Découvrir des tests immunitaires :

Transcription

1 Découvrir des tests immunitaires : 1- Le test ELISA (acronyme de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) : tester la présence d Anticorps dans un sérum inconnu Rendez-vous sur la page internet : Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique ; il permet de détecter la présence des anticorps sécrétés en réponse à une infection, par l apparition d une coloration. Cliquez sur «détection d anticorps anti BSA» (=sérum albumine bovine). Notez votre protocole permet de tester les deux sérums A et B. Ces sérums présentent-ils des Anticorps anti BSA? Voici une plaque de Test Elisa anti BSA. Repérer si le lapin testé présente des Anticorps anti BSA puis déterminer le titre d Anticorps s il y a lieu. 2- Le Western Blot Télécharger le logiciel VIH1 sur le site SVT-Edu.net (avant dernier logiciel). La technique du Western Blot est une technique d immuno-empreinte souvent utilisée pour confirmer une séropositivité VIH d un test Elisa. Les protéines du virus étudié (ici le VIH) sont extraites du virus puis séparée par électrophorèse sur Gel. Les protéines vont alors migrer sur le gel selon leur masse molaire. Une série de techniques permettra le transfert des protéines du gel sur un film de nitrocellulose. Le film est découpé puis placé dans une gouttière et enfin mis en présence avec le sérum du patient à tester. Les anticorps du sérum vont alors pouvoir se fixer sur les protéines virales. Après un lavage pour ne sélectionner que les anticorps cherchés, des anticops anti-anticorps liés à une enzyme sont ajoutés ( commee pour Elisa). Un substrat sera ajouté après rinçage. Le substrat change de couleur en présence de l enzyme révélant ainsi des bandes de couleur. Le test est positif s il présente des anticorps dirigés contre au minimum deux protéines de l enveloppe du virus (gp120,gp160 ou gp41 pour le VIH) ainsi que la protéine p24. Le test est négatif si aucune bande n apparait. Observez le test Westerne blot proposé et répondre au QCM du logiciel. Interprétez les tests western blot des deux individus ci-après.

2 D'après F. Jauzein, Inrp, access et SVT TS, Nathan, Périlleux. La réponse adaptative cellulaire Lorsqu un virus a attaqué des cellules, d autres acteurs de l immunité que les anticorps entrent en action : les lymphocytes T Cytotoxiques. Répondre aux questions p 289 de votre livre.

3 Correction : 1- Le principe de l ELISA indirect consiste à détecter la présence d un anticorps spécifique dans un échantillon. Pour cela nous avons besoin : D un antigène connu spécifique à l anticorps recherché D un échantillon à analyser D un anticorps secondaire anti IgG couplé à une peroxydase (cet anticorps va reconnaitre spécifiquement les anticorps IgG) Du substrat spécifique à l enzyme, ici du TMB. Le test comporte quatre étapes principales : Fixation de l antigène : L antigène connu, spécifique à l anticorps recherché, est incubé sur une plaque de microtitration. L antigène va se fixer de manière électrostatique au fond des puits. Ils sont ensuite lavés pour enlever les antigènes non fixés.> Fixation de l anticorps à doser : On incube notre échantillon à doser (sérum contenant l anticorps), ainsi que nos standards (solution contenant des concentrations connues d anticorps). Les anticorps spécifiques vont se fixer aux antigènes. Un lavage des puits est nécessaire pour enlever les anticorps non fixés. Fixation de l anticorps de détection : On incube ensuite un anticorps secondaire couplé à une peroxydase. C est un anti IgG qui va donc reconnaitre l anticorps primaire. Un lavage des puits est nécessaire pour enlever les anticorps secondaires non fixés. Révélation : On incube un substrat spécifique à l enzyme qui, si la réaction est positive (présence de l anticorps recherché), va être transformé et induire une coloration bleue. L intensité de la coloration est proportionnel à la quantité d enzyme présente et donc à la concentration d anticorps recherchés.

4 Peroxydase : La peroxydase est une enzyme de type oxydase, permettant la dégradation des peroxydes. L oxydation de divers substrats permet d obtenir un composé chromogénique comme produit final. Les puits 1 à 6 sont utilisés pour la courbe standard, le puits 7 est le témoin négatif et enfin le puits 8 sera pour notre échantillon à doser. Le lapin est séropositif à l albumine de Bœuf (coloration bleu). Il y a correspondance avec le puis C4 (précision avec chromatographie).il possède une présence d anticorps titré à 1/5000.

5 Résultats des tests de l animation : Le patient A est séropositif, le second séronégatif.

6 1- Le Western Blot

7 Résultats du Western blot Individu A Les résultats obtenus avec le sérum de l'individu A au 03/01 sont identiques à ceux du témoin. À cette date, l'individu A est séronégatif. En revanche, quelques réactions colorées apparaissent sur la bandelette testée au 04/02 : l'individu A possède désormais des anticorps contre les protéines gp 160, p 55, p 40 et p 24, mais il ne possède pas d'anticorps contre une deuxième glycoprotéine membranaire ni contre une enzyme virale. Ces réactions sont insuffisantes pour confirmer la séropositivité. Au 11/04, les réactions colorées se sont beaucoup accentuées sur la bandelette et l'individu A est devenu séropositif de façon certaine : il présente des anticorps contre au moins deux glycoprotéines membranaires (gp 160 et gp 120 par exemple), contre au moins une protéine membranaire ou interne (p 55 par exemple) et une enzyme virale (p 34 par exemple). Individu B Le sérum de l'individu B testé au 15/01 contient de nombreux anticorps anti-vih : on retrouve en particulier les anticorps précédemment cités pour l'individu A. Conformément à la définition proposée au bas du document, l'individu B se révèle séropositif confirmé au 15/01. On note cependant qu'il ne semble plus l'être au 12/07 : les résultats du test qu'il a subi ne révèlent que quelques anticorps sériques, insuffisants pour caractériser une séropositivité... mauvais signe, semble être en phase Sida.