Troponine - Myoglobine

Transcription

1 Troponine - Myoglobine Bilan du Contrôle de qualité Pro Bio Qual M. Manchon R. Meley JC Eynard D. Grafmeyer EPU 10 Avril 2006

2 Troponines

3 Plan Rappel de la structure et des formes circulantes Hétérogéneité des méthodes de dosages Résultats du Contrôle Pro Bio Qual

4 Structure du complexe

5 Les trois molécules de Troponine Troponine C 18 kda fixe le calcium, identique dans tous les muscles Troponine T 37 kda AA, isoformes cardiaque et squelettique 24 kda 210 AA, Troponine I fait partie du complexe régulateur, existe sous 3 isoformes dont l isoforme cardiaque

6

7 Myocyte Formes circulantes dans le sang, après nécrose précoces tardives myofibrille légende T libre cytosol I libre T C I C I Formes dégradées

8 Formes circulantes Juste après la nécrose cardiaque la troponine libre d origine cytosolique est retrouvée dans le sang Au pic, formes complexées, C-I ou C-I-T Présence de formes dégradées - Rôle des protéases lysosomiales - Les extrémités N et C de la Tn I sensibles à la protéolyse - Site de coupure en position 27 Phosphorylation et Oxydation des SH de la Tn I Problème des isoformes foetales

9 Difficultés des immunodosages Dosages Immunometriques (sandwich) en phase hétérogène Expression épitopique Calibration Anticoagulants Centrifugation Sensibilité

10 Expression épitopique Anticorps dirigés contre la partie cardiospécifique mais reconnaissent l ensemble des formes circulantes de façon hétérogène Les zones N et C terminales sont plus fragiles : proteolyse, phosphorylation Liaison avec la Tn C Liaison avec l héparine

11 Différents anticorps utilisés Molécule de Troponine I NH COOH AxSym Architect Advia Centaur Access AIA II Vitros ECI AIO = Dégradation ou phosphorylation = liaison I - C = partie la plus stable

12

13 Calibration Troponine I Le calibrant n est encore pas standardisé Matériau de référence international décidé par l AACC : complexe ternaire Tn I-T-C sous forme liquide titré par le NIST

14 Autres difficultés Anticoagulants : - EDTA chélate le Ca et provoque la rupture des complexes d où forte proportion de Troponine libre - Héparine semble modifier l interaction avec les anticorps d où résultats différents entre sérum et plasma Une centrifugation insuffisante peut conduire à des faux positifs à cause de débris d hématies Anticorps hétérophiles

15 Contrôle ponctuel Pro-Bio-Qual 4 enquêtes par an Tn I, Tn T, Myoglobine 3 niveaux de concentration Sérum humain surchargé en myoglobine et en complexe ternaire I-T-C Existe depuis 2003, nombre croissant d inscrits

16 Popularité des méthodes Troponine T Troponine I Elecsys Roche 24 réponses en 2002, 42 en 2006 Apparition du cardiac reader 202 réponses en 2002, 219 en 2006 Grand nombre de techniques

17 Popularité des techniques troponine I 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (biomérieux) Vitros ECi (Ortho Diagnostics)

18 Troponine T Précision interlaboratoires (CV %) CQ au lieu de

19 Troponine I Précision interlaboratoires (CV%) CV % Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (biomérieux) Vitros ECi (Ortho Diagnostics)

20 Précision en fonction des sérums de contrôle (2005) CV tr moy % 20,0 18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 Acces ( Beckman) Advia Centaur (Bayer) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott) AxSym (Abbott) Dimension (Dade) Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade) Vidas (Biomérieux) Vitros Eci (Ortho) contrôle seuil contrôle positif contrôle très positif

21 Différences inter techniques % de variation Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (biomérieux) Vitros ECi (Ortho Diagnostics)

22 Différences inter techniques % de variation Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (biomérieux) Vitros ECi (Ortho Diagnostics)

23 Cas de l AxSym et de l Architect Hypothèse G. Lefèvre AC Capture AC Révélation Si altération de la zone AxSym plus bas que Architect - Si altération ou mauvaise reconnaissance de la zone Perturbation des résultats sur les 2 - Si altération de la zone Pas de conséquence

24 Essais à faire Fabriquer des sérums de contrôle surchargés avec d autres formes de Troponine : formes libres, complexes binaires, formes phosphorylées, dégradées Tester en parallèle différentes techniques sur des sérums de patients obtenus au cours d une cinétique post infarctus du myocarde Evaluer les techniques en terme de sensibilité et de spécificité

25 Myoglobine

26 Plan Rappel de la Structure Méthodes de dosage Résultats du contrôle Pro Bio Qual Popularité Précision Exactitude Essai d intercalibration

27 Structure de la Myoglobine Protéine héminique de forme sphéroïde et de faible poids moléculaire (17,8 kda) Il n existe pas d isoforme cardiospécifique

28 Dosage de la Myoglobine Le dosage de la myoglobine est réalisé sur sérum ou plasma hépariné. La myoglobine est une molécule stable qui se conserve bien dans le sérum.

29 Méthodes de dosage Principe Néphélémétrie Turbidimétrie (20 % des techniques) Immunodosages avec marqueurs (79 % des techniques) Technique Réactif N Latex BN Intégra, Turbiquant AU Turbidimétrie Tinaquant Access Advia Centaur AIA Architect, Axsym Dimension, Stratus CS Elecsys Triage Vidas Fournisseur Dade Behring Dade Behring Olympus Roche Beckman Bayer Eurogenetics Abbott Dade Behring Roche Biosite BioMerieux

30 Popularité des méthodes 100% 80% 60% 40% 20% 0% Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring) Tinaquant (Roche Diagnostics) Vidas (biomérieux)

31 Précision Interlaboratoire CV % Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring) Tinaquant (Roche Diagnostics) Vidas (biomérieux)

32

33 Différences inter techniques 130 % Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics) Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring) Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring) Tinaquant (Roche Diagnostics) µg/l

34 Essai d intercalibration But : évaluer l importance de l étalonnage. Méthode : - préparation d une solution standard de myoglobine humaine dans 4% d albumine, soit une concentration de 250 µg/l de myoglobine (Échantillon U1). - préparation d un spécimen de concentration de l ordre de 60 µg/l (Échantillon U2). - analyse au cours d une même série. Résultats : l échantillon U2 est recalculé en utilisant U1 comme standard.

35 Essai d'intercalibration Vidas Tinaquant Stratus Opus Grande dispersion des Résultats de U1 et U2 Analyseur Intégra Elecsys Dimension Turbitimer U2 U1 BN Essai de recalibration à partir de U1 pris comme étalon à 250 µg/l Axsym AIA Advia Access Myoglobine µg/l

36 Résultats Résultats U2 : bruts Essai d intercalibration Résultats U2 corrigés

37 Conclusions Pas de standardisation Précision des techniques acceptable Grande variabilité inter technique Suivi des patients avec la même technique Méthode de dépannage identique à la technique de routine

38 Bibliographie Recommandations sur la prescription, le dosage et l interprétation des troponines cardiaques Travail du Groupe de travail mixte SFBC CNBH «Troponines» ABC (3) : Les Troponines et la Myoglobine - Fiche Immunoanalytique - O. Gaillard Cahiers de formation Les marqueurs cardiaques n Standardization of immunoassay for mesurement of myoglobin in serum. M. Panteghini et coll. Clin Chimica Acta 341 (2004)