombre réduit (4 personnes) par cycle de formation permet une optimisation du suivi de chaque participant. Intervenants - Marc MEICHENIN : Docteur en Biologie - Laurent FRUCHARD : Ingénieur Qualiticien Page 20 sur 20

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