Flashkit Microcystines

Transcription

1 Outil de détection d des Microcystines Aurélie SEIGNARD Mars 2009

2 Plan 1. Présentation de la société Agdia-Biofords 2. Principe d un kit de diagnostic sous forme de bandelette 3. Le Flashkit Microcystines 2

3 1. Présentation de la société Agdia-Biofords 3

4 Agdia-Biofords Spécialiste du diagnostic végétal : Développement et commercialisation de kits ELISA ou Flashkits Fondée en 1988 par le Dr Marc Masson Un des membres fondateurs du Génopole d Evry Partenariat étroit avec Agdia,Inc.(USA) 4

5 Gamme des produits Agdia-Biofords Kits ELISA : OGM Pathogènes végétaux Hormones végétales Flashkits : OGM Pathogènes végétaux Toxines de l eau 5

6 2. Principe d un d kit de diagnostic sous forme de bandelette A. SEIGNARD 6

7 Les bandelettes et leurs domaines d applicationd Diagnostics chez l Homme Hépatite B, VIH, Malaria, Sífilis, Leptospirose, Grippe Aviaire, H-pylori, Grossesse, Détection stupéfiants de Diagnostics vétérinaires SécuritéAlimentaire Vache Folle, Aflatoxines Diagnostics Agricoles Évènements transgéniques, de pathogènes => Basées sur une réaction Ac/Ag 7

8 Structure d une d bandelette, Lateral Flow Membrane d absorption Ligne test Ligne contrôle Membrane de nitrocellulose Membrane conjuguée Membrane de l échantillon 1-Membrane de l échantillon: Point d entrée de l échantillon (conditions de préparation de l échantillon, changement de tampon ); 2-Membrane conjuguée: Contient les billes colloïdes d or couplées aux anticorps de capture. Ces billes se dissolvent au contact de liquide. La taille des billes se situe entre 30-50nm. 3-Membrane de nitrocellulose: Composée de pores mesurant de 0,1 à1µm de diamètre. Selon les anticorps utilisés, il est nécessaire de varier la taille des pores. 4-Membrane d absorption: Peut être qualifiée de «pompe»qui permet d absorber le surplus de liquide qui a migréle long de la membrane. 8

9 Lateral Flow ou Immunochromatographie Il existe différents formats de bandelettes : Avec des anticorps liés => réaction de type ELISA sandwich Avec des antigènes liés => réaction de type ELISA de compétition 9

10 Principe du Lateral Flow A. Type ELISA Sandwich Anticorps de capture marqué à l or colloïdal Deux Lignes Résultat POSITIF Anticorps dirigé contre l antigène Ligne Test Anticorps dirigé contre l anticorps Ligne Contrôle Membrane de Nitrocellulose 10

11 Anticorps de capture marqué à l or colloïdal B. Type ELISA de Compétition Cas n 1. n Pas d antigd antigène ne dans l él échantillon Deux Lignes Résultat NEGATIF Antigène Ligne Test Anticorps dirigé contre l anticorps Ligne Contrôle Membrane de Nitrocellulose 11

12 Anticorps de capture marqué à l or colloïdal Type ELISA de Compétition Cas n 2. n Faible quantité d antigènes nes dans l él échantillon Antigène Ligne Test Anticorps dirigé contre l anticorps Ligne Contrôle Membrane de Nitrocellulose A. SEIGNARD 12

13 Type ELISA de Compétition Cas n 3. n Beaucoup d antigd antigènes nes dans l él échantillon Anticorps de capture marqué à l or colloïdal Une ligne Résultat POSITIF Antigène Ligne Test Anticorps dirigé contre l anticorps Ligne Contrôle Membrane de Nitrocellulose A. SEIGNARD 13

14 3. Le Flashkit Microcystines A. SEIGNARD 14

15 Description du Flashkit Microcystines Le Kit : Pipeteur et son cône Bandelette Microtube préencoaté Temps de réalisation du test : 1 heure (prélèvement inclus) Conservation : 1 an entre 4 et 6 C A. SEIGNARD 15

16 Protocole d utilisationd 1. Chauffer l échantillon jusqu à ébullition 1 2. Disperser 100µL d échantillon dans le microtube 2 3. Agiter et laisser incuber 10 min 3 4. Insérer le Flashkit et attendre 25 min pour lire le résultat 4 A. SEIGNARD 16

17 Interprétation tation du résultat r de la bandelette Augmentation de la concentration en microcystines Microcystin Agdia Microcystin Agdia Microcystin Agdia Microcystin Agdia Ligne contrôle Ligne test Test négatif Risque Faible Risque modéré Test positif Risque élevé A. SEIGNARD Augmentation du risque lié aux Microcystines 17

18 Validations Techniques Collaboration avec Luc Brient de l Université de Rennes 1 Collaboration avec la Direction du Suivi de l État de l Environnement du Québec A. SEIGNARD 18

19 Quelques données sur la validation effectuée àrennes Corrélation entre les résultats bandelettes et les résultats HPLC effectués en parallèle

20 Conclusions -Flashkit Microcystines -Fiable - Facile à utiliser - Rapide - résultat en une heure (prélèvement inclus) - Peut être utilisé n importe où - Economique Outil qualitatif de criblage A. SEIGNARD 20

21 Merci pour votre attention Aurélie SEIGNARD Agdia-Biofords Biofords 5 rue Henri Desbruères res Genavenir Evry Cedex France Tel.: Fax :